a-羥丁酸脫氫酶a-HBDH操作規(guī)程SOP

1、a-羥丁酸脫氫酶（a-HBDH）操作規(guī)程（SOP一、用途本產(chǎn)品用于體外定量測(cè)定血清、血漿樣品中a -羥丁酸 脫氫酶（a HBDH的活性。二、臨床意義（一）概述a羥丁酸脫氫酶（a HBDH,酶編號(hào)為EC1.1.2.30 o 主要來源于心肌、腎和紅細(xì)胞。具活性表示LDH中能利用a羥丁酸為反應(yīng)基質(zhì)的酶活性，主要為LDH和LDH的活性。（二）臨床意義血清a-羥丁酸測(cè)定主要用于酮癥酸中毒的鑒別診斷 及跟蹤監(jiān)護(hù)。同時(shí)還可用于心肌梗死、肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞病變、 活動(dòng)性風(fēng)濕性心肌炎、急性病毒性心肌炎、溶血性貧血等疾 病的輔助診斷。三、檢驗(yàn)原理a -酮丁酸 + NADH H+ HBDH a -羥丁酸 + NADNAD

2、H的氧化速率與樣品中民HBDH活性成正比，在340nm波長處，通過連續(xù)監(jiān)測(cè)吸光度的下降速率（ A/min）,即可計(jì)算由樣品中a HBDH勺活性。 四、樣品血液樣品原則上采集晨起空腹血（禁食 12小時(shí)）；患者 處于平靜、休息狀態(tài)，減少患者由于運(yùn)動(dòng)、 飲食帶來的影響；靜脈采血時(shí)患者應(yīng)取坐位或臥位；止血帶使用后1分鐘內(nèi)采血，回血后立即松開；正確使用抗凝劑；防止溶血；防止過 失性采樣。樣品運(yùn)送過程中應(yīng)防止過度振蕩、防止樣品容器的破 損、防止樣品被污染、防止樣品及唯一性標(biāo)志的丟失和混淆， 防止樣品對(duì)環(huán)境的污染、水分蒸發(fā)。a HBDHM定樣品為不溶血的血清、 血漿（肝素或EDTA 抗凝）。樣品應(yīng)在低溫條件

3、下運(yùn)輸保存，樣品中a HBDH在 28c保存可穩(wěn)定7天。五、試劑（一）試劑組成R:試劑1還原型輔酶I （ NADH0.33mmol/LR:試劑2a -酮酸16.5 mmol/L不同批號(hào)試劑中各組份不能互換。（二）試劑準(zhǔn)備Ri和R試劑為即用型液體試劑，開瓶裝載即可使用，用 后應(yīng)及時(shí)冷藏保存。（三）試劑的保存及穩(wěn)定性1.不能冰凍試劑。2,未開瓶的Ri和R試劑應(yīng)在28 c密閉避光貯存，穩(wěn) 定期為瓶簽標(biāo)示的有效期。開瓶后的試劑應(yīng)在 28 c保存， 穩(wěn)定期為30天。（四）試劑性能可接受的指標(biāo)空白吸光度：試劑空白在主波長340nm副波長 405nm處，10mm徑下，吸光度值n 1.000。（五）試劑使用中

4、的注意事項(xiàng).嚴(yán)格按照試劑說明書的要求使用試劑。.試劑28c密閉避光貯存可穩(wěn)定至瓶簽標(biāo)示的有效 期。對(duì)超過有效期的試劑不能使用。.嚴(yán)禁放置0C以下保存。.試劑開瓶后，如果長期放置，會(huì)吸收空氣中的二氧 化碳，導(dǎo)致pH值下降，造成測(cè)定值不準(zhǔn)確，因此請(qǐng)盡快使 用。.當(dāng)試劑變混濁或被污染或空白吸光度值V1.000時(shí)，表明試劑已失效，應(yīng)棄去。.裝載試劑時(shí)防止產(chǎn)生氣泡，否則結(jié)果無法保證。.不同批號(hào)的試劑之間盡管批間差很小，但仍然不能 混用，否則試劑的穩(wěn)定性將無法保證。（六）預(yù)防危險(xiǎn)發(fā)生的注意事項(xiàng)使用時(shí)避免與人體接觸，當(dāng)試劑誤入口中或眼中，或者 附著到皮膚上的時(shí)候，請(qǐng)立即用大量清水沖洗，如有必要，請(qǐng)接受醫(yī)生的

5、治療。（七）處理廢棄物時(shí)的注意事項(xiàng)試劑反應(yīng)后所產(chǎn)生的廢液及使用后的包裝材料應(yīng)集中 收集后按照相關(guān)法規(guī)進(jìn)行廢物處理。六、操作步驟.基本參數(shù)方法：速率法樣品/試劑：1/50主波長：340nm 反應(yīng)溫度：37 C副波長：405nm 反應(yīng)時(shí)間：10min.操作（1）二步法加入物空白（B）校準(zhǔn)（C）測(cè)定（U） TOC o 1-5 h z 樣品（以l ）-6校準(zhǔn)品（以l ）-6-蒸儲(chǔ)水/生理鹽水6-（以l ）試劑 R （以 l ）240240240混勻，37c恒溫5分鐘。試劑 R （以 l ）606060混勻，37c恒溫1分鐘，340nm波長處以空白管調(diào) 零測(cè)定初始吸光度，然后準(zhǔn)確測(cè)定平均每分鐘吸光度變

6、化率 A/min 。（2） 一步法工作液配制：根據(jù)測(cè)定所需試劑量， 取Ri和R按4:1比加入物空白（B）校準(zhǔn)（C）測(cè)定（U） TOC o 1-5 h z 樣品（以l ）-20校準(zhǔn)品（以l ）-20-蒸儲(chǔ)水/生理鹽水（以20-l ）工作液（以 l ）100010001000混勻，37c恒溫1分鐘，340nm波長處以空白管調(diào)零 測(cè)定初始吸光度，然后準(zhǔn)確測(cè)定平均每分鐘吸光度變化 率4 A/min。.操作流程圖空白調(diào)零 時(shí)間： 溫度:37 卜延遲中 測(cè)定嬤主波長:340nm副波長:405nm5分鐘 1分鐘1-2分鐘R1:240 ii lR2:60樣品:6 g l g l.計(jì)算樣品HBD麗性（U/L）

7、x F=A/min理論F值：F=-8199注：由于理論F值是在理想條件下計(jì)算由的，每個(gè)實(shí)驗(yàn) 室使用儀器和測(cè)定條件都不一樣，故如果用理論F值計(jì)算,可能存在偏差，應(yīng)使用校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)。七、參考值范圍72-182 U/L八、注意事項(xiàng)（一）本試劑盡管具有較好的抗交叉污染能力，但仍應(yīng)根據(jù) 儀器性能及實(shí)驗(yàn)室條件做好防止交叉污染的工作。（二）試劑與樣品用量可根據(jù)不同儀器的需要，在試劑樣品 體積比例不變的條件下，適當(dāng)增加或減少試劑與樣品的用 量。（三）采用必要的預(yù)防措施使用試劑，試劑使用后應(yīng)立即蓋 緊瓶蓋，避免污染。（四）準(zhǔn)確的結(jié)果取決于準(zhǔn)確校正的儀器、溫度及時(shí)間的控 制。（五）紅細(xì)胞內(nèi) HBDH含量比血清或血漿高數(shù)倍，樣品應(yīng)盡 量避免溶血。（六）藥物、抗凝劑、促凝劑、分離膠等其他物質(zhì)都可能對(duì) 測(cè)定值造成無法預(yù)知的干擾。當(dāng)懷疑標(biāo)本存在這些干擾物質(zhì) 的影響時(shí)，請(qǐng)停