長春中醫(yī)大《中藥化學(xué)》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)04硅膠柱層析分離SOP

1、 硅膠柱層析分離SOP材料與儀器玻璃儀器：色譜柱、三角燒瓶、量筒、玻璃棒、燒杯、膠頭滴管固定部分：萬能夾、雙頂絲收集樣品：自動(dòng)收集器或試管（帶試管架） 第一部分 準(zhǔn)備階段第1步 認(rèn)真讀題簽3遍，注意指令中數(shù)量要求，避免發(fā)生稱量錯(cuò)誤。第2步 觀察實(shí)驗(yàn)環(huán)境，注意給出的材料與儀器。第3步 在大腦中將裝置圖重現(xiàn)出來，并注意第一步操作。第二部分 實(shí)驗(yàn)部分第1步 涮洗玻璃儀器。對(duì)所有用到的玻璃儀器都應(yīng)是干燥的。將實(shí)驗(yàn)中需要的玻璃儀器取出用自來水及洗滌劑清洗（如果競賽時(shí)間不夠，這步可能會(huì)省略，注意現(xiàn)場提示）再用蒸餾水沖洗3次（用洗瓶中蒸餾水）用洗瓶中乙醇沖洗2次（清洗液倒入廢液缸，不要倒入水池中）用吹風(fēng)吹干

2、（電吹風(fēng)或氣流干燥器），干凈干燥后，備用。第2步 吸附劑硅膠處理稱取硅膠：（1）如果指令中有稱取量，則直接稱?。唬?）如果指令中沒給出用量，而給出樣品量，則樣品與硅膠通常用量比為1:3060g（如果指令中提示樣品分離難易程度，可依此選擇，難分離者則硅膠用量增多）色譜分離硅膠通常為100200目。（3）具體步驟：將天平調(diào)平將合適的干燥燒杯置天平上扣重輕輕加入硅膠（避免粉塵灑落到天平或?qū)嶒?yàn)臺(tái)上，接近稱樣量時(shí)再輕輕抖腕），記錄取量取下燒杯關(guān)閉天平（如果后續(xù)還需要稱量，此時(shí)先不拔電源）2.按給出洗脫劑的條件配制洗脫劑 按比例先計(jì)算用量，用合適的量筒取溶劑，置合適的錐形瓶中配制（注意錐形瓶不能過小，避免

3、振搖混合不均勻）（注意試劑瓶蓋放的位置；試劑瓶標(biāo)簽方向；灑在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上；放平觀察是否到刻度；如果不到刻度，用干凈干燥補(bǔ)色譜柱安裝（20分）1. 選擇合適色譜柱：色譜柱為內(nèi)徑均勻、下端（帶或不帶活塞）縮口的硬質(zhì)玻璃管。 2. 將色譜柱固定在鐵架上（或鐵架臺(tái)）上，垂直、穩(wěn)定。 3. 端口或活塞上部鋪墊適量脫脂棉或玻璃纖維。 4. 色譜柱規(guī)格：高度與直徑比（15:1（20:1）二、硅膠填裝（20分）1.柱色譜硅膠：顆粒大小均勻，通常直徑為0.070.15mm的顆粒。2.干法裝柱：將硅膠通過漏斗裝入柱內(nèi)，中間不應(yīng)間斷，形成一細(xì)流慢慢加入管內(nèi)。也可用橡皮槌輕輕敲打柱硅膠柱使硅膠裝填連續(xù)均勻、緊密。柱裝好后

4、，打開下端活塞，然后倒入洗脫劑洗脫以排盡柱內(nèi)空氣，并保持一定液面。 3. 濕法裝柱：將最初準(zhǔn)備使用的洗脫劑裝入柱內(nèi)，打開下端活塞，使洗脫劑緩慢流出。然后把硅膠慢慢連續(xù)不斷地倒入柱內(nèi)（或?qū)⒐枘z與適量洗脫劑調(diào)成混懸液慢慢加入柱內(nèi)，），硅膠依靠重力和洗脫劑的帶動(dòng)，在柱內(nèi)自由沉降，此間要不斷把流出的洗脫劑加回柱內(nèi)保持一定的液面，直至把硅膠加完并在柱內(nèi)沉降不再變動(dòng)為止。然后在硅膠上面加一小片濾紙或少許脫脂棉。根據(jù)加樣量控制洗脫劑液面至一定高度。三、上樣（液體）（20分）1.濕法上樣：用少量溶劑（最好就是展開劑，如果展開劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量）將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得

5、到的溶液，沿著層析柱內(nèi)壁均勻加入，用少量溶劑洗滌后，再加入。2. 干法上樣：如樣品不溶于裝柱時(shí)用的洗脫劑，將樣品溶于易揮發(fā)的溶劑中，并加入適量硅膠（不超過柱中硅膠全量的1/10）與其拌勻，除盡溶劑，將拌有樣品的硅膠均勻加到柱頂（始終保持洗脫劑有一定的液面），再覆蓋一層硅膠即可,上樣時(shí)注意沿著柱內(nèi)壁慢慢加入，始終保持硅膠上端表面平整；上樣量為硅膠的1/601/30。四、洗脫劑配制及加入、洗脫（20分）（1）洗脫劑的確定：可通過薄層色譜篩選，一般TLC展開時(shí)Rf值為0.20.3的溶劑系統(tǒng)是最佳的洗脫系統(tǒng)，采用梯度洗脫法洗脫。（2）洗脫劑組成：可用單一溶劑、混合溶液，通常一般不超過三種溶劑。（3）流速控制：先打開柱下端活塞，保持洗脫劑流速12滴/秒，上端不斷添加洗脫劑（可用分液漏斗控制添加速度與下端流出速度相近） （4）洗脫：采用梯度洗脫，洗脫劑的洗脫能力由弱到強(qiáng)逐步遞增