組培苗的褐化問題

1、組培苗的褐化問題很多種類的植物體中含有大量多酚類化合物，切取芽時(shí)的創(chuàng)傷會 激活組織中的多酚氧化酶，將多酚類物質(zhì)氧化為棕褐色的醍類物質(zhì)， 使外植體的切口處發(fā)生褐變，并會滲透到培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基褐化， 其結(jié)果是嚴(yán)重影響培養(yǎng)物的生長和分化，甚至造成培養(yǎng)物死亡。影響褐變的因素很多，植物的種類褐基因型、外植體的來源和生理狀 況以及培養(yǎng)基的成分都會不同程度的影響褐變的程度。一般木本植物 的外植體比較容易產(chǎn)生褐變現(xiàn)象，在成年樹尤其嚴(yán)重。培養(yǎng)基中含酚 過高會導(dǎo)致褐變，含過高濃度的無機(jī)鹽和肌醇也會加劇外植體的褐變。 6-芐氨基嘌吟（6-BA）和激動(dòng)素（立）也有誘導(dǎo)褐化的作用。強(qiáng)光和 高溫同樣會促進(jìn)褐化現(xiàn)象。為了

2、防止外植體的褐變，需要選取酚類化合物含量較低的實(shí)驗(yàn)材 料，選擇無機(jī)鹽含量較低，不加肌醇的培養(yǎng)基，并在較弱的光線或黑 暗的條件中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)基中加入抗氧化劑是防止褐變的有效措施。常用的抗氧化 劑有抗壞血酸（VC）、檸檬酸、半胱氨酸、二硫蘇糖醇和聚乙烯吡咯 烷酮（PVP ）等。可用抗氧化劑溶液預(yù)先處理外植體，或者在抗氧化 劑溶液中切割和剝離外植體。必要時(shí)還可以將幾種抗氧化劑結(jié)合使用。 也可以將抗氧化劑加入到培養(yǎng)基中。另一種方法是在培養(yǎng)基中加入 0.51%的活性炭，吸附對生長有抑制作用的褐色醍類物質(zhì)。應(yīng)當(dāng)注 意的是：活性炭也能吸附培養(yǎng)基中的激素類物質(zhì)，影響莖尖的分化和 生長，因此在使用活性炭的場

3、合，需要適當(dāng)提高培養(yǎng)基中激素的濃度。還有一種辦法是不斷地（每隔12d ）將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基 上，以擺脫老培養(yǎng)基中褐色物質(zhì)的不利影響。在使用液體培養(yǎng)基的情 況下，這種方法相當(dāng)有效。在培養(yǎng)基中添加活性碳可以防止植物組織自身的酚類物質(zhì)排 泌和變褐老化。對形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好作用。一般認(rèn)為，活性 碳主要吸附非極性物質(zhì)及色素大分子，可以減少一些有害物質(zhì)的影響， 但是具體吸附的選擇性很差，溫度低時(shí)吸附力增強(qiáng)，溫度高是吸附力 減弱，甚至?xí)馕?。通常使用濃度?.5-10g/L。加入活性炭后使 培養(yǎng)基變黑，對一些植物誘導(dǎo)生根有利。大量活性炭的加入會削弱瓊 脂的凝固能力，因此要多加些瓊脂。很細(xì)的活

4、性炭容易沉淀，因此通 常在瓊脂將要凝固時(shí)，需輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶。植物外植體組織在接種時(shí)的切割面會溢泌一些酚類物質(zhì)，在接 觸空氣中的氧氣后其會氧化為相應(yīng)的醍類物質(zhì)，產(chǎn)生可見的茶色、褐 色或黑色，此即謂“酚污染”。在木本植物，尤其是熱帶木本植物及 少量草本植物中，此現(xiàn)象較為嚴(yán)重。常用的防治措施如下：試用抗酚類氧化的藥劑（半胱氨酸及其鹽酸鹽、二硫蘇糖醇、 谷胱甘肽、抗壞血酸等。該類藥劑一般需用濃度為50-200mg/L。用 經(jīng)過濾滅菌的藥液洗滌剛切割的外植體傷口表面，或加入固體培養(yǎng)基 的表層，或?qū)偳懈畹耐庵搀w浸入其中一定時(shí)間）適當(dāng)降低培養(yǎng)基溫度。接種后先進(jìn)行一定時(shí)間的暗培養(yǎng)。及時(shí)轉(zhuǎn)接入新鮮培養(yǎng)基。選擇切取外植體部位等。經(jīng)驗(yàn)之談：1、易發(fā)生褐化的作物在進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，先進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)（即培養(yǎng)在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中）