精選天然產(chǎn)物實驗指導(dǎo)

1、天然產(chǎn)物實驗指導(dǎo)實驗一 水蒸氣蒸餾法提取萜類及揮發(fā)油一、實驗?zāi)康?、了解水蒸汽蒸餾的根本原理和應(yīng)用，掌握水蒸汽蒸餾的方法。2、掌握萜類和揮發(fā)油的提取原理及方法。二、根本原理水蒸汽蒸餾的操作是將水蒸汽通入有機物中，或?qū)⑺c有機物一起加熱，使有機物與水共沸而蒸餾出來的過程。水蒸汽蒸餾是別離和提純有機物質(zhì)的常用方法。當兩種互不相溶的液體混合在一起時，混合物的蒸氣壓應(yīng)為各組分蒸氣壓之和。由于兩種組分互不相溶，彼此相互影響很小，混合物中每一組分在某溫度下的分壓等于其純態(tài)時在該溫度下的蒸氣壓。當混合物受熱至各組分的蒸氣壓之和等于外界大氣壓時混合物即沸騰。例如，把苯胺和水的混合物加熱至98.4，混合物開始沸

2、騰。因為在98.4時，苯胺的蒸氣壓為42mmHg，水的蒸氣壓為718mmHg，兩者相加等于760mmHg。顯然，苯胺水混合物的沸點既低于苯胺的沸點184.4，也低于水的沸點。因此，沸點高于100的有機物，利用水蒸汽蒸餾，可以在低于100的溫度下蒸餾出來。根據(jù)氣體分壓定律，水蒸汽蒸餾的混合蒸氣中個別氣體分壓PA、P水之比等于它們的摩爾數(shù)之比nA、n水表示這兩種物質(zhì)在一定容積的氣相中的摩爾數(shù)，即：PA：P水= nA：n水 ，因為餾出液是由蒸氣冷凝而來的，餾出液中A與水的摩爾數(shù)之比同樣是nA：n水。而nA = WA / MA，n水= W水/ M水，MA、M水為A和水的分子量；WA、W水為A和水的重量

3、。因此有：WA / W水= (MAnA) / (M水n水) = (MAPA) / (M水P水)由上式可見，餾出物中有機物和水的相對重量與其蒸氣壓和分子量成正比。式中P 水可通過手冊查得，PA可近似地以大氣壓與P水之差計算PA=P大氣P水，P大氣可由氣壓計上讀得。例如，將苯胺與水的混合物進行水蒸汽蒸餾，混合沸騰98.4時，查水的蒸氣壓為718mmHg，大氣壓為760mmHg，P苯胺= 760718 = 42mmHg。苯胺的分子量為93，所以餾出液中苯胺與水和重量比為：W苯胺/ W水= 9342/18718=1 / 3.3，即每蒸出3.3g水能夠帶出1g 苯胺。由于苯胺略溶于水，這個計算所得的僅為

4、近似值。從以上公式和計算可以看出，水蒸汽蒸餾的效率與有機物的分子量MA和蒸氣壓PA有關(guān)，MA愈大；PA愈高，水蒸汽蒸餾的效率也愈高。但由于分子量愈大的物質(zhì)其蒸氣壓愈低，因而實際上很難兩全。由上述原理可見，使用水蒸汽蒸餾別離提純有機物應(yīng)具備以下條件：(1) 不溶于水或難溶于水；(2) 與水長時間煮沸不發(fā)生化學(xué)變化；(3) 在100左右，必須具有一定的蒸氣壓至少5mmHg 以上，一般不少于1.3332 kPa。；水蒸汽蒸餾常用于以下幾種情況：(1) 某些沸點高的有機物，在常壓下蒸餾雖可與副產(chǎn)品別離，但其本身易破壞；(2) 混合物中含有大量樹脂或不揮發(fā)性雜質(zhì)，采取普通蒸餾、萃取等方法都難以別離；(3

5、) 從較多固體反響物中別離出被吸附的液體；(4) 從天然物中提取精油等。三、根本操作1、水蒸汽蒸餾裝置如下圖，主要由水蒸汽發(fā)生器，長頸圓底燒瓶、直形冷凝管和接受器組成。水蒸氣蒸餾有兩種方法：種是將水蒸氣發(fā)生器產(chǎn)生的水蒸氣通入盛有被蒸物的燒瓶中，使被蒸物與水一起蒸出；另一種方法是將水參加到裝有被蒸物的燒瓶中，與普通蒸餾方法相同，直接加熱燒瓶，進行蒸餾，這是一種簡化了的水蒸氣蒸餾方法；當蒸餾時間較短，不需耗用大量水蒸氣時，可采用這種方法。1水蒸汽發(fā)生器A是金屬制品，也可用圓底燒瓶代替。器內(nèi)盛水約一半1/2-2/3。長玻璃管B 為平安管0.5-1m，管的下端幾乎插到發(fā)生器的底部距底部1cm。當容器內(nèi)

6、氣壓太大時，水可沿著玻璃管上升以調(diào)節(jié)內(nèi)壓。如果蒸餾系統(tǒng)發(fā)生阻塞，水便會從玻璃管的上口噴出，此時應(yīng)檢查圓底燒瓶內(nèi)的蒸氣導(dǎo)管下口是否被堵塞。2長頸圓底燒瓶D是蒸餾器參加樣品體積不超過1/3，用鐵夾在頸下部夾緊，并和桌面成450角，以免飛濺起的液體被蒸氣帶進冷凝管中。瓶口配雙孔軟木塞，一孔插入水蒸汽導(dǎo)管C彎成約125角與T形管相連，其末端應(yīng)彎曲，使之垂直正對瓶底中央并接近瓶底，以便水蒸汽和被蒸餾物質(zhì)充分接觸并起攪動作用。此管的外徑一般不小于7mm，以保證水蒸汽暢通。另一孔插入水蒸汽導(dǎo)出管E為30角，此管應(yīng)略為粗一些，其外徑約為10mm，以便蒸氣能暢通地進入冷凝管中。假設(shè)管E的直徑太小，蒸氣的導(dǎo)出將受

7、到一定的阻礙，這會增加燒瓶D 的壓力，導(dǎo)管E在彎曲處前的一段應(yīng)盡可能短些，在彎曲處后一段那么允許長些，因它可起局部的冷凝作用。由于許多反響是在三口瓶中進行的，直接用該三口瓶作為水蒸氣蒸餾的蒸餾瓶就可防止轉(zhuǎn)移的麻煩和產(chǎn)物的損失。3長的直型冷凝管F可以使蒸氣充分冷卻。由于水的蒸發(fā)熱較大，所以冷卻水的流速也宜稍大一些。3T 形管發(fā)生器A的支管和水蒸汽導(dǎo)入管C 之間用一個T 形管相連接，在T 形管的支管上套一段短橡皮管，用螺旋夾旋緊，翻開螺旋夾，可以及時放掉蒸氣冷凝形成的水滴。在操作中，如果發(fā)生不正?，F(xiàn)象，應(yīng)立刻翻開T 形管的夾子，使之與大氣相通。2、其它連接方法 A水蒸氣發(fā)生器；B液面計；C平安管；

8、DT形管；E彈簧夾；F蒸餾瓶；G導(dǎo)氣管；HY形管；I蒸餾頭；J直形冷凝管；K尾接管；L接收瓶3、操作儀器安裝好后，把要蒸餾的物質(zhì)倒入燒瓶D 中，其量約為燒瓶容量的1/3，操作前，水蒸汽蒸餾裝置應(yīng)經(jīng)過檢查，必須嚴密不漏氣。開始蒸餾時，先把T 形管上的夾子翻開，用直接加熱法將發(fā)生器內(nèi)的水加熱至沸。當有大量的水蒸汽從T 形管的支管流出時再旋緊夾子，讓水蒸汽通入燒瓶中，這時可以看到瓶中的混合物翻滾不息，不久就會在冷凝管中出現(xiàn)蒸氣冷凝為乳濁液，流入接受器。調(diào)節(jié)火焰，使瓶內(nèi)混合物不致飛濺得太厲害，并控制餾出液的速度約為23 滴/s。為了使水蒸汽不致在燒瓶內(nèi)過多的冷凝，如被蒸餾的物料較多，溫度又較低，可先在

9、圓底燒瓶下放一石棉網(wǎng)，用小火加熱。在操作時，要隨時注意平安管中的水柱是否發(fā)生不正常的上升現(xiàn)象以及燒瓶中的液體是否發(fā)生倒吸現(xiàn)象。一旦發(fā)生這種現(xiàn)象應(yīng)立刻翻開T 形管上的夾子，移去火源，找出發(fā)生故障的原因，才可繼續(xù)蒸餾。當餾出液澄清透明不再含有有機物質(zhì)的油滴時，一般即可停止蒸餾。此時應(yīng)首先翻開T形管的夾子，然后移去火源，否那么D中的液體會倒吸到A中。蒸餾期間，應(yīng)及時排出T形管中冷凝水。四、儀器藥品1、儀器設(shè)備水蒸餾發(fā)生器，長頸圓底燒瓶，蒸餾裝置減壓，直形冷凝管，接引管，長玻璃管，T 形管，橡皮管附螺旋夾，三角燒瓶，分液漏斗、研缽等。2、試劑蒸餾樣品八角茴香或橙皮，二氯甲烷，無水亞硫酸鈉。五、實驗步驟

10、1、設(shè)備安裝 參照實驗原理局部。2、樣品準備110g干果固體物質(zhì)于研缽中粉碎，倒入蒸餾瓶，參加蒸餾水30mL。22-3個橙子皮，剪碎，參加到蒸餾燒瓶，并參加水約30mL。3、水蒸汽蒸餾先把T形管上的夾子翻開，加熱水蒸汽發(fā)生器使水迅速沸騰，當有水蒸汽從T形管的支管沖出時，再夾上止水夾，讓水蒸汽通入燒瓶中，與此同時，接通冷卻水，用100 mL 三角燒瓶收集餾分。蒸餾期間，應(yīng)及時排出T形管中冷凝水。當餾分澄清透明不再有油狀物時，即可停止蒸餾，先翻開止水夾，然后停止加熱，把餾分倒入分液漏斗中，靜置分層，將水層棄去。以下為選做局部4、收集餾出夜60-70mL，于分液漏斗中每次用10mL二氯甲烷萃取3次，

11、合并。倒入錐形瓶中，參加適量無水亞硫酸鈉枯燥30min以上，除去局部水分。5、枯燥完畢的樣品，于50mL蒸餾燒瓶水浴加熱蒸餾二氯甲烷沸點40.4，待快完畢后，改用水泵減壓蒸餾。除去殘留的二氯甲烷，留下橙黃色油狀液體橙皮產(chǎn)物。六、思考題1、與普通蒸餾相比，水蒸汽蒸餾有何特點？在什么情況下采用水蒸汽蒸餾的方法進行別離提?。?答：與普通蒸餾相比，水蒸汽蒸餾多了一個水蒸汽發(fā)生裝置，蒸餾局部不再保持垂直，而是傾斜3045。其余局部一樣。使用水蒸汽蒸餾提純的有機物應(yīng)具備以下條件：不溶或難溶于水；與水長時間煮沸不發(fā)生化學(xué)反響；在1000C左右時，待提純物應(yīng)具有一定的蒸汽壓。2、平安管為什么不能抵至水蒸汽發(fā)生

12、器的底部？ 答：平安管是用來調(diào)節(jié)水蒸汽發(fā)生器內(nèi)部的壓力，內(nèi)部壓力過大，水就會從平安管的上口噴出。如果抵至發(fā)生器的底部，那么平安管失去調(diào)節(jié)壓力的作用。3、蒸餾過程中假設(shè)發(fā)現(xiàn)水從平安管頂端噴出或發(fā)生倒吸現(xiàn)象，應(yīng)如何處理？ 答：應(yīng)迅速翻開螺絲夾，讓體系與大氣相通。進而再進一步檢查導(dǎo)致壓力過大的原因，排除故障后，繼續(xù)實驗。實驗二人參中人參皂苷的提取別離及鑒定一、實驗?zāi)康?、通過實驗進一步掌握三萜類化合物的理化性質(zhì)及提取、別離和檢識方法。2、學(xué)習(xí)和掌握簡單回流提取法、兩相溶劑萃取法、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、大孔樹脂柱色譜等根本實驗操作技能。二、根本原理人參為五加科植物人參(Panax ginseng C.A.Mey

13、. )的枯燥根，是傳統(tǒng)名貴中藥，始載于我國第一部本草專著?神農(nóng)本草經(jīng)?。其栽培者稱為“園參，野生者稱為“山參。人參具有大補元氣、復(fù)脈固脫、補脾益肺、生津、安神之功能，用于體虛欲脫、肢冷脈微、脾虛食少、肺虛喘咳、津傷口渴、內(nèi)熱消渴、久病虛羸、驚悸失眠、陽痿宮冷、心力衰竭、心源性休克等的治療。人參的化學(xué)成分很復(fù)雜，有皂苷、揮發(fā)油、糖類及維生素等。經(jīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和藥理研究證明，人參皂苷為人參的主要有效成分，它具有人參的主要生理活性。人參的根、莖、葉、花及果實中均含有多種人參皂苷(ginsenosides)。到目前為止，文獻報道從人參根及其它部位已別離確定化學(xué)結(jié)構(gòu)的人參皂苷有人參皂苷-Ro、-Ra1、-R

14、a2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余種人參皂苷。根據(jù)皂苷元的結(jié)構(gòu)可分為A、B、C三種類型：人參二醇型-A型，人參三醇型-B型，齊墩果酸型-C型。A型和B型皂苷均屬四環(huán)三萜皂苷，其皂苷元為達馬烷型四環(huán)三萜，A型皂甙元稱為20(S)-原人參二醇20S-protopanaxadiol。B型皂甙元稱為20(S)-原人參三醇20S-protopanaxatriol。C型皂苷那么是齊墩果烷型五環(huán)三萜的衍生物，其皂苷元是齊墩果酸(oleanolic acid)。人參的主要成分為人參皂苷，總皂苷含量約4，人參

15、皂苷大多數(shù)是白色無定形粉末或無色結(jié)晶，味微甘苦，具有吸濕性。人參皂苷易溶于水，甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯，不溶于乙醚、苯等親脂性有機溶劑。水溶液經(jīng)振搖后可產(chǎn)生大量的泡沫。人參總皂苷無溶血作用，別離后，B型和c型人參皂苷有顯著的溶血作用，而A型人參皂苷有抗溶血作用。 人參中除含有皂苷外，還含有脂溶性成分如揮發(fā)油，脂肪、甾體化合物及大量的糖類等，這些類成分對人參皂苷的別離和精制有干擾，所以必須除去，方可得到純度較高的皂苷。本實驗以人參根為原料提取別離人參總皂苷，利用人參總皂苷易溶于甲醇，不溶于乙醚性質(zhì)采用溶劑法進行初步提取去雜；然后根據(jù)皂苷在含水丁醇中有較好的溶解度的性質(zhì)采用萃取法進

16、行別離；再用沉淀法或大孔吸附樹脂法進行進一步別離精制；對提出的總皂苷采用檢測三萜類化合物通性的理化檢識方法泡沫試驗及顯色反響進行初步定性檢識；最后根據(jù)人參總皂苷中各單體皂苷分子結(jié)構(gòu)中糖基個數(shù)和羥基數(shù)不同而極性大小不同的性質(zhì)，通過薄層色譜法對人參總皂苷進一步別離和專屬定性檢識。三、儀器藥品1、儀器索氏提取器，加熱裝置，減壓蒸餾裝置，分液漏斗，60目篩，濾紙，燒杯，試管，D101型大孔樹脂柱包括泵及軟管，水浴鍋，硅膠-CMC薄層板，超聲波儀，展層缸，紫外燈。2、試劑 人參根，甲醇，乙醚，丙酮，三氯化銻氯仿飽和溶液1精餾氯仿：用蒸餾水洗滌市售氯仿23次，加一些煅燒過的碳酸鈉或無水硫酸鈉進行枯燥，并在

17、暗色燒瓶中蒸餾。2三氯化銻氯仿飽和溶液：用少量精餾氯仿反復(fù)洗滌三氯化銻，直到氯仿不再顯色為止。再將三氯化銻放在枯燥器中，用硫酸枯燥。用枯燥的三氯化銻和精餾氯仿配制飽和溶液，正丁醇，濃硫酸，冰醋酸，醋酸酐，20五氯化銻的氯仿溶液(或不含乙醇和水的三氯化銻飽和的氯仿溶液)，乙酸乙酯，乙醇，人參皂苷Rb1、Re、Rg1對照品。實驗內(nèi)容1、人參總皂苷的提取別離任選一種方案方案(1)人參根粗粉60目10g用濾紙筒包好，置索氏提取器中， 加甲醇加熱回流提取至三氯化銻氯仿飽和溶液反響呈陰性， 提取液減壓回收甲醇浸膏 用10倍量蒸餾水溶解 水溶液用乙醚在分液漏斗中，振搖脫脂4次 乙醚液脂類 水層用水飽和的正丁

18、醇萃取6次，合并正丁醇液減壓回收正丁醇，蒸干 殘留物總皂苷粗品方案(2)人參根粗粉60目10g用濾紙筒包好，置索氏提取器中， 加10倍量乙醚回流脫脂至無色， 乙醚液脂類 殘渣加甲醇加熱回流提取至三氯化銻氯仿飽和溶液反響呈陰性甲醇提取液 減壓回收甲醇浸膏 用10倍量蒸餾水溶解 水溶液用水飽和的正丁醇萃取6次，合并正丁醇液減壓回收正丁醇，蒸干 殘留物總皂苷粗品2、人參總皂苷的別離精制將人參總皂苷粗品分為兩份方法1沉淀法1份總皂苷粗品甲醇溶解，傾入約10倍量丙酮，不斷攪拌，析出 黃白色沉淀 母液過濾 回收溶劑，用少量甲醇溶解，再傾入約10倍量丙酮總皂苷 黃白色沉淀 過濾總皂苷 合并，減壓60下真空枯

19、燥，稱重計算收率 精制總皂苷方法2大孔樹脂柱色譜法大孔樹脂色譜是近年來用于別離和富集天然化合物的一種常用方法，應(yīng)用大孔樹脂別離皂苷，主要用于皂苷的富集和初步別離。將含有皂苷的水溶液通過大孔樹脂柱吸附后，先用水洗脫除去糖和其他水溶性雜質(zhì)，然后改用不同濃度的甲醇或乙醇進行梯度洗脫。極性大的皂苷可被低濃度的甲醇或乙醇洗脫下來，極性小的皂苷那么被高濃度的甲醇或乙醇洗脫下來。1份總皂苷粗品 用少量水溶解，加樣于處理好的D101型大孔樹脂柱上，吸附1小時后，用3倍柱體積蒸餾水洗脫除雜質(zhì) 繼用60%乙醇洗脫至三氯化銻氯仿飽和溶液反響呈陰性 洗脫液 減壓回收溶劑 殘留物 減壓60下真空枯燥，稱重計算收率精制總

20、皂苷3、人參皂苷的鑒定一理化檢識1、泡沫試驗取人參根粗粉1g，加水浸泡1：101小時或置80水浴上溫浸30分鐘，過濾得濾液供以下試驗。取供試液2ml于試管中，緊塞試管口后猛力振搖，試管內(nèi)液體那么產(chǎn)生大量的持久性的似蜂窩狀泡沫示有皂苷。注：含蛋白質(zhì)和粘液質(zhì)的水溶液雖也能產(chǎn)生泡沫，但不持久，放置很快消失。2、顯色反響1醋酐濃硫酸反響Liebermann-Burchard反響取樣品適量，加冰醋酸0.5mL使溶解，續(xù)加醋酐0.5mL攪勻，再于溶液的邊沿滴加1滴濃硫酸，觀察并記錄現(xiàn)象。2三氯甲烷濃硫酸反響Salkowski反響取樣品適量，加三氯甲烷1mL使溶解，沿試管壁加等量的濃硫酸，分別置可見光及紫外

21、燈下，觀察并記錄現(xiàn)象。3五氯化銻反響Kahlenberg reaction 取樣品適量，加五氯化銻的氯仿溶液反響呈紫色。或?qū)悠返穆确禄虼既芤狐c于濾紙上，噴20五氯化銻的氯仿溶液(或不含乙醇和水的三氯化銻飽和的氯仿溶液)，枯燥后6070加熱，顯色，觀察并記錄現(xiàn)象。(二)色譜檢識1、薄層色譜吸附劑：硅膠-CMC薄層板樣品溶液：稱取由沉淀法及大孔吸附樹脂法制得的精制總皂苷各一份，加甲醇制成1mL含2mg的樣品溶液。對照品溶液：稱取人參皂苷Rb1、Re、Rg1對照品，加甲醇制成1mL含2mg的對照品混合溶液。對照藥材溶液：取人參對照藥材粉末1 g，加氯仿40mL，置水浴上回流1小時，棄去氯仿液，藥渣

22、揮干殘存溶劑，加水0.5mL拌勻濕潤后，加水飽和的正丁醇10mL，超聲處理30分鐘，吸取上清液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液蒸干加甲醇溶解，使成1mL，作為對照藥材溶液。展開劑：A. 氯仿-甲醇-水(65：35：10)10以下放置后的下層溶液;B. 氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10) 10以下放置后的下層溶液;顯色劑：10%硫酸乙醇溶液 顯色方式：10%硫酸乙醇溶液噴霧后，105加熱至斑點顯色清晰。分別置日光及紫外燈(365nm)下檢視.五、實驗說明及考前須知1、萃取操作時，注意振搖不能過度劇烈，以防產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。2、在使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進行甲醇提取液減壓濃縮時，因含皂

23、苷易產(chǎn)生大量泡沫發(fā)生倒吸現(xiàn)象。故應(yīng)注意觀察隨時調(diào)整水浴溫度及旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器轉(zhuǎn)速，防止事故的發(fā)生。3、在連續(xù)回流提取過程中，水浴溫度不宜過高，應(yīng)與溶劑沸點相適應(yīng)。此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果。4、回收乙醚的蒸餾操作，不必另換蒸餾裝置。只將索氏提取器中的濾紙筒取出，再照原樣裝好，繼續(xù)加熱回收燒瓶中的溶劑，待溶劑液面增加至高虹吸管頂部彎曲處1cm處，暫?；厥眨∠绿崛∑?，將其中乙醚移置另外容器中，如此反復(fù)操作，即可完成回收乙醚的操作。5、在連續(xù)提取過程中，欲檢查有效成分是否提取完全，可取提取器中提取液數(shù)滴，滴于白瓷皿中，揮散溶劑，觀察有無殘留物，或滴于濾紙片上，然后進行醋酐濃硫酸反響或三氯化銻

24、氯仿飽和溶液反響。假設(shè)反響呈陰性，示已提盡。6、大孔樹脂在使用前應(yīng)按說明書處理好，加乙醇浸泡24 h后，再用乙醇洗脫至流出液與3倍水混合后不呈混濁，繼續(xù)用蒸餾水洗至無醇為止備用。六、思考題1、三萜皂苷可用哪些反響進行鑒定？如何與甾體皂苷區(qū)別？2、試設(shè)計一種從人參莖葉為原料提取別離人參總皂苷的工藝流程，并說明提取、別離原理。3、使用乙醚作提取溶劑時，操作中應(yīng)注意哪些事項？實驗三、-胡蘿卜素和番茄紅素的提取別離與測定一、實驗?zāi)康?、掌握從胡蘿卜或番茄中提取別離-胡蘿卜素和番茄紅素的原理與方法。2、穩(wěn)固用柱色譜和薄層色譜別離、檢測有機化合物的實驗技術(shù)。3、學(xué)會用分光光度法測定-胡蘿卜素和番茄紅素的方

25、法。二、實驗原理-胡蘿卜素和番茄紅素分子中的碳骨架是由8個異戊二烯單位連接而成的，它們是四萜類化合物。它們的分子中都有一個較長的-共軛體系，能吸收不同波長的可見光，因而，它們都呈現(xiàn)一定的顏色，-胡蘿卜素是黃色物質(zhì)，番茄紅素是紅色物質(zhì)，所以，又把它們叫做多烯色素。胡蘿卜素是最早發(fā)現(xiàn)的一個多烯色素。后來，又發(fā)現(xiàn)了許多在結(jié)構(gòu)上與胡蘿卜素類似的色素，于是就把這類物質(zhì)叫做胡蘿卜色素類化合物，或者叫做類胡蘿卜素。這類化合物大都難溶于水，易溶于弱極性或非極性的有機溶劑，因此又把這類物質(zhì)叫做脂溶性色素。胡蘿卜素廣泛存在于植物的葉、花、果實中，尤以胡蘿卜中含量最高。胡蘿卜素有、三種異構(gòu)體，在生物體中以-異構(gòu)體含

26、量最多，生理活性最強。在動物體內(nèi)，胡蘿卜素在酶的作用下可轉(zhuǎn)化為維生素A，因此，胡蘿卜素又被叫做維生素A原。胡蘿卜素在人和高等動物體內(nèi)具有重要的生理功能，是人和高等動物生存不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)。番茄紅素是胡蘿卜素的開鏈異物體。番茄紅素在成熟的紅色植物果實如番茄、西瓜、胡蘿卜、草莓、柑桔等中含量最高，其中含量最多的是番茄。由于番茄紅素不具有維生素A原活性，因此長期以來不被人們所重視。但近年來研究說明，番茄紅素是一種優(yōu)越的天然色素和生物抗氧化劑，它可以預(yù)防前列腺癌、乳腺癌和消化道結(jié)腸、直腸與胃癌的發(fā)生，在預(yù)防心血管疾病、動脈硬化等各種與衰老有關(guān)的疾病及增強機體免疫力方面具有重要作用。正因為如此，近年來

27、國內(nèi)外對番茄紅素的研究方興未艾，不僅有大量的研究文章公開發(fā)表，而且還有一些相關(guān)產(chǎn)品面市。番茄紅素作為新型保健食品、食品添加劑、化裝品和藥品具有廣闊的市場前景。-胡蘿卜素和番茄紅素的分子式均為C40H56，分子量為536.85，-胡蘿卜素的熔點184，番茄紅素的熔點174。-胡蘿卜素和番茄紅素是不飽和碳氫化合物，難溶于甲醇、乙醇，可溶于乙醚、石油醚、正已烷、丙酮，易溶于氯仿、二硫化碳、苯等有機溶劑。根據(jù)-胡蘿卜素和番茄紅素的上述性質(zhì)，故可利用石油醚、乙酸乙酯等弱極性溶劑將它們從植物材料中浸提出來。然后，根據(jù)它們對吸附劑吸附能力的差異，用柱色譜進行別離，用薄層色譜檢測別離效果。并根據(jù)它們在可見光區(qū)

28、有強烈吸收的性質(zhì)，用紫外可見分光光度法進行測定，-胡蘿卜素的最大吸收峰為451nm，番茄紅素的最大吸收峰為472nm。三、儀器與試劑1、儀器三角瓶50ml、分液漏斗150ml、蒸餾瓶50ml、普通蒸餾裝置或減壓蒸餾裝置、色譜柱、硅膠薄層板、量筒、燒杯、試管、分光光度計、層析缸。2、試劑番茄或番茄醬或胡蘿卜、食鹽、丙酮、乙酸乙酯、石油醚6090、乙醇、無水硫酸鎂、氧化鋁層析用，100200目、硅膠層析用，200300目、無水硫酸鈉、石油醚6090：乙醇2：1V/V、石油醚：丙酮3：2V/V。四、實驗內(nèi)容與步驟1、類胡蘿卜素的提取方法一：1稱取20g新鮮番茄果肉，搗碎，置于50mL三角瓶中，再參加

29、5g食鹽，用玻棒攪拌，使食鹽與番茄果肉充分混合均勻，設(shè)置一定時間，便會看到果肉組織中水分大量滲出。脫水時間持續(xù)1530min。隨后將脫除下來的水分濾入150mL分液漏斗中。2向經(jīng)過食鹽脫水的番茄果肉參加10mL丙酮，用玻棒攪拌，并靜置510min。然后將丙酮提取液也濾入分液漏斗中。3向經(jīng)過丙酮處理的番茄果肉參加10mL乙酸乙酯浸提5min。浸提過程中應(yīng)不時振搖三角瓶，使番茄果肉與溶劑充分接觸；假設(shè)室溫過低，可將三角瓶置于溫水浴中溫熱，但應(yīng)注意不能使浸提溶劑明顯揮發(fā)損失。5min后將提取液也濾入分液漏斗中，并用玻棒輕壓殘渣盡量使溶劑流盡。再用乙酸乙酯重復(fù)提取2次，每次10mL，合并提取液至分液漏

30、斗中。4充分振搖分液漏斗中的混合溶液，靜置，完全分層后，分去水層，有機層酯層再用蒸餾水洗2次，每次810mL，棄去水層。酯層自分液漏斗上口倒入枯燥的小三角瓶中，參加適量無水硫酸鎂或無水硫酸鈉枯燥15min注意：應(yīng)避光。5枯燥后的酯層濾入50mL枯燥的蒸餾瓶中，水浴加熱，小心蒸餾最好減壓蒸餾濃縮至12mL。所得濃縮液即為類胡蘿卜素樣品。方法二：稱取20g新鮮番茄果肉，搗碎，置于50mL三角瓶中，用15mL石油醚6090與乙醇的混合溶劑2：1，V/V浸提5min。然后將提取液濾入150mL分液漏斗中。再用石油醚乙醇混合溶劑重復(fù)提取2次，每次15mL。合并提取液至分液漏斗中。以下步驟同方法一4、5。

31、2、類胡蘿卜素的柱色譜別離方法一：選一支1.520cm色譜柱，用適量層析用氧化鋁100200目作吸附劑干法裝柱，高度約1020cm，要求緊密勻?qū)?。別離方式為梯度洗脫，第一步用石油醚6090洗脫。先沿色譜柱管壁滴加58mL石油醚至柱體各方向要均勻，待溶劑液面降至氧化鋁柱面頂端時，用滴管迅速地小心滴加510滴樣品至柱子中，待樣品液面即將在柱面上消失時，沿管壁小心滴加石油醚3-5滴，沖洗粘在管壁上的有色物質(zhì)。如此重復(fù)操作3-4次，直至管壁沖冼干凈為止。隨后，在管內(nèi)參加盡可能多的石油醚進行洗脫，第一步收集到的洗脫液為黃色。待洗脫液清亮無色后用石油醚：丙酮=3：2V/V的混合液洗脫，第二步收集到的洗脫液

32、為紅色。最后用丙酮將前兩步不能洗脫的剩余組分洗脫下來。分別收集三步洗脫液，用作薄層色譜檢測及分光光度法測定。方法二：操作步驟與方法一根本相同，只是別離方式不一樣。本方法用石油醚作流動相進行一步洗脫，分別接收不同顏色的洗脫液，作后續(xù)步驟實驗用。并將本方法的別離效果與方法一進行比擬。3、類胡蘿卜素的薄層色譜檢測對前面得到的類胡蘿卜素樣品以及柱色譜別離得到的樣品分別進行薄層分析，以檢查柱色譜別離效果。薄層層析板預(yù)先用硅膠G制備并活化110，1小時，展開劑為石油醚60-90：丙酮=3：2V/V。薄層別離后觀察斑點位置，計算各斑點的Rf值，并明確各斑點歸屬。在本實驗條件下，薄層檢測結(jié)果為：-胡蘿卜素，黃

33、色，Rf值為0.89；番茄紅素，深紅色，Rf值為0.84。4、類胡蘿卜素的分光光度法測定取柱色譜別離后得到的樣品，用石油醚適當稀釋至儀器測量范圍，然后用721型分光光度計分別在420520nm范圍測定它們的光密度E，并做出E-曲線每隔10nm測定一次光密度。指出各自最大吸收峰max，并與標準吸收對照鑒定。注釋：新鮮番茄果肉組織中含有大量水分，類胡蘿卜素處在含水量很高的細胞環(huán)境中，有機溶劑不易滲透進去，因此，為了提高提取效率，減少提取溶劑用量，應(yīng)首先用食鹽對番茄果肉進行脫水處理。經(jīng)食鹽一次脫水處理后，番茄果肉里仍然含有一定量水分，致使所用提取溶劑還是無法進入細胞內(nèi)很好地將類胡蘿卜素溶出，應(yīng)選用弱

34、極性溶劑丙酮對之進一步脫水，同時也會溶出局部類胡蘿卜素。為了最大限度地減少類胡蘿卜素的損失，故應(yīng)將前步脫除下來的水分及這一步的丙酮浸提液都濾入分液漏斗中合并處理。經(jīng)丙酮處理后的番茄果肉便可直接加有機溶劑浸提。如果用番茄醬或胡蘿卜做原料提取類胡蘿卜素，食鹽脫水及丙酮進一步脫水處理這些步驟便可省去。濃縮提取液時應(yīng)當用水浴加熱蒸餾瓶，最好用減壓蒸餾，而且不可蒸得太快、太干，以免類胡蘿卜素受熱分解破壞。如用乙酸乙酯提取胡蘿卜素，提取液濃縮至12ml后，應(yīng)停止蒸餾，拆卸儀器，將蒸餾瓶敞口，讓剩余的乙酸乙酯揮發(fā)至干，然后再加適量石油醚溶解，所得溶液即為類胡蘿卜素樣品，用于下一步實驗。切不可將經(jīng)過濃縮的乙酸

35、乙酯提取液直接用于柱色譜別離。在提取及柱色譜別離兩步中，本實驗分別提供了兩種方法。實驗過程中，可將全班學(xué)生分為兩批，分別按不同方法進行實驗，實驗結(jié)束后，再讓學(xué)生通過比擬得出應(yīng)有的結(jié)論。五、思考題1、根據(jù)本實驗結(jié)果，試提出一個從植物材料中提取、別離、鑒定植物色素的一般流程。2、柱色譜別離類胡蘿卜素實驗中，黃色物質(zhì)、紅色物質(zhì)各是什么色素？試就實驗現(xiàn)象作出解釋。3、在類胡蘿卜素的薄層色譜檢測中，你究竟觀察到了幾個斑點？它們的Rf值各是多少？如實記錄實驗現(xiàn)象，并對實驗現(xiàn)象做出解釋。此外介紹紙層析法和柱色譜法一、紙層析法1.原理以丙酮和石油醚提取食物中的胡蘿卜素及其他植物色素，以石油醚為展開劑進行紙層析

36、，胡蘿卜素極性最小，移動速度最快，從而與其他色素別離，剪下含胡蘿卜素的區(qū)帶，洗脫后于450nm波長下定量測定。2.適用范圍參照GB12389-90。本方法適用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡蘿卜素的測定，其最小檢出限為0.11g。3.儀器和設(shè)備1 實驗室常用設(shè)備。2 玻璃層析缸。3 HYPERLINK /product/st242.html o 分光光度計 t _blank 分光光度計。4 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：具150mL球形瓶。5 恒溫水浴鍋。6 皂化回餾裝置。7 點樣器或微量注射器。8 濾紙。4.試劑除特殊說明外，實驗用試劑為分析純，水為蒸餾水。4.1 石油醚沸程3060：同時是展開劑。

37、4.2 無水硫酸鈉：分析純。4.3 5%硫酸鈉溶液。4.4 1+1氫氧化鉀溶液：取50g氫氧化鉀溶于50ml水。4.5 無水乙醇：需脫醛處理。1 檢驗乙醇是否含醛：銀氨液：加濃氨水于5%硝酸銀液中，直至氧化銀沉淀溶解，參加2.5mol/L氫氧化鈉溶液數(shù)滴，如發(fā)生沉淀，再加濃氨水使之溶解。銀鏡反響：加2ml銀氨液于試管內(nèi)，參加幾滴乙醇搖勻，參加少許2.5mol/L氫氧化鈉溶液加熱。如乙醇中無醛，那么沒有銀沉淀，否那么有銀鏡反響。2脫醛方法：取2g硝酸銀溶于少量水中，取4g氫氧化鈉溶于溫乙醇中，將兩者傾入1L乙醇中，搖勻，靜置一、兩天，將上層清液傾入蒸餾瓶中，蒸餾，棄去初蒸的50ml。注：蒸餾速度

38、控制在1滴/秒。4.6 -胡蘿卜素標準貯備液：取5mg-胡蘿卜素標準品，溶于10ml三氯甲烷中，濃度約為500g/ml，準確測其濃度。1 標定： 取標準溶液10.0l， 加正己烷3.00ml，混勻。測其吸光度值，比色杯厚度為1cm，以正己烷為空白，入射光波長450nm，平行測定三份，取均值。2 計算公式： X1=A13.011E10000.01式中： X1-胡蘿卜素標準溶液濃度，mg/ml；A -吸光值；E-胡蘿卜素在正己烷溶液中，入射光波長450nm，比色杯厚度1cm，溶液濃度為1ppm的吸光系數(shù)，為0.2638；1將ppm換算成mg/ml；10003.01測定過程中稀釋倍數(shù)的換算。0.01

39、注：配制標準溶液時，應(yīng)注意標準品的結(jié)構(gòu)是胡蘿卜素還是胡蘿卜素酯。通常標準品不能完全溶解于有機溶劑中，尤其是胡蘿卜素酯，所以必要時應(yīng)先將標準品進行皂化，再用有機溶劑提取，用蒸餾水洗滌至中性后，濃縮定容。再進行標定。由于胡蘿卜素很容易分解破壞，所以每次使用前標準品均需標定，且測定樣品時需帶標準品同步操作。4.7 -胡蘿卜素標準工作液：將已標定的標準液用石油醚準確稀釋，使每毫升溶液相當50g，避光保存于冰箱中。5.操作步驟5.1樣品的采集和處理1 糧食：樣品用水洗三次，置60烤箱中拷干，磨粉，儲于塑料瓶中，放一小包樟腦精，蓋緊瓶塞保存，備用。2 蔬菜與其他植物性食物：取可食部用水沖洗三次后，用紗布吸

40、去水滴，切碎，用勻漿器制成勻漿，貯于塑料瓶中，冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?.2測定步驟以下步驟需在避光條件下進行1樣品提?。喝∵m量樣品，相當于原樣15g含胡蘿卜素約2080g勻漿，糧食樣品視其胡蘿卜素含量而定，置100ml帶塞錐形瓶中，參加丙酮20ml，石油醚5ml，振搖1min，靜置5min，將提取液轉(zhuǎn)入盛有100ml5%硫酸鈉溶液的分液漏斗中，再于錐形瓶中參加10ml丙酮-石油醚混合液，振搖1min，靜置5min，將提取液并入分液漏斗中。如此提取23次，直至提取液無色為止。 植物油和高脂肪樣品：需先皂化，取適量樣品10g，加脫醛乙醇30ml，再加10ml1:1氫氧化鉀溶液，回流加熱30min，然后用

41、冰水使之迅速冷卻，皂化后樣品用石油醚提取，直至提取液無色為止。注：原國標方法中，不是所有的樣品均進行皂化處理。但是許多植物性樣品由于細胞壁較厚，在勻漿或研磨過程中不易完全破壞，使胡蘿卜素無法完全釋放。并且盡管植物性樣品中脂肪含量較少，但仍含有一定脂質(zhì)成分，如果不進行皂化，會出現(xiàn)提取不完全和提取時出現(xiàn)乳化現(xiàn)象；濃縮時殘留脂質(zhì)，使定容體積不準確；紙層析展開不完全，造成測定結(jié)果偏移。所以建議除酒類、飲料外所有樣品均進行皂化處理。2洗滌：將提取液靜置分層，棄去下層水溶液，反復(fù)用5%硫酸鈉溶液振搖洗滌，每次約15ml，直至下層水溶液清亮為止。將皂化后樣品提取液用水洗滌至中性。將提取液通過盛有10g無水硫

42、酸鈉的小漏斗，漏入球形瓶，用少量石油醚分數(shù)次洗凈分液漏斗和無水硫酸鈉層內(nèi)的色素，洗滌液并入球形瓶內(nèi)。注：經(jīng)過無水硫酸鈉輔助過濾，提取液中應(yīng)不含水分。3濃縮與定容：將上述球形瓶內(nèi)的提取液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓蒸發(fā)，水浴溫度為60，蒸發(fā)至約1ml時，取下球形瓶，用氮氣吹干，立即參加2.00ml石油醚定容，備層析用。4紙層析濾紙先在飽和水蒸氣的空氣中吸收水分后(一般吸收約70)，其一局部生成水合纖維素配位化合物，固定在濾紙上作固定相點樣：在18cm30cm濾紙下端距底邊4cm處做一基線，在基線上取A、B、C、D四點，吸取0.1000.400ml濃縮液6.3在AB和CD間迅速點樣。注意：保持濾紙枯燥，點樣

43、應(yīng)該快速細致，在基線上形成細窄直線展開：待紙上所點樣液自然揮發(fā)干后，將濾紙卷成圓筒狀，置于預(yù)先用石油醚飽和的層析缸中，進行上行展開。注：層析缸應(yīng)事先用石油醚飽和，并且防止水分進入。洗脫：待胡蘿卜素與其他色素完全分開后，取出濾紙，自然揮發(fā)干石油醚，將位于展開劑前沿的胡蘿卜素層析帶剪下，立即放入盛有5ml石油醚的具塞試管中，用力振搖，使胡蘿卜素完全溶入試劑中。5比色測定：用1cm比色杯，以石油醚調(diào)零點，于450nm波長下，測吸光度值，以其值從標準曲線上查出胡蘿卜素的含量，供計算時使用。6標準工作曲線繪制：取胡蘿卜素標準使用液濃度為50g/ml1.00、2.00、3.00、4.00、6.00、8.0

44、0ml，分別置于100ml具塞錐形瓶中，按樣品測定步驟進行提取、洗滌、紙層析等操作，點樣體積為0.100ml，標準曲線各點胡蘿卜素含量依次為2.50、5.00、7.50、10.00、15.00、20.00g。為測定低含量樣品，可在0至2.50g間加做幾點，以胡蘿卜素含量為橫坐標，以吸光度為縱坐標繪制標準曲線。6.計算X2=cV210012V1m1000式中： X2-樣品中胡蘿卜素的含量，以胡蘿卜素計，mg.100g；c -在標準曲線上所查得的胡蘿卜素含量，g；V1-點樣體積，ml；V2-樣品石油醚提取液濃縮后的定容體積，ml；m -樣品質(zhì)量，g。7.考前須知同一實驗室平行測定或重復(fù)測定結(jié)果的相

45、對偏差絕對值10%。二、柱色譜法1. 原理和適用范圍同紙層析法，只是將紙層析換成中性氧化鋁柱層析。2.試劑1 中性氧化鋁：80100目。用前180烘干4小時至恒重。2 其余試劑同紙層析法。3.儀器及設(shè)備1色譜柱：為1.0cm25cm的玻璃柱，底端收縮變細，并有一活塞，用于調(diào)控液體流速；距底端上1cm處有一篩板，孔徑為1630m。用前需枯燥。2 其余設(shè)備同紙層析法。4.操作步驟4.1樣品采集和處理同紙層析法。4.2測定步驟1 樣品提取、洗滌等步驟同紙層析法。2 將洗滌后提取液濃縮并定容至10ml。3柱色譜：將已枯燥的中性氧化鋁浸泡于石油醚中，以濕法填充色譜柱至高度為15cm，其上端加2cm無水N

46、a2SO4，使石油醚自由流下，保證其水平高于Na2SO4平面0.5cm。注意色譜柱填充時應(yīng)防止水分，不要有氣泡進入。將樣品提取液參加色譜柱上，自由流下，待提取液流至柱面時，分次參加石油醚2ml，洗滌柱壁，再參加石油醚洗脫，收集流出液至黃色帶全部流出。流出液經(jīng)60水浴減壓蒸餾后，N2吹干，定容。4 比色法測定同紙層析法。5.考前須知1柱色譜法的優(yōu)點是在測定胡蘿卜素的同時可測定其他類胡蘿卜素和色素。類胡蘿卜素、色素和胡蘿卜素的極性不同，胡蘿卜素極性最小先被極性小的石油醚洗脫，增加洗脫液極性如參加乙醚、丙酮可先后將極性稍大的類胡蘿卜素如葉黃素、葉紅素、葉綠色洗脫。2紙層析法和柱色譜法均不能區(qū)分-、-

47、和-胡蘿卜素，雖然標準品為-胡蘿卜素，但實際結(jié)果為總胡蘿卜素。不過天然食品中大局部為-胡蘿卜素，對結(jié)果影響不大。兩種方法測定結(jié)果相當。3HPLC的原理、適用范圍、樣品前處理及操作同紙層析法，濃縮定容后的樣品液不經(jīng)過紙層析，而進入HPLC的C18柱，經(jīng)流動相洗脫后，用紫外分光 HYPERLINK /product/st267.html o 光度計 t _blank 光度計檢測。HPLC可別離-、-胡蘿卜素并可同時測定多種脂溶性維生素，是目前國內(nèi)外常用的測定方法。中草藥化學(xué)成分檢出試劑配制法 =yaeEp ?1OS%RBF *| hL 1qS 乙液：8g碘化鉀溶于20ml水中。 vPSH GG%j

48、+Ed 溶液甲和乙等量混合，于棕色瓶中可以保存較長時間，可作沉淀試劑用，如作層析顯色劑用，那么取上述混合液1ml與醋酸2ml，混合即得。 -4;QB? UiaY0 .D 目前市場上碘化鉍鉀試劑可直接供配制：7.3g碘化鉍鉀，冰醋酸10ml，加蒸餾水60ml。 BNu zlR :6N:4 2碘化汞鉀Mayer試劑：氯化汞1.36g和碘化鉀5g各溶于20ml水中，混合后加水稀釋至100ml。 Bb8lklQ mi%d()%C #xm|s 二、苷類檢出試劑： EYcvD!1g zf5sw.4 一糖的檢出試劑： $xUKppn J37 35 1堿性酒石酸銅Fehiling試劑：本口分甲液與乙液，應(yīng)用時

49、取等量混合。 !o-y= C!Y|k.p 甲液：結(jié)晶硫酸酮6.23g，加水至100ml。 )j,e $m Rs|W; 乙液：酒石酸鉀鈉34.6g，及氫氧化鈉10g，加水至100ml。 ,B5Ptf# &oWWc$ 2-萘酚Molisch試劑。 $P866F rPaD#GA7 甲液：-萘酚1g，加75%乙醇至10ml。 YRG+I GX eGiJ%I 乙液：濃硫酸 d;m Q=k 1 pvI(hjMYPk 3氨性硝酸銀試劑：硝酸銀1g，加水20ml溶解，注意滴加適量的氨水，隨加隨攪拌，至開始產(chǎn)生的沉淀將近全溶為止，過濾。 N!SGX+Wqa;m 4-去氧糖顯色試劑 r;|Bc$P 2muhJ 1

50、三氯化鐵冰醋酸Keller-Kiliani試劑 eb9qg.9Z K9+ 乙液：亞硝酸鈉5g，加水至50ml jMZl.v :g=n&x 應(yīng)用時取甲、乙液等量在冰水浴中混合后，方可使用。 +YdfrF Ow&4F; 5Gibb試劑： RV7l=G9tq EanGDLz8 甲液：0.5%2，6-二氯苯醌-4氯亞胺的乙醇溶液。 vJ p yp_:RE 乙液：硼酸一氯化鉀一氫氧化鉀緩沖液pH9.4。 KR%DpQ& -dZ7;n5&_ 注試劑配制法中：1.水是指蒸餾水；2.不指出溶劑的即為水溶液；3.醇指95%；4.試劑配制后應(yīng)澄清，如不澄清可過濾。 (.K|l 9v8JaI3 三內(nèi)酯、香豆素類 7

51、p?*&7; I_oJx 1異羥肟酸鐵試劑 KL-$B*i !MOVvO 甲液：新鮮配制的1N羥胺鹽酸鹽M=69.5的甲醇液。 D PjTR RtwlPzS 乙液：1.1N氫氧化鉀M=56.1的甲醇液 M,7A|?O 1VxMx 丙液：三氯化鐵溶于1%鹽酸中的濃度為1%的溶液。 09eH .k2%ILp 應(yīng)用時甲、乙、丙三液體按次序滴加，或甲、乙兩液混合滴加后再加丙液。 $hZbP&sI Wo5G23:xz 5氫氧化鉀試劑：10%氫氧化鉀水溶液。 p-V#nPb u&l2s&i 6氧氯化鋯試劑：10%氧氯化鋯甲醇溶液。 %J?PG vdt*l 7鋯一枸櫞酸試劑： &:L8; m d| -r:4

52、 甲液：2%氧氯化鋯甲醇液。 d%9I*Qo0, ,)V*xpp 乙液：2%枸櫞酸甲醇液。 6 6x|7 Cd#*Wp)s 五蒽醌類： UE7 P =BEN.yU!N.4 1氫氧化鉀試劑：10%氫氧化鉀水溶液。 dG7sYOU a,cDj 2醋酸鎂試劑：105醋酸鎂甲醇溶液。 AG W rFq9 31%硼酸試劑：1%硼酸水溶液。 u.hnQsM NBMY1Xgj 4濃硫酸試劑：濃硫酸。 6KOql3 g1zqh, 5堿式醋酸鉛試劑：見二一四一4。 ) HjA; BMX x(W 六強心苷類 L?t *G ;=WIC+Nr 13，5-二硝基苯甲酸Kedde試劑。 =EQ3uX R0ta Q 甲液：

53、2%3，5-二硝基苯甲酸甲醇液。 a9qZI s63JDyE 乙液：1N氫氧化鉀甲醇溶液： ftH 0aI vcSS+ 應(yīng)用前甲、乙兩液等量混合。 oz0-_ %FRkvqV* 2堿性苦味酸Baljet試劑： #nxx,i fc:CR 甲液：1%苦味酸水溶液。 s1FBz)yCY= -TtM#W 乙液：10%氫氧化鈉溶液。 #Cwn$4/6d9f 3亞硝基鐵氰化鈉一氫氧化鈉的Legal試劑： W7 E-j+2 u0e#iX 甲液：吡啶 ?x0yiVdL P52u6S 乙液：0.5%亞硝基鐵氰化鈉溶液。 LA+MX 0* APt* 丙液：10%氫氧化鈉溶液 GP$ Y4*y/Zk6Bo) 七皂苷

54、類： MDP MOA j%;)CV G 1溶血試驗：2%血球生理鹽水混懸液：新鮮兔血由心臟或耳靜脈取血，適量，用潔凈小毛刷迅速攪拌，除去纖維蛋白并用生理鹽水反復(fù)離心洗滌至上清液無色后，量取沉降紅血球用生理鹽水配成2%混懸液，貯冰箱內(nèi)備用貯存期23天。 BT3O_Xu ;v0zE j#P4Let 乙液：硫酸。 -_DiDUcXn sFCs_u1tNN 3濃硫酸試劑，濃硫酸。 w9AJlIAKt: 八含氰苷類： C%?D Ek Oy5G7R 1苦味酸鈉試劑：適當大小的濾紙條，浸入苦味酸飽和水溶液；浸透后取出晾干，再浸入10%碳酸鈉水溶液內(nèi)，迅速取出晾干即得。 B moB2x) M(WOxZ8 2亞

55、鐵氰化鐵普魯士蘭試劑： m *bKy;8 WlRZ|. 甲液：10%氫氧化鈉液。 -KJ!V769B9 乙液：10%硫酸亞鐵水溶液，用前配制。 c;8vJ 0m YZ7S5g 丙液：10%鹽酸。 0jJ28.kOp Rr;LVq+ 丁液：5%三氯化鐵液。 LY88;*:S hKzBq*cV 三、萜類、甾體類檢出試劑 qDe&Bu Q!2iOvK 1香草醛一濃硫酸試劑：5%香草醋濃硫酸液或0.5g香草醛溶于100ml硫酸一乙醇4：1中。 ;/)Mcxn kTi PZZI 2三氯化銻Carr-Price試劑：25g三氯化銻溶于15g氯仿中亦可用氯仿或四氯化碳的飽和溶液。 H?=pWB ;oY(I7

56、 3五氯化銻試劑：五氯化銻一氯仿或四氯化碳1：4，用前新鮮配制。 cpF1XpvT AhhFY 4醋酐一濃硫酸試劑：見二一七一2。 )ZgER I, &%0ycm 5氯仿一濃硫酸試劑： rt3f7 s* =YXe1$ $ 甲液：氯仿溶解樣品。 _X,+ziu% O2oe4.vd 乙液：濃硫酸。 F6DB* wnpiB 6間二硝基苯試劑： eK ZFEZ *+55 甲液：2%間二硝基苯乙醇液。 g.B%#bfg Q0zW a 乙液：14%氫氧化鉀甲醇液。 _BZ1Vnv ,?lrc 用前甲、乙兩液等量混合。 ,HFs.9#&B Ge+OmD 7三氯醋酸試劑：3.3g三氯醋酸溶于10ml氯仿，參加

57、12溶過氧化氫。 R/cA Og,Y)a;= 四、鞣質(zhì)類檢出試劑： t)YUPDQJ sLb8*fak 1三氯化鐵試劑 et=7Kl I%oRvg|q 2三氯化鐵一鐵氰化鉀試劑 |R*4;Phe dL-i)F 34-氨基安替比林一鐵氰化鉀試劑 SxJ$b i+m 4明膠試劑：10g氯化鈉，1g明膠，加水至100ml。 T:gbiQa TR*,! 五、氨基酸多肽、蛋白質(zhì)檢出試劑 %g3,qI =8Ehrlq 1雙縮脲Biuret試劑： HN6R|IH T6#CK 甲液：1%硫酸銅溶液。 pI.+Hz m4OIst 乙液：40%氫氧化鈉液。 :5E8919 zYY$D. 應(yīng)用前等量混合。 V 9w

58、I0 S8d8%R1=h 2茚三酮試劑：0.3g茚三酮溶于正丁醇100ml中，加醋酸3ml或0.2g茚三酮溶于100ml乙醇或丙酮中。 h!(K;3 x%+VStA 3鞣酸試劑：一6 1qxU ltB .Q 六、有機酸檢出試劑 =J-5.0Q_ J_;N:7p 1溴麝香草酚蘭試劑：0.1%溴麝香酚蘭或溴酚蘭、或溴甲酚綠乙醇液。 xkNyvqcw bzDIhnw 2吖啶試劑：0.005%吖啶乙醇液。 d3HN xq6cKtSv 5g重鉻酸鉀溶于100ml 40%硫酸。 %Qg+R26U t;-q!v$j 2螢光素一溴： =rdY Iz2Z+pJ 甲液：0.1%螢光素乙醇液 hhoEb(BA Sa

59、19q.% 乙液：5%溴的四氯化碳溶液。 jxJv. &3JBMYp 甲液噴、乙液熏。 1-RINCSd ,lCgQ0 3碘蒸氣 e.c3nKXZ q 0ZQ_g|% 4硫酸液：5%硫酸乙醇液，或15%濃硫酸正丁醇液?；驖饬蛩嵋淮姿?：1。 vM_:&j_? h$L8# 5磷鉬酸、硅鎢酸或鎢酸試劑：310%磷鉬酸或鎢酸乙醇液。 %e&9. %Qk/_ R1 6堿性高錳酸鉀試劑： ExRe:yU !Ra*)b 甲液：1%高錳酸鉀液。 KsXgcN!eZ6S 乙液：5%碳酸鈉液，用時等體積混合。 wb7,D ur$l Z0 72，4-二硝基苯肼試劑：取2，4-二硝基苯肼配成0.2% 2N鹽酸溶液或0.1 2%鹽酸乙醇液。實驗四 穿山龍中薯蕷皂苷元的提取別離及鑒定薯蕷皂苷元俗稱薯蕷皂素，存在于薯蕷科Diocoreaceae植物中，含量約為13。我國薯蕷科植物資源豐富，種類亦多，分布南北各地，其中作為薯蕷皂苷元生產(chǎn)原料的植物主要有盾葉薯蕷Dioscorea zingiberesis C.H.Wright俗稱黃姜、穿山薯蕷Dnipponica Makino俗稱穿山龍，用其根莖作為原料提取薯蕷皂苷元。薯蕷皂苷屬甾體皂苷，水解可得薯蕷皂苷元，這種甾體皂苷元，是近代制藥工業(yè)中合成甾體激素和甾體避孕藥的重要原料。本實驗以穿山龍為原料提取薯蕷皂苷元。穿山龍