細菌培養(yǎng)以及鑒定

1、關于細菌的培養(yǎng)及鑒定第一張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月標本采集原則1.及時采集微生物標本作病原學檢查2.在抗菌藥物使用前采集標本3.采樣時嚴格執(zhí)行無菌操作4.標本容器須無菌，但不得有消毒劑5.采樣后立即送檢6.送檢標本應注明來源和檢驗目的第二張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月咳痰方法病人先漱口，清潔口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集從下呼吸道咳出的痰液無痰可用35NaCl 5ml霧吸約5min導痰以清晨第二口痰為佳標本采集后放置時間不超過2小時 第三張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月清潔中段尿液盡量取早晨第一次尿液囑患者留取標本的前一天晚上少飲水 女性病人收集標本

2、前用肥皂水沖洗外陰，再以滅菌清水沖洗尿道口排出幾毫升后，不停止尿流，采集中段尿男性病人翻轉包皮，清洗尿道口排出幾毫升后，不停止尿流,采集中段尿 采集標本后立即送檢！第四張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月哥倫比亞血平板營養(yǎng)要求高的細菌巧克力平板含V、X因子，主要培養(yǎng)嗜血桿菌、腦膜炎球菌和淋球菌用中國藍/麥康凱平板G-桿菌用SS平板沙門氏菌和志賀氏菌用M-H平板細菌藥敏用TCBS平板弧菌科細菌用沙包氏平板真菌培養(yǎng)用真菌顯色平板真菌培養(yǎng)用羅氏培養(yǎng)基分枝桿菌用常用的培養(yǎng)基種類和用途第五張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月臨床標本培養(yǎng)基選擇血： 血培養(yǎng)瓶中斷尿：血平板、mac平板腦脊液：血

3、培養(yǎng)瓶、血平板、巧克力平板穿刺液：血培養(yǎng)瓶、血平板、巧克力平板、mac平板膽汁：血平板、巧克力平板、mac平板大便:.麥康凱、SS、血平板第六張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細菌接種的基本程序滅菌接種環(huán)沾取標本接種滅菌接種環(huán)第七張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細菌接種法平板劃線接種法： 目的：使混合的細菌呈單個分散生長，形成單個菌落，以便獲得純菌。 方法：分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標本第八張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月分區(qū)劃線法(3區(qū))第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第九張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作

4、于2022年6月連續(xù)劃線法第十張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細菌培養(yǎng)法一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：培養(yǎng)溫度：35（采用恒溫培養(yǎng)箱）培養(yǎng)時間：1824h二氧化碳培養(yǎng)法：燭缸法、二氧化碳培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等第十一張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細菌在固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象菌落定義：指單個細菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形成單一肉眼可見的細菌集團。菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤度、黏度、溶血性菌落類型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多個菌落融合在一起形成的細菌堆積物。第十二張，PPT共五十九頁，創(chuàng)

5、作于2022年6月菌 落第十三張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月菌落與菌苔第十四張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月菌落的三個類型：1.光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又稱S型2.粗糙型菌落（Rough type Colony）：又稱R型3.粘液型菌落（Mucoid type Colony）又稱M型第十五張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1116 S型菌落 第十六張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月R型菌落第十七張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月M型菌落第十八張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭染色原理：通過結晶

6、紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)復紅等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。第十九張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 革蘭染色步驟 涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片

7、 干燥 固定第二十張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月固定的目的：使細菌的細胞凝固，使菌體與玻片粘得更牢固；可改變菌體對染料的通透性；加熱固定可殺死細菌，比較安全。 第二十一張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 結晶紫 1 碘液 1 95%乙醇 30” 復紅1 沖洗 濾紙干燥 油鏡觀察沖洗沖洗沖洗革蘭染色程序初染媒染脫色復染第二十二張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月紫色（G）革蘭氏染色步驟示意圖革蘭染色甲菌乙菌初染結晶紫媒染碘液脫色乙醇復染稀釋復紅紫色（G）紅色（G-）革蘭染色步驟示意圖第二十三張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月【結果】細菌被染成紫色者，稱為革蘭陽性

8、菌；而細菌染成紅色者，稱為革蘭陰性菌；陽性菌紫色（G+b) 陰性菌紅色（G-b)第二十四張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月G+ 球菌第二十五張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月顯微鏡下的桿菌G-桿菌Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells第二十六張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月痰標本涂片染色低倍鏡下分類 分級 白細胞（個） 上皮細胞（個） A 25 25 25 C 25A、B兩種情況的痰適合做培養(yǎng)，C不合格，應重新留標本第二十七張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭染色注意事項標本涂片不宜太厚固定不宜過熱脫色不宜

9、過度選用培養(yǎng)18-24小時菌齡的細菌為宜第二十八張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月抗酸染色原理：分枝桿菌細胞壁含脂質較多,其中主要成分為分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色時與石炭酸復紅結合牢固,能抵抗酸性乙醇的脫色作用,因此抗酸菌能保持復紅的顏色,達到染色目的。第二十九張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 抗酸染色步驟 1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片 干燥 固定第三十張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月抗酸染色步驟2、染色包括初染、脫色、復染三步。 石炭酸復紅維持 3-5 3%鹽酸酒精30 1 美藍復染1 沖洗 干燥 油鏡觀察沖洗沖洗初染脫色復染第三十一張，PPT共五

10、十九頁，創(chuàng)作于2022年6月抗酸染色結果抗酸菌呈紅色，常堆積成團，排列無序，偶呈分枝狀生長。背景及非抗酸性細菌呈蘭色。第三十二張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月抗酸桿菌報告300個視野僅見到18條抗酸桿菌填寫條數(shù)1+：鏡檢查見3-9條抗酸桿菌/100高倍鏡視野2+：鏡檢查見19條抗酸桿菌/10高倍鏡視野3+：鏡檢查見1-9條抗酸桿菌/高倍鏡視野4+:鏡檢查見9條抗酸桿菌/高倍鏡視野第三十三張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月抗酸染色注意事項染色充分脫色時間寧長勿短在涂抹痰標本時嚴禁對載玻片進行加熱第三十四張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月臨床標本培養(yǎng)基選擇生殖道標本根據(jù)臨

11、床醫(yī)生所寫的檢驗項目接種相應的平板及操作： 淋球菌培養(yǎng)接種淋球菌平板;念珠菌培養(yǎng)接種沙保羅培養(yǎng)基；支原體培養(yǎng)則按支原體培養(yǎng)的操作規(guī)程操作；作普通培養(yǎng)則接種血平板和巧克力平板 第三十五張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月觀察細菌在平板上的生長現(xiàn)象血平板：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤度、黏度、溶血性mac平板：大小、形狀、顏色、透明度、濕潤度、黏度巧克力平板：大小、形狀、顏色、透明度、濕潤度、黏度第三十六張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1137 革蘭陰性菌 葡萄球菌第三十七張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細菌的初步分類細菌的分離與純化：自血平板

12、挑出待檢菌株的單菌落進行初步的鑒定。如果混有雜菌，應該重新轉種分純。染色與鏡檢： 首先通過革蘭氏染色確定基本的分類：（1）G+球菌（2）G-球菌（3）G-桿菌（4）G+桿菌。此外，如果鏡下發(fā)現(xiàn)革蘭氏染色陽性、橢圓形、有芽孢狀的較大菌體，可能是真菌。第三十八張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月金黃色葡萄球菌最重要的致病葡萄球菌血平板上菌落有明顯溶血環(huán)，顏色呈金黃色、灰白色或檸檬色分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖和甘露醇血漿凝固酶和DNA酶陽性 第三十九張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1141葡萄球菌第四十一張，PPT共五十九頁

13、，創(chuàng)作于2022年6月第四十二張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十三張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月念珠菌顯色培養(yǎng)基綠色白色念珠菌藍色熱帶念珠菌白色其他，細菌被抑制紫色光滑粉色克柔假絲酵母菌第四十四張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十五張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十六張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月嗜血桿菌的鑒定途徑只能在營養(yǎng)條件高的巧克力平板上生長，菌落為中等大小、圓形、灰白色、透明革蘭染色：G-小桿菌衛(wèi)星實驗就可以幫助初步鑒定第四十七張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1148嗜血桿菌第四十八張，PPT共五十

14、九頁，創(chuàng)作于2022年6月奈瑟氏菌屬鑒定在血平板和巧克力平板上生長，mac上不生長血平板形成灰色、濕潤、透明或半透明、不溶血的菌落巧克力平板上形成圓形、灰藍色的似露滴狀菌落革蘭染色： G-雙球菌，呈腎形或咖啡豆形，凹面相對氧化酶和觸酶都均為陽性第四十九張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 奈瑟氏菌屬有11個種，臨床就淋病奈 菌和腦膜炎奈瑟菌 最為重要第五十張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月奈瑟氏菌屬鑒定流程 菌落觀察：灰色、濕潤、透明或半透明、不溶血 涂片染色：G-雙球菌，呈腎形或咖啡豆狀 氧化酶試驗+ 觸酶+ + 麥芽糖 - 腦膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌第五十一張，PPT共五十九頁

15、，創(chuàng)作于2022年6月細菌的鑒定與藥敏第五十二張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月衛(wèi)生部重點監(jiān)控的6種MDRO MASA:耐甲氧西林金黃色葡萄球菌判斷標準：對苯唑西林耐藥或頭孢西丁誘導實驗陽性CRAB：耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌判斷標準：對亞胺培南或美羅培南耐藥 VER：耐萬古霉素腸球菌判斷標準：對萬古霉素耐藥第五十三張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月ESBLs：產(chǎn)超廣譜內酰胺酶細菌。包括：大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌等判斷標準：對第3代和第4代頭孢菌素和氨曲南耐藥CRE:耐碳青霉烯類腸桿菌科細菌判斷標準：對亞胺培南等碳青霉烯類耐藥MDR/XDROA:多重耐藥/泛耐藥銅綠假單胞菌判斷標準：對亞胺培南等碳青霉烯類耐藥第五十四張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月臨床常見問題痰涂片與痰培養(yǎng)結果不一致？ 培養(yǎng)和涂片選擇的痰液不同；標本采集時間過長，部分苛養(yǎng)菌死亡；選擇藥敏結果敏感的藥物，臨床治療無效？ 體外藥敏試驗只能預測體內治療效果，并不等同；一般來說，耐藥=治療無效，敏感治療有效第五十五張，PPT共五十九頁，創(chuàng)作于2022年6月今天培養(yǎng)結果與前天結果不一樣？1）取材是否規(guī)范？2）痰標本有時候選擇優(yōu)勢菌做，可能結果 不一樣3）