鄰位連接技術(shù)

1、roximity ligation assay(鄰位連接技術(shù),PLA)： 一種高靈敏度的蛋白質(zhì)檢測 技術(shù)。鄰位連接技術(shù)(proximityligationassay,PLA)被建立。該技術(shù)采用核酸適體 (aptamer)或單/多克隆抗體-核酸復(fù)合物作為鄰位連接探針(proximityprobes)。當(dāng) 一對鄰位探針同時(shí)識別同一個(gè)目標(biāo)蛋白分子時(shí)，它們將在空間位置上相互臨近，通 過連接反應(yīng)形成一段可擴(kuò)增的DNA標(biāo)簽序列，該標(biāo)簽序列能夠反映待測蛋白的種類 及濃度。該技術(shù)將對蛋白質(zhì)的檢測轉(zhuǎn)變?yōu)閷NA核酸序列的檢測，實(shí)現(xiàn)了特殊蛋白 質(zhì)的檢測,定量及定位。美國俄亥俄州立大學(xué)的研究人員近日開發(fā)出一種新技術(shù)

2、，能同時(shí)觀察細(xì)胞中的基因 數(shù)量和蛋白表達(dá)。此技術(shù)能夠詳細(xì)分析基因狀態(tài)以及相應(yīng)蛋白表達(dá)之間的關(guān)聯(lián)，并 更透徹地了解癌癥及其他復(fù)雜疾病。該成果發(fā)表在神經(jīng)腫瘤(Neuro-Oncology) 上。這種新技術(shù)稱為熒光原位基因蛋白分析(fluorescent in situ gene protein assay)。它 將傳統(tǒng)的熒光原位雜交(FISH)與原位鄰位連接分析(in situ proximity ligation assay，簡稱PLA)相結(jié)合。PLA分析采用核酸適體(aptamer)或單/多克隆抗體-核酸復(fù)合物作為鄰位連接探針。 當(dāng)一對鄰位探針同時(shí)識別同一個(gè)目標(biāo)蛋白分子時(shí)，它們將在空間位置上相

3、互臨近， 通過連接反應(yīng)形成一段可擴(kuò)增的DNA標(biāo)簽序列，該標(biāo)簽序列能夠反映待測蛋白的 種類及濃度。文章的作者之一，俄亥俄州立大學(xué)的Arnab Chakravarti博士表示：“據(jù)我所知，這 是目前第一個(gè)技術(shù)，能讓我們了解同一細(xì)胞中的基因活性和相應(yīng)蛋白表達(dá)。了解腫 瘤中的基因和蛋白表達(dá)變化，有助于我們了解是什么驅(qū)動了腫瘤行為?！蔽恼碌耐ㄓ嵶髡?，亞拉巴馬大學(xué)副教授Markus Bredel及其同事首先分析了固定的 人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞，然后分析了石蠟包埋的人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織。在這兩個(gè)分析 中，他們都發(fā)現(xiàn)了一種表皮生長因子受體基因的突變形式(EGFRvII I)的過表達(dá)， 并在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中發(fā)現(xiàn)了截短蛋

4、白。他們認(rèn)為，這種方法有潛力詳細(xì)分析細(xì)胞和組織中癌基因狀態(tài)及相應(yīng)蛋白表達(dá)之間 的關(guān)聯(lián)。他們表明，熒光原位基因蛋白分析能夠在細(xì)胞水平分辨癌基因和蛋白，這 對于異質(zhì)性疾?。ㄈ绨┌Y）特別重要。因表觀遺傳學(xué)和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的作用，這種方法對癌癥研究很有用。它將基因和蛋白 信息相關(guān)聯(lián)，能提高生物標(biāo)志物篩選的可靠性。它還能輔助治療決策，因?yàn)橛袝r(shí)只 篩選基因或蛋白產(chǎn)生了不確定的結(jié)果。更多閱讀神經(jīng)腫瘤發(fā)表論文摘要（英文）Gene protein correlation in single cellsJaclyn J. Renfrow, Adrienne C. Scheck, Neil S. Dhawan, Pau

5、l J. Lukac, Hannes Vogel, James P. Chandler, Jeffrey J. Raizer, Griffith R. Harsh, Arnab Chakravarti and Markus BredelAbstractWe present a novel methodology combining traditional fluorescent in situ hybridization with an in situ protein detection technology called proximity ligation assay. This meth

6、od has potential to perform a detailed analysis of the relationship between gene status and corresponding protein expression in cells and tissues. We demonstrate that the fluorescent in situ gene protein assay methodology is capable of resolving gene and protein patterns simultaneously on a cell-by-

7、cell basis.抗體滴度抗體滴度定義用來衡量某種抗體（antibody）識別特定抗原決定部位（epitope）所需要的最低濃度（也即最大稀釋度）。 一般表示為：仍能產(chǎn)生陽性結(jié)果的最大稀釋度。通常通過ELISA方法來檢測抗原滴度打個(gè)比方，通過間接庫姆伯斯試驗(yàn)（indirect Coombs test）檢測一個(gè)孕婦血清中anti-Rh抗體。一個(gè)患 者可能報(bào)告通過此試驗(yàn)檢出的抗體滴度為16,這表示只要血清的稀釋度不超過1/16（1份比例的血清和15份 比例的稀釋液），此試驗(yàn)都能得到陽性結(jié)果，即可識別出抗原。如果稀釋度超過1/16，則檢出的結(jié)果皆為陰 性，即抗體無法識別抗原。還有可能發(fā)生的情況是

8、，幾周過后，同樣一位患者可能檢測出抗體滴度達(dá)到32（1 份比例的血清和31份比例的稀釋液）。這可能是因?yàn)樵袐D體內(nèi)產(chǎn)生了更多的anti-Rh抗體，以至于即使更高 的稀釋度也能得到陽性結(jié)果。抗核抗體抗核抗體（antinuclear antibody, ANA）又稱抗核酸抗原抗體，是一組將自身真核細(xì)胞的各種成分脫氧 核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等作為靶抗原的自身抗體的總稱，能與所有動 物的細(xì)胞核發(fā)生反應(yīng)，主要存在于血清中，也可存在于胸水、關(guān)節(jié)滑膜液和尿液中?？购丝贵w在多種自身免疫病中均呈不同程度的陽性率，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE，95%100%）、類風(fēng) 濕性關(guān)節(jié)炎（

9、RA，10%20%）、混合性結(jié)締組織?。∕CTD，80%100%）、干燥綜合癥（SS,10%40%）、全身性硬皮病（85%90%）、狼瘡性肝炎（95%100%）、原發(fā)性膽汁性肝硬化 （95%100%）等，但經(jīng)皮質(zhì)激素治療后，陽性率可降低?？购丝贵w在類風(fēng)濕病人中約有20%50%IgG型 ANA呈陽性，小兒類風(fēng)濕ANA的陽性率約19%35%，伴發(fā)虹膜睫狀體炎者陽性率高（50%90%），故 ANA陽性預(yù)示類風(fēng)濕有發(fā)生慢性睫狀體炎的可能。巳發(fā)現(xiàn)75%類風(fēng)濕病人有多形核白細(xì)胞的特異性ANA或 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA ）可使白細(xì)胞核受到破壞 解釋抗核抗體是一組對細(xì)胞核內(nèi)的DNA，RNA，蛋白或這些

10、物質(zhì)的分子復(fù)合物的自身抗體。按其核內(nèi)各個(gè) 分子的性能不同可將各ANA區(qū)分開來，如（一）抗DNA抗體，（二）抗組蛋白抗體，（三）抗非組蛋白抗體 （四）抗核仁抗體等。每一大類又因不同抗原特性而再分為許多種類。因此ANA在廣義上是一組各有不同臨 床意義的自身抗體，更確切的名稱應(yīng)為抗核抗體譜。ANA主要存在于IgG，也見于IgM、IgA，甚至LgD及 LgE 中。常見的核免疫熒光杭核抗體試驗(yàn)有以下幾種圖形：（1）均質(zhì)型：核質(zhì)染色均勻一致，這種染色型常與 抗組蛋白和抗DNA抗體有關(guān)；（2）斑點(diǎn)型：核質(zhì)染色呈斑點(diǎn)狀，抗可提取性核抗原（ENA）抗體常呈這種 染色型；（3）周邊型：熒光染色圍繞在核膜周圍，它與

11、抗DNA抗體有關(guān)；（4）核仁型：僅有核仁染色，具 有抗4-6SRNA抗體呈現(xiàn)這種染色型；（5）著絲點(diǎn)型：在體外培養(yǎng)的細(xì)胞株（喉癌細(xì)胞）在核分裂相期時(shí)， 可見到熒光染色的著絲點(diǎn)排列成特殊圖型，而在鼠肝做底物中看不到此類圖型，而被遺漏。抗體分類抗核抗體的分類，由于核抗原不同，有多種不同的ANA?？笵NA抗體抗DNA抗體有抗雙鏈DNA （ds DNA）和抗單鏈（ss DNA）抗體之分?？筪s DNA抗體與SLE的關(guān)系密 切，且隨疾病的活動度而升降，病情好轉(zhuǎn)者其滴度多下降甚或轉(zhuǎn)陰?？箂s DNA抗體則與抗ds DNA不同，可 在多種疾病出現(xiàn)，包括一些非自身免疫性疾病，如細(xì)菌和病毒感染。故在臨床上無實(shí)用

12、價(jià)值。而抗ds DNA抗 體被認(rèn)為是紅斑狼瘡（SLE ）所特有。抗DNA的自身抗體在SLE發(fā)病中起一定作用。在一些SLE患者，DNA大分子存在于循環(huán)中或粘附于 多種器官的微血管結(jié)構(gòu)，這些循環(huán)或器官原位抗原型DNA均可與循環(huán)自身抗體發(fā)生反應(yīng)，形成免疫復(fù)合物 激活炎癥系統(tǒng)，在一些器官如腎臟，肺和腦組織引起免疫復(fù)合物介導(dǎo)的疾病，導(dǎo)致組織損傷?？箍商崛〉暮丝乖╡xtractable nuclear antigen.ENA）抗體此抗體原經(jīng)鹽水或磷酸緩沖液處理，易從胞核中提取出來，且不含DNA。應(yīng)用免疫熒光技術(shù)，抗ENA抗體型染色多呈斑點(diǎn)型。此類抗原分為九種，故 產(chǎn)生九種相應(yīng)抗體。（1）抗核糖核蛋白抗體

13、（antiribonucleoprotein；抗RNP抗體）：抗原來源與SM相同。它對去氧核糖核 酸酶不敏感，但對核糖核酸酶，胰酶敏感。1972年把它作為診斷混合性結(jié)締組織病（MCTD）的重要血清學(xué) 依據(jù)。但以后發(fā)現(xiàn)本抗體可在多種風(fēng)濕性疾病出現(xiàn)，不具備對某個(gè)病的特異性，但有助于鑒別結(jié)締組織病和非 結(jié)締組織病?？购薘NP抗體見于近32%的SLE患者，幾乎見于所有MCTD患者。（2）抗SM抗體：SM系一患者Smith的簡稱。1966年Tan&Kunkel首先在患者Smith體中發(fā)現(xiàn)?？?原來源于小牛，兔胸腺，人脾等組織的一種酸性糖蛋白?？筍M抗體可見于1/3或以上的SLE患者，不出現(xiàn) 于其他疾病中

14、，對SLE診斷有特異性，成為很有價(jià)值的SLE診斷標(biāo)志，但無此抗體不能排除診斷。（3）抗SS-A抗體：系在發(fā)現(xiàn)Sjogren氏綜合征（SS）的A抗原后而命名，主要見于SS。本抗原可 以從人、牛、豬脾中提取。它除存在核內(nèi)外，也存在于細(xì)胞漿內(nèi)。對胰酶敏感，對核糖核酸酶抵抗，能耐熱（56 度）。（4）抗Ha抗體：抗Ha抗體可與小牛胸腺可溶性核提取物（以及小牛和鼠的肝提取物）起反應(yīng)。見于SS 患者，亦稱之為SS-B抗體.應(yīng)用沉淀素反應(yīng)，補(bǔ)體結(jié)合以及熒光技術(shù)檢測。多數(shù)人認(rèn)為13%SLE及33%SS患 者有抗Ha沉淀性抗體。（5）抗PM-1抗體：系多發(fā)性肌炎的特異性抗體?？乖敌∨Ｐ叵俸颂崛∥?，有人暫稱之為

15、PM-1。最 初有人應(yīng)用補(bǔ)體結(jié)合抑制試驗(yàn)，確定該抗體特性，在皮肌類患者中發(fā)現(xiàn)PM-1抗體。有人測定在多發(fā)性肌類患 者陽性率13.6%，皮肌類（DM）20%，系統(tǒng)性硬化并肌炎25%，SLE并肌炎偶有陽性，在其他疾病和正常 人均陰性。說明本抗體對肌炎診斷有一定特異性。（6）抗MA1抗體：為發(fā)現(xiàn)抗核酸蛋白抗原的抗體，稱之為抗MA1抗體。該抗體只出現(xiàn)于某些嚴(yán)重的 SLE患者中。（7）抗Scl-70抗體：因出現(xiàn)在硬皮病且其分子量為70000,故名?？乖瓰閴A性非組蛋白，北京協(xié)和醫(yī) 院對系統(tǒng)性硬化用免疫雙擴(kuò)散法測定得抗Scl-70抗體陽性率為60%。在其他結(jié)締組織和非結(jié)締組織病偶有陽 性，而正常人均陰性，說

16、明本抗體有較高的特異性，是系統(tǒng)性硬化的標(biāo)記抗體（8）抗Jo-1抗體：因患者而命名。國外報(bào)道在多發(fā)性肌炎（PM）患者陽性率為30-50%，合并有肺間 質(zhì)纖維化的肌炎則達(dá)60%，而在皮肌炎（DM）患者則低于10%，在其他疾病均陰性。（9）抗Ku抗體：因患者命名，國外報(bào)道本抗體多見于合并有肌炎的系統(tǒng)性硬化患者，陽性率達(dá)55%?？傊筆M-1，抗Jo-1，抗Ku都與肌炎有關(guān)?？菇M蛋白抗體組蛋白是一組堿性蛋白質(zhì)，含有稍高量的賴氨酸及精氨酸。是與DNA形成的復(fù)合物，結(jié)合成DNA 一組 蛋白。組蛋白抗體見于藥物誘發(fā)的SLE。國外報(bào)道，用免疫熒光三步法測23例藥物致狼瘡陽性率為96%， 12例SLE中42%

17、陽性。北京協(xié)和醫(yī)院以同樣方法檢測488例服用異煙肼，68例服用苯妥英鈉，40例服用復(fù) 降片（內(nèi)含肼苯噠嗪），都在服用6個(gè)月以上者和另133例服他巴唑3個(gè)月以上者，無一例查到本抗體。這 種差異可能與我國服用肼苯噠嗪和普魯卡因酰胺的患者較少之故，也不能除外人種不同而造成的差異。抗著絲點(diǎn)抗體其抗原為緊附于染色體著絲點(diǎn)的DNA蛋白質(zhì)。因此需要選擇分裂相活躍的細(xì)胞作為底物，這種細(xì)胞的 著絲點(diǎn)較易被暴露。多選用人喉癌上皮細(xì)胞（HEP-2），其優(yōu)點(diǎn)是核大，分裂相多。國外報(bào)道本抗體多見于CREST綜合征（即表現(xiàn)為軟組織鈣化，雷諾現(xiàn)象，食管功能低下，指端硬化，毛細(xì)血管擴(kuò)張）。陽性率達(dá)90% 以上，稱之為CRES

18、T的標(biāo)記抗體。根據(jù)協(xié)和醫(yī)院觀察測定結(jié)果，我國系統(tǒng)性硬化絕大部分是彌散型，CREST型極少見；抗著絲點(diǎn)抗體的陽性率在系統(tǒng)性硬化為20%, CREST型38%，彌散型10%，說明它不一 定是CREST型的標(biāo)記抗體?？购巳士贵w抗核仁抗體是一組對核仁不同RNA成分的抗體。由于成分（4-6sRNA）不同，因此構(gòu)成斑塊，斑點(diǎn)， 均質(zhì)等不同圖型。本核體在以HEP-2細(xì)胞為底物間接免疫熒光檢查為明顯。協(xié)和醫(yī)院免疫組的陽性率是 PSS38.5%，SLE6.1%，RA15.3%，（陽性者都合并有指端硬化），SS8.6%，PM/DM10.0%，雷諾現(xiàn)象 25%，其他結(jié)締組織病和正常人均陰性?？购巳士贵w不僅在PSS最

19、多見，且滴度亦高，故它對PSS診斷有一 定的幫助?？购丝贵w的檢測在自身免疫病的臨床診斷、鑒別診斷、評價(jià)療效和預(yù)后估計(jì)中具有較大的意義，因此常 將抗核抗體的檢測作為自身免疫病的重要初篩試驗(yàn)?？贵w意義臨床意義SLE：約99% （86%100%）的活動期SLE病人ANA陽性，其滴度也常為1:80，但它的特異性差。 對于未經(jīng)治療的疑似患者，多次檢查抗核抗體，若結(jié)果陰性，應(yīng)考慮其他疾病的可能。ANA陽性本身不能確 診任何疾病，但ANA陽性且伴有特征性狼瘡癥狀則支持狼瘡診斷。ANA陰性幾乎可除外SLE的診斷。但應(yīng) 注意有5%的SLE病人ANA可為陰性，這其中大部分為抗SSA抗體、抗SSB抗體陽性，因?yàn)闇y定

20、ANA通 常用鼠肝或鼠腎做底物，而這些組織核內(nèi)含SSA、SSB、Jo-1、rRNP抗原相對較少，所以不易測出其相應(yīng)抗 體?？杉幼鋈撕戆┥掀ぜ?xì)胞為底物的方法進(jìn)行檢測。陽性意義抗核抗體譜包括抗核抗體（ANA）、抗DNA抗體、抗核內(nèi)可溶性抗原抗體（ENA）。ENA又包括抗史 密斯抗體（Sm）、抗核糖核蛋白體（RNP）抗體、抗干燥綜合征A （SSA/Ro）抗體、抗干燥綜合征B （SSB/La）抗體、抗硬皮病-70 （Scl-70）抗體。臨床意義為：1ANA： ANA為一系列抗細(xì)胞核抗原的自身 抗體的總稱。一般應(yīng)用免疫熒光的方法檢測。根據(jù)核熒光的類型分為以下幾種類型：周邊型（M型）：核 周邊的熒光增強(qiáng)呈

21、環(huán)狀。M型的ANA主要有抗雙鏈DNA抗體組成，故高滴度的M型ANA幾乎僅見于SLE， 因此有助于SLE的診斷。均質(zhì)型（H型）：整個(gè)細(xì)胞核呈一片模糊而均勻的熒光。H型的ANA主要有抗脫 氧核蛋白抗體組成。高滴度的H型ANA主要見于SLE，而低滴度H型ANA偶可見于藥物性狼瘡，JRA等其 他自身免疫性疾病。斑點(diǎn)型（S型）：核內(nèi)熒光呈顆粒狀。是有抗Sm抗體，抗SSB/La抗體、抗Scl-70 抗體等多種抗體組成。因此S型ANA可見于SLE，混合性結(jié)締組織?。∕CTD），硬皮病（PSS），干燥綜 合征（SS），多法性肌炎及皮肌炎（PM或DM）等自身免疫病。2抗DNA抗體：抗DNA抗體主要為抗雙 鏈DN

22、A （ds-DNA）抗體?？筪s-DNA抗體主要見于SLE患兒，其他疾病及正常人很少出現(xiàn)，是SLE的診斷 標(biāo)準(zhǔn)之一。高滴度的抗ds-DNA抗體不僅表示疾病的活動性，而且提示疾病累及腎臟的可能性。3ENA: 抗Sm抗體：其抗原主要為U簇小分子細(xì)胞核糖核蛋白微粒。抗Sm抗體是SLE的特異性抗體，為SLE的診 斷指標(biāo)之一。Sm抗體與狼瘡的腎臟和中樞神經(jīng)病變有關(guān)?？筊NP抗體：其抗原主要為U1小分子細(xì)胞核 糖核蛋白粒子，主要見于混合結(jié)締組織病，患者SLE、PSS或DM的臨床表現(xiàn)，高滴度的RNP抗體為混合結(jié) 締組織病的標(biāo)志?？筍SA/Ro抗體：抗SSA抗體主要參與皮膚的病理損害，引起重度過敏為特征的急性

23、皮 膚型狼瘡的皮損，當(dāng)母體血清中含有IgG類的抗SSA抗體，可引起新生兒狼瘡綜合征，出現(xiàn)典型的SLE皮損， 該抗體還可以與胎兒的心臟的傳導(dǎo)系統(tǒng)結(jié)合，導(dǎo)致新生兒先天性心臟完全型傳導(dǎo)組滯?？筍SB/La抗體：該 抗體是公認(rèn)的干燥綜合征的標(biāo)志抗體，其他免疫性疾病如果發(fā)現(xiàn)抗SSB抗體陽性，患者一般有繼發(fā)性干燥綜 合征?？筍cl-70抗體：其僅見于硬皮病，是硬皮病的特異性抗體。因此你還要進(jìn)一步檢查查明引抗核抗體 陽性的病因。檢測方法由于ANA的復(fù)雜性及多樣性，故測定方法繁多。ANA常用的方法有免疫熒光法、放射免疫法、ELISA、 免疫雙擴(kuò)散、對流免疫電泳及免疫印跡技術(shù)等。1 .免疫熒光法檢測血清總ANA

24、最常用的方法是熒光免疫組化法。多用小鼠肝切片或印片作為細(xì)胞核基 質(zhì)，結(jié)果比較穩(wěn)定可靠，在熒光顯微鏡下見到的細(xì)胞核有熒光著色為陽性反應(yīng)。如將患者血清先進(jìn)行不同比例 的稀釋，可以做大致的定量試驗(yàn)，在1:80稀釋仍然雖陽性時(shí)，對SLE的診斷有較大的參考價(jià)值。在油鏡下觀 察結(jié)果，可以將ANA陽性的熒光現(xiàn)象分成4種主要的熒光核型，核型的確定對臨床診斷有進(jìn)一步的參考價(jià)值。 周邊型表示抗DNA抗體存在；均質(zhì)型表示有抗DNP抗體；斑點(diǎn)（顆粒）型多為抗ENA抗體；核仁 型多為抗核小體抗體。SLE患者常出現(xiàn)周邊型、勻質(zhì)型或混合型，斑點(diǎn)型多見于混合結(jié)締組織病，而硬皮病 多為核仁型；周邊型對SLE有較高的特異性。有人

25、用錐蟲或血鞭毛蟲（例如綠蠅短膜蟲試驗(yàn)）作基質(zhì)測定抗dsDNA抗體，因?yàn)檫@些血寄生蟲的動基 體內(nèi)含大量的純dsNDA，無其他抗原干擾；在陽性結(jié)果時(shí)，可見鞭毛一端的動基體顯示清晰的熒光。因此該 試驗(yàn)用于測定抗dsDNA抗體具有特異性強(qiáng)和敏感性高的優(yōu)點(diǎn)。另外，短膜蟲對人畜無害，可以人工養(yǎng)殖，來 源方便，值得推廣。放射免疫法常用檢測抗DNA抗體，有Farr法及過濾法。Farr法的原理為用同位素標(biāo)記DNA，被 標(biāo)記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結(jié)合，經(jīng)50%硫酸銨飽和液沉淀，然后比較沉淀物和上清液中的放射 活性，從而得出DNA結(jié)合活性，一般結(jié)合率大于20%為陽性。過濾法是在分離結(jié)合物時(shí)用纖維素酯薄膜濾

26、 器（孔徑為0.45Mm）進(jìn)行過濾，游離的DNA被濾去而與抗體結(jié)合的復(fù)合物被阻留在濾膜上。ELISA臨床上主要是應(yīng)用間接ELISA檢測抗dsDNA抗體，其重復(fù)性及敏感性均較對流免疫電泳及 雙擴(kuò)散為高。巳有試劑盒供應(yīng)。免疫印跡（immunoblotting）先將混合抗原作凝膠電泳，分離開不同的區(qū)帶，然將這些帶轉(zhuǎn)印到硝 酸纖維素膜上，最后用酸標(biāo)抗體或放射性同位素標(biāo)記抗體進(jìn)行檢測和分析。由于該試驗(yàn)不需純化的單個(gè)抗原， 可在同一固相上作多項(xiàng)分析檢測，靈敏度高，特異性強(qiáng)。故巳廣泛用于自身免疫病患者血清中多種自身抗體的 檢測，如檢測抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。另外，還可用傳統(tǒng)

27、的瓊脂雙向擴(kuò)散法、對流免疫電泳法、間接血凝法和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等。PAS染色法概況PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）在組織學(xué)上，主要用來檢測組織中的糖類。過碘酸把糖類相 鄰兩個(gè)碳上的羥基氧化成醛基，再用Schiff試劑和醛基反應(yīng)使呈現(xiàn)紫紅色。原理PAS染色又稱過碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用來顯示糖元和其它多糖物質(zhì)。原理：過碘酸能使細(xì)胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化成二醛，再與Schiff氏液的無色品紅結(jié)合，紅色，定位于 胞漿上。應(yīng)用隨著醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，糖原染色應(yīng)用的范圍更加廣泛，如用以證明與鑒別細(xì)胞內(nèi)空泡狀的性質(zhì)，心 肌病變及其他心血管疾病的診斷，糖原累積病診斷和研究

28、，糖尿病的診斷和研究，用于某些腫瘤的診斷等。 除用于糖原的鑒定和黏液的顯示外，還可以觀察腎小球基底膜、結(jié)腸杯狀細(xì)胞中性黏液物質(zhì)、阿米巴滋養(yǎng) 體和霉菌的著色。臨床診斷、分類和治療提供了重要的依據(jù)方法固定液Carnoy固定液：純酒精60 ml冰醋酸10ml氯仿30ml,也可以選用75%酒精. 液配制1）過碘酸酒清夜配法：過碘酸（HIO .2H O） 0.4g 95%酒精 35ml M/5 醋酸鈉（2.72g+蒸餾水 100ml） 5ml 蒸餾水 10ml保存于冰箱內(nèi)，用棕色瓶，可用兩周.2）Schiff 氏液：0.5克堿性品紅加入100毫升蒸餾水中，時(shí)時(shí)搖動三角瓶5分鐘,使之充分溶解.冷卻至50弋后過濾加入10 毫升1N鹽酸.冷卻至25T,加入0.5-1克偏重硫