醫(yī)藥衛(wèi)生非發(fā)酵菌課件

1、 非發(fā)酵革蘭陰性桿菌第1頁(yè)，共39頁(yè)。非發(fā)酵(Nonfermenters)革蘭陰性桿菌非發(fā)酵菌是一群需氧、無(wú)芽孢、氧化分解利用糖類(lèi)或是不利用糖做為能量來(lái)源的革蘭陰性桿菌。通常所講的非發(fā)酵菌指在KIA表面24小時(shí)內(nèi)能夠生長(zhǎng)，在底部不生長(zhǎng)的需氧革蘭陰性桿菌。第2頁(yè)，共39頁(yè)。主要的非發(fā)酵革蘭陰性桿菌屬假單胞菌屬：產(chǎn)堿桿菌屬黃桿菌屬：無(wú)色桿菌屬莫拉菌屬：不動(dòng)桿菌屬:莫拉菌屬叢毛菌屬第3頁(yè)，共39頁(yè)。 葡萄糖氧化-發(fā)酵（O/F試驗(yàn)）第4頁(yè)，共39頁(yè)。初步分群鑒定試驗(yàn)1、葡萄糖氧化-發(fā)酵（O/F試驗(yàn)） OF培養(yǎng)基:蛋白胨和糖類(lèi)的比例為1:5而不同于發(fā)酵菌的1:2。2、動(dòng)力半固體培養(yǎng)基:應(yīng)只穿刺培養(yǎng)基頂部

2、4mm，在培養(yǎng)4-6小時(shí)后首次觀察結(jié)果,24和48小時(shí)后再次觀察結(jié)果。更準(zhǔn)確的方法是濕片法和鞭毛染色。3、氧化酶陽(yáng)性 但并非所有氧化酶陽(yáng)性的革蘭陰性桿菌都是非發(fā)酵菌。第5頁(yè)，共39頁(yè)。常見(jiàn)非發(fā)酵菌革蘭陰性桿菌的初步分群鑒定試 驗(yàn) 假單胞 無(wú)色桿 黃桿 不動(dòng)桿 產(chǎn)堿桿 叢毛 莫拉 菌屬 菌屬 菌屬 菌屬 菌屬 菌屬 菌屬氧化酶 + + +/- - + + +/- 葡萄糖氧化-發(fā)酵（O/F試驗(yàn)） 0/- 0 0 0/- - - - 動(dòng)力 +/- +/- +/- - + + -第6頁(yè)，共39頁(yè)。一、假單胞菌屬(Pseudomonas)直或微彎無(wú)芽孢革蘭陰性桿菌，氧化酶陽(yáng)性，動(dòng)力+（一個(gè)或多個(gè)極鞭毛）

3、，嚴(yán)格需氧，氧化利用葡萄糖、觸酶陽(yáng)性、 MAC生長(zhǎng)，水溶性色素。第7頁(yè)，共39頁(yè)。 銅綠 熒光 惡臭 斯氏 曼多辛 假產(chǎn)堿 產(chǎn)堿 氧化酶 99 97 100 100 100 100 96 麥康凱 100 100 100 100 100 100 96 42 100 0 0 69 100 94 0硝酸鹽還原 98 19 0 100 100 100 94青膿素 65 91 82 0 0 0 0精氨酸 100 97 100 0 100 78 12 明膠液化 82 100 0 0 0 0 0葡萄糖 97 100 100 96 100 9 0木糖 90 100 100 93 75 18 0乳糖 1 24

4、25 0 0 0 0麥芽糖 1 2 31 100 0 0 0甘露醇 70 53 25 89 0 0 0鞭毛數(shù) 1 1 1 1 1 1 1第8頁(yè)，共39頁(yè)。銅綠假單胞菌（P.aeruginosa）分布廣泛，是非發(fā)酵菌中最具臨床意義的細(xì)菌，也是醫(yī)院內(nèi)感染最多見(jiàn)的細(xì)菌，主要引起條件感染。感染多發(fā)生于燒傷、急性白血病、器官移植病人及靜脈藥癮者，感染多位于潮濕部位，如氣管造口、留置的導(dǎo)管、創(chuàng)面、外耳道、角膜和滲出性皮膚傷口處囊性纖維化病人呼吸道分離的銅綠假單胞菌具有生物膜（其產(chǎn)生的大量藻酸鹽包圍了菌體所致），導(dǎo)致本病的治療困難和高死亡率。其淡藍(lán)色膿性滲出物及聞到綠膿素的生姜樣氣味具有特征性。第9頁(yè)，共3

5、9頁(yè)。生物學(xué)特性 直或微彎桿菌，有莢膜，單端有1根鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑 嚴(yán)格需氧，最適生長(zhǎng)溫度35， 4不生長(zhǎng)，42生長(zhǎng)嚴(yán)格需氧，氧化利用葡萄糖、 MAC生長(zhǎng)第10頁(yè)，共39頁(yè)。血平板上形成大而扁平，濕潤(rùn)，邊緣不齊，有金屬光澤，有生姜?dú)馕兜幕揖G色菌落，并形成透明溶血環(huán)。有時(shí)可產(chǎn)生水滴樣樣菌落，無(wú)色素不溶血（囊性纖維化病人）第11頁(yè)，共39頁(yè)。色素形成在普通瓊脂平板上產(chǎn)生特征性的藍(lán)綠色水溶性綠膿素和帶熒光水溶性青膿素(熒光素)（熒光假單胞菌和惡臭假單胞菌也可產(chǎn)生）。熒光素（青膿素）第12頁(yè)，共39頁(yè)。銅綠假單胞菌的分型藥敏分型血清學(xué)分型：菌體O抗原噬菌體分型質(zhì)粒指紋圖譜分析重復(fù)序列PCR脈沖場(chǎng)凝膠電泳

6、第13頁(yè)，共39頁(yè)。質(zhì)粒指紋圖譜分析第14頁(yè)，共39頁(yè)。銅綠假單胞菌的耐藥性細(xì)菌耐藥機(jī)制外膜通透性降低產(chǎn)生滅活酶或鈍化酶主動(dòng)外排系統(tǒng)將抗生素泵出胞外抗菌藥物作用靶位改變各種抗生素治療銅綠假單胞菌所致感染過(guò)程中都可能發(fā)生耐藥。第15頁(yè)，共39頁(yè)。銅綠假單胞菌感染的控制易感危重病人不應(yīng)安排在已有過(guò)銅綠假單胞菌感染的病房各種抗菌藥物、溶液、軟膏、器械等應(yīng)避免被銅綠假單胞菌污染采取適當(dāng)?shù)姆中头椒▽?duì)感染菌株進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查和監(jiān)控第16頁(yè)，共39頁(yè)。熒光假單胞菌(P.fluorescens)產(chǎn)青膿素，但不能產(chǎn)綠膿素， 4生長(zhǎng), 42 不生長(zhǎng), 最適溫度25-30 。見(jiàn)于水和土壤中，都可作為咽部的正常菌群存

7、在，是人類(lèi)少見(jiàn)的條件致病菌熒光假單胞菌和污染的血制品關(guān)系密切，可見(jiàn)于近期接受過(guò)血液制品而致菌血癥的患者。第17頁(yè)，共39頁(yè)。 嗜麥芽窄食單胞菌窄食單胞菌屬,假單胞菌科，嗜麥芽窄食單胞菌分布廣泛，可引起條件感染是一種重要的醫(yī)院獲得性病原體，本菌可分離于幾乎所有部位，最常見(jiàn)的是呼吸道.引起本菌定植和感染的危險(xiǎn)因素有：機(jī)械通氣、廣譜抗生素的預(yù)防性應(yīng)用、化療、插管和中性粒細(xì)胞減少等。第18頁(yè)，共39頁(yè)。嗜麥芽窄食單胞菌嗜麥芽窄食單胞菌為有動(dòng)力桿菌，具有叢極鞭毛，血平板上菌落粗糙呈淡黃色或淺綠色，有氨氣味。根據(jù) 賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)陽(yáng)性和DNA酶陽(yáng)性、氧化酶陰性可很容易與其他假單胞菌區(qū)別，本菌葡萄糖氧化緩慢

8、，可快速氧化分解麥芽糖。第19頁(yè)，共39頁(yè)。 不動(dòng)桿菌屬?gòu)V泛分布于自然和醫(yī)院環(huán)境中，能在潮濕和干燥的表面生存，也可存在于健康人的皮膚.無(wú)動(dòng)力、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陰性醋酸鈣不動(dòng)桿菌鮑曼不動(dòng)桿菌第20頁(yè)，共39頁(yè)。鮑曼不動(dòng)桿菌在非發(fā)酵菌中本菌是在臨床標(biāo)本中的分離陽(yáng)性率僅次于銅綠假單胞菌而居第二位的條件致病菌，通常不動(dòng)桿菌對(duì)健康人體不致病，但對(duì)體弱者可引起感染。本菌能夠獲得多重耐藥性和能夠在大多數(shù)環(huán)境表面生存，所以由本菌引起的醫(yī)院獲得性感染有增加的趨勢(shì)，醫(yī)院獲得性感染最常見(jiàn)的是呼吸道或手術(shù)部位、應(yīng)用器械或ICU的住院患者。第21頁(yè)，共39頁(yè)。產(chǎn)堿桿菌屬氧化酶陽(yáng)性的革蘭氏陰性桿菌，不分解糖類(lèi),周鞭

9、毛，在含蛋白的肉湯中產(chǎn)氨。有醫(yī)學(xué)意義的產(chǎn)堿桿菌屬主要有木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種A.xylosoxidans subsp. Xylosoxidans木糖氧化產(chǎn)堿桿菌脫硝亞種A.xylosoxidans subsp.denitrificans糞產(chǎn)堿桿菌A.faecalis皮氏產(chǎn)堿桿菌A.piechaudii第22頁(yè)，共39頁(yè)。糞產(chǎn)堿桿菌大部分感染是條件致病，主要來(lái)自潮濕環(huán)境，如霧化器、呼吸機(jī)和灌洗液等，血、痰、尿是常見(jiàn)發(fā)現(xiàn)部位。第23頁(yè)，共39頁(yè)。氧化酶陰性，無(wú)動(dòng)力不動(dòng)桿菌屬氧化酶陰性，有動(dòng)力洋蔥伯克菌(93%氧化酶弱陽(yáng)性)唐菖蒲伯克菌淺黃華麗單胞菌棲稻黃素單胞菌少動(dòng)鞘氨醇單胞菌(94%氧化酶

10、陽(yáng)性)嗜麥芽窄食單胞菌氧化酶陽(yáng)性，無(wú)動(dòng)力動(dòng)物傷口伯杰菌短穩(wěn)桿菌尿道寡源菌威克菌屬莫拉菌屬華麗桿菌屬氧化酶陽(yáng)性，有動(dòng)力產(chǎn)堿桿菌洋蔥伯克菌皮氏伯克菌類(lèi)鼻疽伯克菌銅綠假單胞菌及其他大部分假單胞菌非發(fā)酵菌第24頁(yè)，共39頁(yè)。 實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)和鑒定非發(fā)酵菌的原則：1、除了銅綠假單胞菌、鼻疽伯克菌、假鼻疽伯克氏菌和腦膜膿毒華麗桿菌，非發(fā)酵菌的毒力一般較低，易于感染非發(fā)酵菌的特定環(huán)境和疾病因素包括：1）惡性腫瘤、導(dǎo)管插入術(shù)、氣管開(kāi)口術(shù)、淋巴穿刺，透析、灌洗和瓣膜置換等。2）長(zhǎng)期皮質(zhì)類(lèi)固醇、抗生素和抗腫瘤治療。3）患有代謝性或慢性感染性疾病4）燒傷、開(kāi)放性傷口及各種滲出性損傷。第25頁(yè)，共39頁(yè)。2、大多數(shù)非發(fā)酵

11、菌在不同環(huán)境中都有其自然定植部位，可成為人類(lèi)感染的潛在傳染源。1）醫(yī)院環(huán)境中的各種水源。這些液體經(jīng)常與住院病人的粘膜和其他身體部位發(fā)生直接接觸。2）各種儀器用具，如麻醉設(shè)備、鑷子、體溫計(jì)、紗布、拖把、毛巾等。3）身體的某些潮濕部位，如腹股溝、腋窩、肘窩及甲溝等在夏天易受感染。 4）各種家畜、寵物可致其主人感染。第26頁(yè)，共39頁(yè)。3、某些非發(fā)酵菌可引起特定的感染，敗血癥可由任何非發(fā)酵菌引起，而大部分非發(fā)酵菌可致肺炎或支氣管炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、尿道炎、手術(shù)和外傷后傷口感染、結(jié)膜炎等。4、臨床分離的革蘭陰性桿菌，如血平板上菌落小，KIA或TSA培養(yǎng)基生長(zhǎng)，氧化酶陽(yáng)性可懷疑為非發(fā)酵菌。5、很多非發(fā)酵菌

12、對(duì)抗生素具有某種方式的多重耐藥性，了解這些耐藥方式有助于提供此菌株屬于某種非發(fā)酵菌的最初線索。第27頁(yè)，共39頁(yè)。常見(jiàn)菌種的鑒定（一）排除法臨床標(biāo)本中最常見(jiàn)的非發(fā)酵菌是銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌和嗜麥芽窄食單胞菌。大部分菌株只需通過(guò)觀察和少數(shù)生化實(shí)驗(yàn)便可很容易鑒定，這種快速鑒定不僅可快速為臨床醫(yī)生提供信息，而且省時(shí)、省力、經(jīng)濟(jì)。第28頁(yè)，共39頁(yè)。1.銅綠假單胞菌95%以上的銅綠假單胞菌可通過(guò)觀察以下幾個(gè)特征而得到鑒定：氧化酶陽(yáng)性（10秒內(nèi)）。菌落較大，生姜樣氣味。綠膿素產(chǎn)生。少數(shù)銅綠假單胞菌可產(chǎn)生其他顏色色素，如紅膿素（紅色），黑膿素（棕色到黑色），青膿素（黃色）。第29頁(yè)，共39頁(yè)。銅綠假

13、單胞菌鑒定無(wú)色素/只產(chǎn)生熒光素的銅綠假單胞菌：42能夠生長(zhǎng)乙酰胺的堿化作用硝酸鹽、亞硝酸鹽的脫氮作用極性單鞭毛，有動(dòng)力大多數(shù)銅綠假單胞菌可通過(guò)觀察典型的大菌落，在首次分離的培養(yǎng)基上呈藍(lán)綠色而很容易得到鑒定，進(jìn)一步檢查生姜樣氣味、產(chǎn)熒光素和氧化酶試驗(yàn)，其他附加試驗(yàn)一般不需要。第30頁(yè)，共39頁(yè)。2、鮑曼不動(dòng)桿菌鮑曼不動(dòng)桿菌是臨床實(shí)驗(yàn)室第二位最常見(jiàn)的非發(fā)酵菌，下列特征可對(duì)其做預(yù)先鑒定：1）麥康凱平板上生長(zhǎng)良好（菌落可呈輕微粉紅色）2）氧化酶陰性3）氧化分解葡萄糖，產(chǎn)酸4）氧化分解乳糖，產(chǎn)酸5）無(wú)動(dòng)力6）對(duì)青霉素耐藥性第31頁(yè)，共39頁(yè)。 鮑曼不動(dòng)桿菌最初的線索是對(duì)臨床標(biāo)本直接革蘭染色，觀察到微小（

14、1.00.7）雙球菌。取自瓊脂或肉湯培養(yǎng)基的菌株革蘭染色，則菌體較大，更似桿菌。在血平板上鮑曼不動(dòng)桿菌不產(chǎn)生色素菌落在麥康凱平板上則呈微弱的粉紅色，在伊紅美藍(lán)瓊脂上呈藍(lán)色。耐青霉素，可與對(duì)青霉素高度敏感的莫拉菌（革蘭染色通常也為球桿狀）相區(qū)別第32頁(yè)，共39頁(yè)。其他非發(fā)酵菌的鑒定方法（二）分組法如果一株非發(fā)酵革蘭陰性桿菌不是銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌和嗜麥芽窄食單胞菌，必須增加其他的試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行種的鑒定根據(jù)動(dòng)力和氧化酶將各種臨床上重要的非發(fā)酵菌分為四個(gè)功能部分第33頁(yè)，共39頁(yè)。第34頁(yè)，共39頁(yè)。發(fā)現(xiàn)歷史：1976年美國(guó)費(fèi)城爆發(fā)軍團(tuán)病，1977年分離出細(xì)菌，1978年命名為嗜肺軍團(tuán)菌（L. pneumophila)第35頁(yè)，共39頁(yè)。 軍團(tuán)菌屬（ Legionella）本菌為革蘭陰性桿菌，常規(guī)染色不易著色，姬美耐染色菌體為紅色，因培養(yǎng)條件不同有明顯多形性，有長(zhǎng)鞭毛，無(wú)芽孢莢膜需氧菌，首次分離需5%CO2，營(yíng)養(yǎng)要求嚴(yán)格，一般營(yíng)養(yǎng)瓊脂和血瓊脂上不生長(zhǎng)，須含有半胱氨酸和鐵離子，常用培養(yǎng)基為緩沖活性炭酵母瓊脂培養(yǎng)基（BCYE）,第36頁(yè)，共39頁(yè)。軍團(tuán)菌屬在BCYE培養(yǎng)基上3-5天可形成濕潤(rùn)、有光澤灰白色菌落，初期外觀呈刻花玻璃樣花紋，繼續(xù)培養(yǎng)消失生化反應(yīng)：在含糖培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，氧化酶弱陽(yáng)性，觸酶陽(yáng)性，