典型實驗室常用緩沖液配置方案

1、第 PAGE25 頁 共 NUMPAGES25 頁典型實驗室常用緩沖液配置方案實驗室常用緩沖液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0) 組份濃度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法：1. 稱量121.1 g Tris 置于1 L 燒杯中。2. 加入約800 ml 的去離子水，充分攪拌溶解。3. 按下表量加入濃鹽酸調節(jié)所需要的 pH 值。PH值濃 HCl約70ml約60ml約42ml4. 將溶液定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定 pH 值，因為 Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1

2、，溶液的 pH 值大約降低0.03個單位。2)10_TE Buffer(pH7.4, 7.6, 8.0) 組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L 配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L 燒杯中。1M TrisHCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0）100ml500mM EDTA(PH8.0)20ml2. 向燒杯中加入約800 ml 的去離子水，均勻混合。3. 將溶液定容至1 L 后，高溫高壓滅菌。4. 室溫保存。3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 組份濃度：1.5 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法：1. 稱量18

3、1.7 g Tris 置于1 L 燒杯中。2. 加入約800 ml 的去離子水，充分攪拌溶解。3. 用濃鹽酸調節(jié) pH 值至8.8。4. 將溶液定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定 pH 值，因為 Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的 pH 值大約降低0.03個單位。4)3 M 醋酸鈉(pH5.2) 組份濃度：3M 醋酸鈉 配制量：100ml 配制方法：1.稱量40.8g NaAc3H 2 O 置于100-200ml 燒杯中，加入月40ml 的去離子水攪拌溶解 2.加入冰醋酸調節(jié) pH 值至5.2 3.加去離子水將溶液定

4、容至100ml 4高溫高壓滅菌后，室溫保存。5)PBS Buffer 組份濃度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L 配制方法：1. 稱量下列試劑，置于1 L 燒杯中。NaCl8gKClNa2 HPO4KH 2PO42. 向燒杯中加入約800 ml 的去離子水，充分攪拌溶解。3. 滴加濃鹽酸將 pH 值調節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述 PBS Buffer 中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6)10 M

5、 醋酸銨 組份濃度：10 M 醋酸銨配制量：100 ml 配制方法：1. 稱量77.1 g 醋酸銨置于100200 ml 燒杯中，加入約30 ml 的去離子水攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm 濾膜過濾除菌。4. 密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7) 苯酚/ 氯仿/ 異戊醇(25 : 24 : 1) 配制方法：1. 說明：從核酸樣品中除去蛋白質時常常使用苯酚/氯仿/異戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質變性并有助于液相與有機相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現的氣泡。2. 配制方法：將 Tris-HC

6、l 平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24 : 1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4保存。8 ）10 (W/V) SDS 組份濃度：10 (W/V)SDS 配制量：100ml 配制方法：1.稱量10g 高純度的 SDS 置于100-200ml 燒杯中，加入約80ml 的去離子水，68加入溶解 2.滴加濃鹽酸調節(jié) pH 值至7.2 3.將溶液定容至100ml 后，室溫保存。9 ）2 N NaOH 組份濃度：2 N NaOH 配制量：100 ml 配制方法：1. 量取80 ml 去離子水置于100200 ml 塑料燒杯中（NaOH 溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。2. 稱取8 g NaOH

7、 小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3. 待 NaOH 完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。4. 將溶液轉移至塑料容器中后，室溫保存。10 ）2.5 N HCl 組份濃度：2.5 N HCl 配制量：100 ml 配制方法：1. 在78.4 ml 的去離子水中加入21.6 ml 的濃鹽酸（11.6 N)，均勻混合。2. 室溫保存。11 ）5 M NaCl 組份濃度：5 M NaCl 配制量：1 L 配制方法：1. 稱取292.2 g NaCl 置于1 L 燒杯中，加入約800 ml 的去離子水后攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至1 L 后，適量分成小份。3. 高溫高壓滅菌

8、后，4保存。11 ）20 (W/V) Glucose 組份濃度：20 (W/V) Glucose 配制量：100 ml 配制方法：1. 稱取20 g Glucose 置于100200 ml 燒杯中，加入約80 ml 的去離子水后，攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。3. 高溫高壓滅菌后，4保存。12 ）SolutionI( 質粒提取用) 組份濃度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose 配制量：1 L 配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L 燒杯中。1M Tris-HCl（PH8.0）25ml0.5M EDTA（PH8

9、.0）20mlM）dH 2 O910ml2. 高溫高壓滅菌后，4保存。3. 使用前每50 ml 的 Solution I 中加入2 ml 的 RNase A（20 mg/ml)。13 ）SolutionII( 質粒提取用) 組份濃度：200mM NaOH，1(W/V)SDS 配制量：500ml 配制方法：1.量取下列溶液，置于500ml 燒杯中 10 SDS 50ml 2N NaOH 50ml 2.加滅菌水定容至500ml，充分混勻 3.室溫保存，此溶液保存時間最好不要超過一個月 注意：SDS 易產生氣泡，不要劇烈攪拌14 ）SolutionIII( 質粒提取用) 組份濃度：3 M KOAc,

10、 5 M CH3COOH 配制量：500 ml 配制方法：1. 稱量下列試劑，置于500 ml 燒杯中。KOAc147gCH 3 COOH2. 加入300 ml 去離子水后攪拌溶解。3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。4. 高溫高壓滅菌后，4保存。15 ）0.5 M EDTA(pH8.0) 組份濃度：0.5 M EDTA 配制量：1 L 配制方法：稱取186.1 g Na2EDTA2H2O，置于1 L 燒杯中。2. 加入約800 ml 的去離子水，充分攪拌。3. 用 NaOH 調節(jié) pH 值至8.0（約20 g NaOH)。注意：pH 值至8.0時，EDTA 才能完全溶解。4. 加去離子

11、水將溶液定容至1 L。5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6. 室溫保存。16 ）1 M DTT組份濃度：1 M DTT 配制量：20 ml 配制方法：1. 稱取3.09 g DTT，加入到50 ml 塑料離心管內。2. 加20 ml 的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm 濾器過濾除菌。3. 適量分成小份后，-20保存。17 ）10 mM ATP 組份濃度：10 mM ATP 配制量：20 ml 配制方法：1. 稱取121 mg Na2ATP3H2O，加入到50 ml 塑料離心管內。2. 加20 ml 的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，攪拌溶解。3.

12、適量分成小份后，-20保存。1mol/L 亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g 亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。1mol/L 精胺（Spermine）：溶解3.48g 精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L 后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。10mg/ml 牛血清蛋白(BSA）：加100mg 的牛血清蛋白（組分 V 或分子生物學試劑級，無 DNA 酶）于9.5ml 水中（為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋

13、白），蓋好蓋后，輕輕搖動，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。1mol/L 二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g 的原裝瓶中加32.4ml 水，分成小份貯存于-20?；蜣D移100mg 的二硫蘇糖醇 至微量離心管，加0.65ml 的水配制成1mol/L 二硫蘇糖醇溶液。8mol/L 乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g 乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L 氯化鉀（KCl）：溶解7.46g 氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L 乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g

14、 的三水乙酸鈉于約90ml 水中，用冰乙酸調溶液的 pH 至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液（0.5mol/L），混合后形成 EDTA 的三鈉鹽?；蚍Q取186.1g 的 Na2EDTA2H2O 和20g的 NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：將23.8gHEPES 溶于約90ml 的水中，用 NaOH 調 pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/L HCl：加8.6ml 的濃鹽酸至91.4ml 的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg 的 IPGT（異丙基硫代-D-半

15、乳糖苷）于10ml 水中，分成小份貯存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl26H2O 于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg 的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于-20。20mg/ml 蛋白酶 K（proteinase K）：將200mg 的蛋白酶 L 加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶 K 完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。10mg/mlRnase（無 DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg 的胰蛋白

16、RNA 酶于1ml 的10mmol/L 的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使 DNA 酶失活。用1mol/L 的 TrisHCl 調 pH 至7.5，于-20貯存。（配制過程中要戴手套）5mol/L 氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g 氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。10N 氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g 氫氧化鈉顆粒于約0.9L 水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。10SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS 慢慢轉移到約含0.9L 的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L 山梨（糖）醇（

17、Sorbitol）：溶解36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。100三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA 的試劑瓶中加入100ml 水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應在臨用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg 的 Xgal于1ml 的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20。100_Denhardt 試劑（Denhardts regent）成分及終濃度配制100ml 溶液各成分的用量2 聚 蔗 糖（Ficoll，400型）?2聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）?2BSA（組分V）?水2g?2g?2g?加水至總體積

18、為100ml依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質，分裝成小份于-20貯存。10_標準 DNA 連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接）成分及終濃度配制10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl?100mmol/L MgCl2?100mmol/L DTT?2mmol/L ATP?5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）?0.5mg/ml BSA（組分 V）（可選）?水將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以購買到100mmol/L 純 dNTPs 貯液

19、，-80可貯存至少6個月。10mmol/L dNTP 混合液成分及終濃度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP?10mmol/L 2ul 100 mmol/L dATP 貯液?2ul 100 mmol/L dCTP 貯液?2ul 100 mmol/L dGTP 貯液?2ul 100 mmol/L dTTP 貯液?12uldCTP?10mmol/L dGTP?10mmol/L dTTP?水20PEG 8000/2.5M NaCl成分及終濃度配制10ml 溶液各成分的用量20g?50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉?補足100ml加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯

20、中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。20_SSC成分及終濃度配制1L 溶液各成分的用量300mmol/L 檸 88.2g?175.3g?補足1L檬酸三鈉（二水）?3mol/L 氯化鈉?水溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L 水中，加幾滴10N NaOH溶液調 pH 為7.0，用水補足體積至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的體積分數為0.1。在37溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的 DEPC失活。DEPC 會與胺起反應，不可用 DEPC 處理 Tris 緩沖液。甲酰胺（de

21、ionized formamide）直接購買或加 Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經 Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮氣于-80貯存（防止氧化）。磷酸緩沖液（phosphate buffer）按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需 pH 的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4H2O）貯液：溶解138g 于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g 于足量水中使終體積為

22、1L。1mol/L 磷酸二氫鈉（ml）1mol/L 磷酸氫二鈉（ml）最終 pH 值877?850?815?775?735?685?625?565?510?450?390?330?280123?150?185?225?265?315?375?435?490?550?610?670?720TE（用于懸浮和貯存 DNA）成分及終濃度配制100ml 溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl?1mmol/L EDTA?水Tris 緩沖液（Tris-HCl buffer）將121g 的 Tris 堿溶解于約0.9L 水中，再根據所要求的 pH（25下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調整終

23、體積至1L。濃鹽酸的體積（ml）pH8.6?14?21?28.5?38?46?56?66?71.3?76二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50_Tris-乙酸（TAE）緩沖液成分及終濃度配制1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 堿?1mol/L 乙 酸?100 mmol/L EDTA?水242g?57.1 ml 的冰乙酸（17.4 mol/L）?200ml 的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）?補足1L5_Tris-硼酸（TBE）緩沖液成分及終濃度配制1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 堿 ?445 mmol/L 硼 酸鹽?10 mmol/L EDT

24、A?水54g?27.5g 硼酸?20 ml 的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）?補足1L染料1溴酚藍（bromophenol blue）加1g 水溶性鈉型溴酚藍于100ml 水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。1二甲苯青 FF（xylene cyanole FF）溶解1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的溴化乙錠（ethidium bromide）小心稱取1g 溴化乙錠，轉移到廣口瓶中，加100ml 水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4貯存。凝膠上樣液（gel loading solutions）6_堿性凝膠上樣液（室溫貯存）成分及

25、終濃度配制10ml 溶液各成分用量0.3 N 氫氧化鈉?6 mmol/L 300ul 10N 氫 氧 化 鈉 ?120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）?1.8g?15mg?25mg?補足到10mlEDTA?18聚蔗糖（400型）?0.15溴甲酚綠?0.25二甲苯青 FF?水6_聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml 溶液各成分用量0.15 溴 酚 藍?0.15二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?15聚蔗糖（400型）?水1.5ml 1溴酚藍?1.5ml 1二甲苯青 FF?100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）?1.5g?補足到10ml6_溴酚藍/

26、二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml 溶液各成分用量0.25 溴 酚 藍?0.25二甲苯青FF?15 聚 蔗 糖2.5ml 1溴酚藍?2.5ml 1二甲苯青 FF?1.5g?補足到10ml（400型）?水6_甘油凝膠上樣液（4貯存）成分及終濃度配制10ml 溶液各成分用量0.15 溴 酚 藍?0.15二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?50甘油?水6_蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml 溶液各成分用量0.15 溴 酚 藍?0.15二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?40聚蔗糖?水1.5ml 1溴酚藍?1.5ml 1二甲苯青 FF?100ul

27、 0.5mol/L EDTA（pH8.0）?4g?補足到10ml10_十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml 溶液各成分用量0.2溴酚藍?0.2二甲苯青 FF?200 mmol/L EDTA?0.1 SDS?50甘油?水20mg?20mg?4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)?100ul 10 SDS?5ml?補足到10mlLB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化鈉10g如果需要用1N NaOH（1ml）調整 pH 至7.0，再補足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。SOB 培養(yǎng)

28、基 將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化鈉1 mol/L 氯化鉀用水補足體積到1L。分成100ml 的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml 的小份中加1ml 滅過菌的1mol/L 氯化鎂。SOC 培養(yǎng)基 成分、方法同 SOB 培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml 的小份中加1ml 滅過菌的1mol/L 氯化鎂外，再加2ml 滅菌的1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足夠水中，再用水補足到100ml，用0.22um的濾膜過濾除菌）。TB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60，再加100ml 滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的 溶 液 （ 2.31g 的 KH2PO4 和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌）。2_YT培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化鈉4ml如果需要用1N NaOH（1ml）調整 pH 至7.0，再補足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。YPD 培養(yǎng)基