冰凍切片的實(shí)用技術(shù)及相關(guān)臨床應(yīng)用

1、冰凍切片的實(shí)用技術(shù)病理科 婁全博1 冰凍切片（frozen section）是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便，而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。冰凍切片的種類較多，有低溫恒冷箱冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。這些方法，隨著時(shí)代的變遷，科技的發(fā)展，許多年前被認(rèn)為是非常重要的技術(shù)，現(xiàn)在也逐步被淘汰了。當(dāng)然有些技術(shù)，如低溫恒冷箱冰凍切片法，正在受到青睞。 23冰凍切片的制備及注意事項(xiàng)取材新鮮手術(shù)標(biāo)本忌浸入酒精、甲醛中, 以防組織脫水, 尤其注意在取材過程中器械干燥, 不沾水, 組織不能沖洗, 以防細(xì)胞變形。組織塊

2、大小合適, 長(zhǎng)徑 0. 2cm的不宜做冰凍切片, 取材要避免脂肪組織和壞死組織, 取材的厚度在0. 5cm左右1。組織送檢取材時(shí)，如遇含水量高的標(biāo)本時(shí)，應(yīng)盡量用干紗布吸干水分后再行冷凍，避免由于冰晶形成出現(xiàn)診斷上的失誤。4溫度冰凍切片機(jī)晝夜24h處于預(yù)冷的- 4左右, 做快速切片時(shí)將溫度降到組織塊所需溫度。不同組織對(duì)溫度要求不同, 溫度過低, 組織變脆、易碎, 溫度過高則組織過軟, 不能切片1。冰凍切片手術(shù)組織的事宜溫度組織類型溫度（）甲狀腺、淋巴結(jié)、肝、腎-16-17子宮、乳腺、卵巢-21-22胃、腸、肺-19-20皮膚-20-215切片使用前將刀架與組織塊的角度調(diào)整好, 調(diào)整好后不需要經(jīng)常

3、變換角度, 保持刀口鋒利。切片機(jī)內(nèi)要保持清潔, 切片時(shí)用力均勻, 厚度約4m5m, 特殊要求時(shí), 可達(dá)到3m, 切好的組織在干凈的玻片上粘附后立即放入提前配制好的冰凍切片固定液中及時(shí)固定1min2min2?？焖俦鶅龉潭ㄒ号浞?5%乙醇380ml福爾馬林60ml冰乙酸20ml6染色和封片切片后做快速HE染色, 蘇木素染色過程需加熱進(jìn)行。這樣做出來的快速切片鏡下觀結(jié)構(gòu)完整、平坦、無皺折, 細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)染色色澤鮮艷, 對(duì)比清晰, 細(xì)胞無腫脹, 無收縮, 近似常規(guī)石蠟切片3。78冰凍切片的優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)： 1簡(jiǎn)便，快速，用時(shí)短?？梢圆恍枰獙?duì)組織固定、脫水、包埋等手續(xù)即可進(jìn)行切片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。2

4、組織變化不大3能很好保存脂肪，類脂等成分。4能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類，特別是對(duì)于那些對(duì)有機(jī)溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細(xì)胞膜表面抗原和水解酶保存較好。9 缺點(diǎn) ： 1不容易做連續(xù)切片。2切取的組織不能過大，組織過大不容易凍結(jié)或者組織凍結(jié)不均，影響切片及染色效果。3不容易制作較薄的切片。4組織塊在凍結(jié)過程中容易產(chǎn)生水的結(jié)晶而影響細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及抗原物質(zhì)的定位，并且組織結(jié)構(gòu)也不如石蠟切片清晰。10冰凍切片的應(yīng)用 （1）在手術(shù)進(jìn)行中，突然發(fā)現(xiàn)病人的病變與原診斷，原定手術(shù)方案不相符合，或者懷疑時(shí)，需要病理確定。 （2）了解淋巴結(jié)內(nèi)是否有轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞，或者轉(zhuǎn)移的程度，以利于確定是否需要徹底

5、掃除淋巴結(jié)或者其它的治療措施。 （3）對(duì)于已確定為惡性腫瘤的患者，則需要了解其手術(shù)范圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤組織。 （4）在做剖腹探查時(shí)所發(fā)現(xiàn)的腫塊或者異樣的組織。 11（5）顯示組織中的脂肪和脂類物質(zhì)，這常見于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研等。 （6）某些酶的顯示如ATP酶，琥珀酸脫氫酶等。 （7）神經(jīng)病理學(xué)技術(shù)中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Hortega氏法和Holzer氏法等。 （8）對(duì)某些物質(zhì)所進(jìn)行的免疫熒光的研究。121 洪玉萍.介紹一種快速冰凍切片方法J. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,1999,15(5):351.2 駱新蘭.冰凍切片常見問題探討 J .臨床與實(shí)