2010版中國(guó)藥典培訓(xùn)回答（第2部分：微生物限度）

1、1、微生物方法驗(yàn)證，要求菌株回收率70%，是否有上限要求？（如不得高于100%或者110%）。答：沒有上限。但一般不會(huì)高于100%，因?yàn)榧舆M(jìn)去的菌量是一樣的，如果超過100%可看成是操作上的誤差。按微生物的特性，如果不超過太多，是可以接受的，但沒有具體上限。（本所控制在110%以內(nèi)）。2、在微生物方法驗(yàn)證時(shí)，霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證只用黑曲霉及白色念珠菌做方法學(xué)驗(yàn)證，在操作培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)：在玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)生長(zhǎng)的白色念珠菌的形態(tài)太小與營(yíng)養(yǎng)瓊脂上培養(yǎng)的細(xì)菌的某些形態(tài)大小相同，這樣如何判斷營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)的菌落是否是白色念珠菌？為何這兩種菌落形態(tài)相似？答：菌落形態(tài)相似不等于就是同一種菌。在驗(yàn)證時(shí)，營(yíng)養(yǎng)瓊

2、脂的驗(yàn)證菌株為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌，如果本底菌為0，則營(yíng)養(yǎng)瓊脂上長(zhǎng)的菌應(yīng)該不是白色念珠菌。要判斷是否為白色念珠菌，應(yīng)進(jìn)行白色念珠菌的相應(yīng)鑒定方法后才能確定。任何微生物都不可能只是從菌落就可以進(jìn)行判斷，只能判斷為疑似，然后再做一系列相應(yīng)的鑒定實(shí)驗(yàn)后才能進(jìn)行判斷。3、生孢梭菌的適宜計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基？（很多驗(yàn)證需對(duì)生孢梭菌進(jìn)行計(jì)數(shù)）答：最簡(jiǎn)便的方法是用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基上層為含氧層，適宜需氧菌生長(zhǎng)，下層為厭氧層（下層高度最好7cm以上），適宜厭氧菌生長(zhǎng)。在培養(yǎng)1618小時(shí)這個(gè)時(shí)間進(jìn)行觀察，計(jì)數(shù)，超過20小時(shí),由于繁殖量大，培養(yǎng)基將混濁，點(diǎn)計(jì)不清?；蛘呤怯酶鐐惐葋啳傊囵B(yǎng)基

3、，澆注后，置厭氧罐（袋）里，再置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。4、微生物限度檢查法中所用的培養(yǎng)基要進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn)，請(qǐng)問這些培養(yǎng)基還需要做無菌檢查試驗(yàn)嗎？答：微生物限度檢查，藥典上沒有特別說明對(duì)培養(yǎng)基作無菌性檢查，但每次都要做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，陰性對(duì)照是檢查整個(gè)檢驗(yàn)系統(tǒng)是否被微生物污染，實(shí)際上也包括了培養(yǎng)基的無菌性檢查。5、微生物限度檢查法中所用的培養(yǎng)基如：營(yíng)養(yǎng)瓊脂、EMB、Macl等培養(yǎng)基其分裝容器需要預(yù)先滅菌嗎？答：不用。只要是潔凈的就行，因?yàn)榉盅b后還要滅菌。6、具有抑菌性的供試品，細(xì)菌、霉菌、都是用薄膜過濾法來檢查的，那么沙門菌可以用常規(guī)法來檢查嗎？就是可以不經(jīng)過過濾直接接種到營(yíng)養(yǎng)肉湯中嗎？答：這要看

4、你驗(yàn)證的結(jié)果。如果通過驗(yàn)證，你的品種是對(duì)沙門菌有抑制作用，且用培養(yǎng)基稀釋法不能消除其抑菌性，則就必需考慮用薄膜過濾法。7、微生物限度檢查中，稀釋劑對(duì)照組，是在稀釋液中加入50100cfu的菌，還是把稀釋液制成含量50100cfu的濃度呢？答：是把稀釋液制成含50100cfu/ml菌的濃度。（在這里，我對(duì)上次講課時(shí)關(guān)于稀釋劑對(duì)照組操作的PPT進(jìn)行糾正，對(duì)于離心 薄膜過濾法的稀釋劑對(duì)照組的操作應(yīng)該是：含50100cfu/ml菌的稀釋液 離心 取稀釋液（與試驗(yàn)組同樣取上層液） 過濾、沖洗 貼平板）8、稀釋級(jí)對(duì)照組:含50100cfu/ml菌稀釋液離心取供試液 稀釋液過濾、沖洗貼平板。這里需要加供試液

5、嗎？是否應(yīng)為上述離心后的菌液？答：不需要取供試液，只取“上述離心后的菌液”。關(guān)于這一情況，我在第7題里已經(jīng)作了說明。9、當(dāng)要做稀釋劑對(duì)照組時(shí)，是否就是從制備供試品時(shí)就同時(shí)做一份不含供試品而是含菌50100cfu的樣品？等于按同一個(gè)方法制備一個(gè)供試品，五個(gè)含菌稀釋液對(duì)照組？答：是的。10、菌落計(jì)數(shù)是否需要將每天計(jì)數(shù)的數(shù)據(jù)登記在記錄本上，是否可以只記錄最終的數(shù)據(jù)？答：可以。每天計(jì)數(shù)的目的是預(yù)防菌落彌漫互相覆蓋，干擾最終的點(diǎn)計(jì)。你可以用油性筆將每天點(diǎn)計(jì)的數(shù)記錄在培養(yǎng)皿上，發(fā)報(bào)告時(shí)只要最終菌落數(shù)就行了。11、若樣品中有不溶物（如片劑中的輔料顆粒），經(jīng)常會(huì)影響培養(yǎng)前期的結(jié)果，藥典要求逐日計(jì)數(shù)，所以報(bào)告中

6、會(huì)出現(xiàn)第二、三日菌落數(shù)小于第一日的現(xiàn)象，請(qǐng)問該如何向客戶或監(jiān)檢機(jī)構(gòu)解釋這種結(jié)果？或者是否可以不計(jì)第一、二日菌落數(shù)，待輔料顆粒與菌落可以區(qū)分后再計(jì)數(shù)？答：報(bào)告書不需要顯示第一、第二天的結(jié)果，只需報(bào)告最終結(jié)果。理由請(qǐng)見第9題答復(fù)。或者是在營(yíng)養(yǎng)瓊脂中加入TTC試劑（每100ml加入0.1%）12、由于微生物檢驗(yàn)的特殊性，對(duì)于樣品的微生物限度檢查計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)是否可登記在表格內(nèi)（此表格僅含樣品名稱、批號(hào)及檢查結(jié)果）。之后再將檢測(cè)結(jié)果移至詳細(xì)記錄中？答：原始記錄應(yīng)該只有1份。如果你說的詳細(xì)記錄是屬于一般記錄，是沒有必要的，如果是指報(bào)告書，就應(yīng)該沒問題。這要看你自己訂的SOP。13、直接接種法培養(yǎng)后的菌落報(bào)告：

7、原液230cfu,稀釋10倍后 40cfu,請(qǐng)問按2010版藥典的菌落數(shù)報(bào)告規(guī)則如何報(bào)告菌落數(shù)？答：報(bào)告菌落數(shù)為4010=400cfu。應(yīng)以菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)后的最大值作為報(bào)告結(jié)果。14、05版藥典供試品離心5分鐘，而10版藥典改用離心3分鐘，原來按5分鐘驗(yàn)證的產(chǎn)品是否需要重新驗(yàn)證？答：是的。需要再確認(rèn)一下。15、10版藥典附錄微生物限度檢查法中結(jié)果判斷的菌落計(jì)數(shù)單位是以“cfu”表示，但正文品種項(xiàng)下是以“個(gè)”表示，最終應(yīng)以哪位為準(zhǔn)呢？答：應(yīng)該是以cfu為單位。正文是由于印刷時(shí)沒統(tǒng)一修改過來，關(guān)于這個(gè)問題，在增補(bǔ)本上修訂過來。（在增補(bǔ)本沒出來之前，正文品種還是以個(gè)為單位）16、為何控制菌液的濃

8、度為50-100cfu/ml。答：50-100cfu在平板上比較好點(diǎn)計(jì)，菌落不容易重疊。少于50，則實(shí)驗(yàn)誤差會(huì)增大，重現(xiàn)性不好，大于100則容易造成菌落太密或重疊不好計(jì)數(shù)。17、藥典上控制菌檢查的方法驗(yàn)證，只是說把菌加至增菌培養(yǎng)基中檢出即可，那我們實(shí)際做驗(yàn)證與記錄時(shí)，是否要做增菌以后的步驟呢？答：要。不然你怎么知道檢出來的菌是你加進(jìn)去的試驗(yàn)菌呢？18、采用薄膜過濾法檢驗(yàn)，陽性菌，計(jì)數(shù)是否也用此方法計(jì)數(shù)？答：是的。19、對(duì)于10版藥典延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，控制菌35-37改為30-35培養(yǎng)溫度，一些已經(jīng)驗(yàn)證（按05版藥典）檢品是否需要重新驗(yàn)證？是否有必要進(jìn)行延長(zhǎng)時(shí)間前后菌生長(zhǎng)情況變化的驗(yàn)證試驗(yàn)？答：目前

9、沒有相關(guān)性規(guī)定，我們認(rèn)為可按原來已經(jīng)驗(yàn)證的方法，用2010年版的培養(yǎng)時(shí)間和溫度再確認(rèn)一下，如果結(jié)果符合藥典要求，則可用。如果不可行，則調(diào)整后再進(jìn)行驗(yàn)證。20、若無需都重新驗(yàn)證，那么參照標(biāo)準(zhǔn)為05版藥典，又可以通過什么文件來更改為參照10版藥典？答：請(qǐng)看上一題。21、檢驗(yàn)控制菌用培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力的檢查，也需要對(duì)照培養(yǎng)基嗎？例如：大腸埃希菌用的BL增菌液。答：是的。請(qǐng)看附錄“微生物限度檢查法”中的表2。22、10版藥典增加貼膏劑的檢查，狗皮貼膏藥屬于貼膏劑嗎？答：應(yīng)該是的。請(qǐng)對(duì)照中國(guó)藥典一部附錄P8進(jìn)行確定。23、請(qǐng)問若試驗(yàn)條件限制未能使用勻漿儀制備非規(guī)定滅菌制劑是否可采用溫?zé)幔ú怀^45）的稀釋

10、液？答：如果能夠充分分散樣品，可以的。24、請(qǐng)問若采用薄膜過濾法進(jìn)行驗(yàn)證，由于過濾難度大，是否可以每膜過濾相當(dāng)于供試品0.1g，報(bào)告以結(jié)果乘以10？答：驗(yàn)證計(jì)數(shù)時(shí)可以的，驗(yàn)證控制菌時(shí)檢驗(yàn)總量應(yīng)達(dá)到藥典要求，如果一張膜檢驗(yàn)量達(dá)不到，可分幾個(gè)膜。25、請(qǐng)問采用靜置分層取上清液薄膜過濾，是否需要加稀釋劑對(duì)照組？答：個(gè)人觀點(diǎn)可以不用,但未經(jīng)驗(yàn)證。26、供試品靜置分層取上清液進(jìn)行試驗(yàn)，靜置35分鐘，是否經(jīng)過驗(yàn)證供試品的本底菌不會(huì)沉到底部？答：未經(jīng)驗(yàn)證。27、培養(yǎng)基適用性檢查，抑制能力檢查用菌種是哪些？答：控制菌的培養(yǎng)基適用性檢查,請(qǐng)看藥典“微生物限度檢查法”中表2，計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基請(qǐng)看“計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢

11、查”。28、投料中有神曲提取物，限度應(yīng)界定為多少？答：不是藥材原粉投料，標(biāo)準(zhǔn)均按“不含藥材原粉的制劑”執(zhí)行。29、微生物限度檢查里有關(guān)經(jīng)驗(yàn)類的東西都必須經(jīng)過驗(yàn)證才可以使用,那么驗(yàn)證的內(nèi)容包括哪些數(shù)據(jù)應(yīng)記錄，是否也應(yīng)該有文件與記錄？答：參照藥典，你是作什么樣的檢驗(yàn)，就作什么樣的驗(yàn)證，有驗(yàn)證就應(yīng)該有記錄。30、比如10倍稀釋級(jí)菌落數(shù)為0，100倍稀釋級(jí)菌落數(shù)為2，按2005年版藥典應(yīng)以低稀釋級(jí)菌落數(shù)報(bào)告為10，還是按最高平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告為200個(gè)/g，是否理解正確？答：按中國(guó)藥典2005年版報(bào)告應(yīng)為10個(gè)/g（或ml），按中國(guó)藥典2010年版報(bào)告應(yīng)為200cfu/g（或ml）。31、計(jì)數(shù)

12、方法的驗(yàn)證：執(zhí)行新版藥典是否就延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間做方法驗(yàn)證？答：是。32、平皿法中提到“每個(gè)稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少檢驗(yàn)2ml供試液”，是每皿注2ml還是每皿注1ml？如要做0.5ml或0.2ml，本級(jí)是否還需做1ml?答：常規(guī)平皿法時(shí)每皿注1ml，做2個(gè)皿；培養(yǎng)基稀釋法（即每皿0.5ml或0.2ml）時(shí)，供試液總量也應(yīng)是2ml，每1ml菌落數(shù)合計(jì)后，2ml的菌落數(shù)再平均；本級(jí)就不需做1ml了，但下一級(jí)就只做1ml/皿就行了。33、在細(xì)菌霉菌計(jì)數(shù)檢查中，老師提到的每個(gè)稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少檢驗(yàn)2ml供試液，但2010版藥典上并沒有要求要這樣做，那應(yīng)以哪個(gè)做法為準(zhǔn)？答：藥典中對(duì)平皿法的描述：平皿法“取供試液

13、1ml，置直徑90mm 的無菌平皿中，注入1520ml 溫度不超過45的溶化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。每稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少制備2 個(gè)平板。”這里的描述是以常規(guī)平皿法進(jìn)行描述的，所以“每稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少制備2 個(gè)平板”，也就是2ml的量。對(duì)于培養(yǎng)基稀釋法，請(qǐng)看藥典供試液的制備中3. (6) 。34、10版藥典要求檢查沙門菌的供試品，其檢驗(yàn)量應(yīng)增加20g或20ml，（其中10g或10ml用于陽性對(duì)照試驗(yàn)）是否指20g或20ml樣品中10g或10ml直接用于沙門菌控制檢查，另10g或10ml加pH7.0的緩沖液100ml作為1：1

14、0的供試品溶液作為細(xì)菌，霉菌，酵母菌的檢驗(yàn)嗎？還是指20g都用于沙門菌檢查？答：20g都是用于沙門菌檢查。沙門菌的檢查法是：取3份200ml營(yíng)養(yǎng)肉湯，其中2份分別加入10g或10ml樣品，取其中1份加入10100cfu菌液作陽性對(duì)照。第3份加入10ml稀釋劑作陰性對(duì)照進(jìn)行檢查，所以。細(xì)菌，霉菌，酵母菌檢驗(yàn)的樣品不包括在這里。35、沙門菌檢查為10g或10ml，為何一次檢查量又為20g或20ml？（P130）答：其中10g（或10ml）是檢驗(yàn)用的，另10g（或10ml）是用于陽性對(duì)照試驗(yàn)的。請(qǐng)看上一題目解釋。36、采用薄膜過濾法時(shí)，濾膜采用何種方法滅菌最好？答：據(jù)我們經(jīng)驗(yàn)，最好采用一次性過濾器。

15、如果用多次使用的過濾器，則濾膜用濕熱滅菌比較好，因?yàn)楦蔁釡缇?，濾膜較脆，試驗(yàn)時(shí)不容易保證濾膜完整。37、方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)，采用平皿法稀釋級(jí)計(jì)數(shù)，是否要做稀釋級(jí)對(duì)照組？答：稀釋級(jí)對(duì)照組？是指本底菌組嗎？如果是，那就要。因?yàn)橐叫性囼?yàn)，才能知道同一稀釋級(jí)的本底菌是多少。如果是指稀釋劑對(duì)照組，就不用，因?yàn)樗玫南♂寗┦撬幍湟?guī)定的，是無毒性的稀釋劑。38、方法驗(yàn)證的培養(yǎng)基稀釋法驗(yàn)證（樣品0.2ml）只做2個(gè)平皿，每個(gè)平皿的加菌量是多少？如果同步加0.2ml菌，其加菌量就達(dá)不到50100cfu。答：不管每皿加的供試液的量是多少，每皿加菌液的量都是1ml ,即都是50100cfu。39、平皿法（稀釋法）計(jì)數(shù)

16、驗(yàn)證時(shí)，取最低稀釋供試液如0.5ml和50100cfu試驗(yàn)菌，那50100cfu的試驗(yàn)菌是指50100cfu還是50100cfu0.5ml？我們是要加1ml還是0.5ml的試驗(yàn)菌？答：平皿法（稀釋法）計(jì)數(shù)驗(yàn)證時(shí)，每皿要加的菌液是50100cfu，一般我們配制的菌液濃度是50100cfu/ml，所以就加1ml。如果你配制的菌液不是這個(gè)濃度，你可以折算，只要加的菌數(shù)是50100cfu/皿就行了。40、細(xì)菌霉菌方法驗(yàn)證，同時(shí)做1ml，0.5ml，0.2ml供試品組及供試品驗(yàn)證組時(shí)，菌液是否也按1ml，0.5ml，0.2ml分別加入？此時(shí)1ml，0.5ml，0.2ml供試品驗(yàn)證組中的菌數(shù)能否也達(dá)到50

17、100cfu？答：驗(yàn)證時(shí)，不論是1ml，0.5ml，0.2ml的供試液，每皿的加菌量都是50100cfu，即1ml（如果你配制的菌液濃度是50100cfu/ml）。41、培養(yǎng)基稀釋方法驗(yàn)證，每皿0.2ml，加菌液0.2ml，那么0.2ml的菌液計(jì)數(shù)是否在50100cfu0.2ml。答：請(qǐng)看上一題的解釋。42、微生物限度檢查霉菌、酵母菌要求不超過100的情況下，這兩種菌是不是要分開來檢，用不同培養(yǎng)基檢測(cè)？目前只用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基檢測(cè)這兩種菌，有沒有必要修改？答：按藥典規(guī)定，一般品種是用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基檢測(cè)這兩種菌；含蜂蜜、王漿的液體制劑，用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基測(cè)定霉菌數(shù)，用酵母浸出粉胨葡萄糖瓊

18、脂培養(yǎng)基測(cè)定酵母菌數(shù)，合并計(jì)數(shù)。43、測(cè)表面微生物時(shí)，直接接觸藥品與間接接觸藥品的限度（25）一致，是否有不妥，如果有不同意見，可否提供其計(jì)數(shù)方法？另外，如果檢測(cè)到菌落數(shù)超過100以上，那么報(bào)告規(guī)則的菌數(shù)也是取兩位有效數(shù)字嗎？答：“測(cè)表面微生物”？這應(yīng)該是藥包材的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)吧？由于我們尚未開展這項(xiàng)業(yè)務(wù)，所以對(duì)其標(biāo)準(zhǔn)情況不了解，但既然已經(jīng)成為標(biāo)準(zhǔn)，就肯定有其合理性，如有不同意見，可向標(biāo)準(zhǔn)制訂部門反映，并提出你認(rèn)為合理的解決辦法。微生物的報(bào)告規(guī)則一般都是取兩位有效數(shù)字。44、內(nèi)包裝材料PVC硬片，鋁箔等樣品的微生物檢驗(yàn)（限度）方法？答：是藥包材的檢驗(yàn)？應(yīng)該有相應(yīng)的檢驗(yàn)方法吧！45、控制菌檢查，大腸埃

19、希菌IMViC試驗(yàn)，結(jié)果顯示未檢出，有沒有硬性規(guī)定必須要進(jìn)一步鑒定？答：對(duì)于大腸埃希菌檢查，IMViC試驗(yàn)已經(jīng)是鑒定試驗(yàn)了，如果IMViC試驗(yàn)結(jié)果顯示未檢出，那么就可以報(bào)告未檢出大腸埃希菌。46、菌數(shù)報(bào)告按兩位有效數(shù)字報(bào)告，是按數(shù)字修約方法進(jìn)行數(shù)據(jù)修約，還是只用保留兩位有效數(shù)字，如菌數(shù)為364報(bào)告菌數(shù)為360，還是370；若菌數(shù)為3670報(bào)告菌數(shù)應(yīng)為多少？答：修約原則是4舍6入5留雙。即菌數(shù)為364報(bào)告菌數(shù)為360；若菌數(shù)為3670報(bào)告菌數(shù)應(yīng)為3700；如果是3650，則報(bào)告菌數(shù)應(yīng)為3600。47、在日常檢驗(yàn)中控制菌檢驗(yàn)方法通過驗(yàn)證的控制菌檢驗(yàn)可否不做陽性對(duì)照？理解：在驗(yàn)證時(shí)已做過控制菌 供試

20、液，驗(yàn)證時(shí)供試液對(duì)控制菌無抑菌性，若只是做控制菌（不加供試液）則在培養(yǎng)基適用性時(shí)已證明培養(yǎng)基的質(zhì)量，那么每次試驗(yàn)做陽性對(duì)照的意義是什么？或者陽性對(duì)照試驗(yàn)怎么做？答：從理論上來說是可以的，驗(yàn)證試驗(yàn)實(shí)際上就是檢驗(yàn)時(shí)的陽性對(duì)照試驗(yàn)。但藥典要求控制菌檢查時(shí)必需同時(shí)從陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，這應(yīng)該是考慮到檢驗(yàn)過程的檢驗(yàn)系統(tǒng)的誤差吧。本人認(rèn)為，生產(chǎn)廠家對(duì)自己的產(chǎn)品在經(jīng)驗(yàn)證后，檢驗(yàn)時(shí)如果每天同一產(chǎn)品批量很大，可以只做一個(gè)陽性對(duì)照，但對(duì)于藥檢所則必須每批都做，因?yàn)閷?duì)于同一品種，不同廠家其生產(chǎn)工藝不盡相同，在檢驗(yàn)過程中對(duì)被檢微生物的干擾也不同。因此，藥檢所應(yīng)每批都做。48、取樣量藥典要求“從2個(gè)以上最小包裝單位中抽

21、取供試品”，是否包括2個(gè)？答：包括。49、請(qǐng)問藥廠自行做的微生物方法驗(yàn)證是否需要經(jīng)過藥檢所的審核？若產(chǎn)品更改為輔料，重新做方法驗(yàn)證，是否需要到藥檢所備案或需要藥檢所審核？答：藥廠自行做的微生物方法驗(yàn)證不需要經(jīng)過藥檢所的審核。同樣，重新驗(yàn)證后也不需要。但如果你的檢品需要報(bào)注冊(cè)檢驗(yàn)，則你必需提供你的整個(gè)驗(yàn)證資料，藥檢所將根據(jù)情況對(duì)你的方法進(jìn)行確認(rèn)，看方法是否可行。50、是否每次做培養(yǎng)基適用性都必須與對(duì)照培養(yǎng)基進(jìn)行比較？如果第一批培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基比較回收率為90%，那么第二批培養(yǎng)基與第一批培養(yǎng)基比較回收率為80%，則折算為第二批培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基比較回收率為72%，之后購(gòu)買的培養(yǎng)基與前一批比較，而

22、不用每次培養(yǎng)基適用性都與對(duì)照培養(yǎng)基比較，這樣可不可行？答：請(qǐng)按藥典要求做，至于內(nèi)部控制則要自己掌握。但你要保證第一批培養(yǎng)基在你用于與第二、第三批比較時(shí)，質(zhì)量保持其與對(duì)照培養(yǎng)基比較時(shí)一樣，因?yàn)殡S著時(shí)間的推移，培養(yǎng)基的質(zhì)量肯定有所下降。51、微生物檢驗(yàn)驗(yàn)證時(shí)，如我用一瓶普通脫水培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基測(cè)定菌落數(shù)，如普通脫水培養(yǎng)基符合適用性檢查，那么該瓶普通脫水培養(yǎng)基能否作為以后工作中的對(duì)照培養(yǎng)基來用？答：請(qǐng)看上一題的解釋。52、培養(yǎng)時(shí)間有要求2448h，也有要求2472h的，像這種時(shí)間要求范圍比較大的情況，如果在最短的時(shí)間內(nèi)（如：24h）就已經(jīng)長(zhǎng)菌，但需進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)判斷該菌是否為控制菌，那么，是否需要培

23、養(yǎng)到最長(zhǎng)時(shí)間（如：48h或72h）再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)？答：長(zhǎng)勢(shì)好的話可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)不用等到最長(zhǎng)時(shí)間。53、操作結(jié)果的RSD%的范圍比較寬裕，是否可信？（eg：黑曲霉若20cfu皿時(shí)，菌落將擴(kuò)散至難以分離，所以回收率精確度較低）答：這個(gè)問題要具體問題具體分析。菌落漫延，這是要求逐日觀察的主要原因之一，應(yīng)在菌落能分辨的時(shí)候點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。加菌量太少，容易出現(xiàn)誤差大，重現(xiàn)性差，所以要求加的菌數(shù)在50100cfu。54、含藥材細(xì)粉的膠囊如何制備供試液？答：按固體制劑供試液的制備方法制備，可用45水浴軟化溶解膠囊殼。55、大腸菌群檢查，需陽性對(duì)照嗎？答：要的。陽性對(duì)照菌為大腸埃希菌。56、菌液涂布時(shí)，用接種棒

24、還是涂布棒涂？答：用L型涂布棒，也可用玻棒自制。57、控制菌的培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查，對(duì)照菌加于固體培養(yǎng)基如何涂布，用什么工具來涂布？答：請(qǐng)看上一題。58、三部藥典中有些產(chǎn)品細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)用每g多少cfu，但有些為每g多少個(gè)，應(yīng)怎樣記錄？答：應(yīng)該是cfu才對(duì)的，這些應(yīng)該是在轉(zhuǎn)版時(shí)沒轉(zhuǎn)過來吧，在增補(bǔ)本應(yīng)該會(huì)轉(zhuǎn)過來。但是在沒轉(zhuǎn)過來之前，它還是法定的，必需按藥典上的寫法來執(zhí)行。59、如樣品的控制菌為大腸埃希菌沒檢出，但檢出其它種菌，結(jié)果該怎樣判定？答：如果是其他致病菌，請(qǐng)看微生物限度檢查法的結(jié)果判斷第一句。60、我們是做糖衣片的，微生物限度檢查吸取供試液時(shí)，吸管有時(shí)會(huì)被粉末塞住，那能不能讓供試

25、液沉淀后取其上清液呢？這樣操作結(jié)果可靠嗎？答：請(qǐng)將藥片盡可能打碎，如果還不能解決問題，我們的經(jīng)驗(yàn)是：可讓大藥渣沉降后取上層液進(jìn)行試驗(yàn)，但沉降時(shí)間盡可能短(在3-5分鐘內(nèi))，這樣做對(duì)結(jié)果會(huì)有一定影響，但應(yīng)該在可接受范圍內(nèi)。61、微生物限度檢查控制菌檢查時(shí)，如供試液的增菌后無菌生長(zhǎng)，可否直接發(fā)供試液的未檢出控制菌，此時(shí)，陽性對(duì)照試驗(yàn)還需繼續(xù)做下去嗎？答：只要能判定供試液增菌后無菌生長(zhǎng)，陽性對(duì)照試驗(yàn)菌長(zhǎng)出，就可發(fā)未檢出控制菌。62、如何理解“菌落蔓延成片不以計(jì)數(shù)”？如10-1級(jí)有1個(gè)皿的菌落成片是否用10-2級(jí)來計(jì)數(shù)？答：是的。63、如何避免菌落成片？答：1、培養(yǎng)基傾注時(shí)溫度不宜過高，可減少傾注后培

26、養(yǎng)皿里的水蒸汽太多而造成菌落容易漫延，或者加蓋“陶瓦蓋”吸收水蒸汽；2、細(xì)菌計(jì)數(shù)時(shí)，在每100ml營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中加入滅菌的1%氯化四氮唑0.1ml，可使生成的菌落變紅色，容易點(diǎn)計(jì)，也可在一定程度上抑制菌落漫延。64、請(qǐng)問一下對(duì)于生長(zhǎng)速度快、易蔓延的菌有什么好的方法控制，該如何計(jì)數(shù)，如采用陶瓦蓋培養(yǎng)時(shí)間要不要延長(zhǎng)？答：請(qǐng)看上一題的說明。如用陶瓦蓋，培養(yǎng)時(shí)間不需要延長(zhǎng)。65、請(qǐng)問若細(xì)菌、酵母菌平均菌落數(shù)不在其宜選取的范圍內(nèi)，即大于300及100cfu時(shí)，該如何報(bào)告菌數(shù)？另05版藥典的規(guī)定范圍是30300/30100，倘若當(dāng)菌落數(shù)大于300及100，如何報(bào)告？答：應(yīng)該重新試驗(yàn)，將稀釋級(jí)再往高級(jí)進(jìn)一

27、步稀釋，直到能有可報(bào)告的稀釋級(jí)?？稍诠ぷ髦幸詫?duì)產(chǎn)品的認(rèn)識(shí)將稀釋級(jí)調(diào)整到可報(bào)告的級(jí)別進(jìn)行檢驗(yàn)。66、請(qǐng)問對(duì)于抑菌性難以消除的粉末狀樣品，采用最好的消除抑菌性的方法是什么？答：如果能溶于水，目前來說，最好的除菌方法是薄膜過濾法；其次是找到相應(yīng)的中和劑。67、我們生產(chǎn)的產(chǎn)品為外用搽劑非無菌產(chǎn)品，需要對(duì)所有原輔料做微生物限度檢查嗎？答：生產(chǎn)企業(yè)對(duì)原輔料的微生物限度檢查，應(yīng)根據(jù)自己的情況進(jìn)行控制。參見一部附錄P88（或二部附錄P116），微生物限度標(biāo)準(zhǔn) 第7點(diǎn)。（個(gè)人意見：如果所用的原輔料直接投料，就要控制，如果還要進(jìn)一步提取等，則可通過控制中間產(chǎn)品的微生物限度來控制。）68、原輔料是否要單獨(dú)做方法驗(yàn)證

28、？答：所有要檢查微生物限度的品種（當(dāng)然包括原輔料），都要做方法驗(yàn)證。69、中藥材的微生物限度如何檢測(cè)？如超標(biāo)應(yīng)如何控制？答：1.中藥材的微生物限度檢查，參照固體制劑的供試液制備，并根據(jù)給藥途徑執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，如用于直接投料至口服制劑的，還應(yīng)檢大腸菌群。2.如超標(biāo)，具體問題具體分析。70、中間產(chǎn)品可否不做微生物檢測(cè)？答：中間產(chǎn)品應(yīng)該控制微生物限度，各企業(yè)應(yīng)內(nèi)部質(zhì)控相關(guān)的具體要求。71、廠家用10-2稀釋級(jí)作驗(yàn)證，那我們藥檢所作檢查時(shí)是否從10-2稀釋級(jí)開始做？答：是的。72、省所做微生物限度時(shí)，廠家沒有做驗(yàn)證，那省所是自己做驗(yàn)證，還是退回去？又或者廠家的控制菌驗(yàn)證沒有做全（例如漏了沙門菌沒做），那省所

29、怎么處理？答：1、如果是注冊(cè)檢驗(yàn)，廠家沒有做驗(yàn)證，我們是不會(huì)接收樣品的，也就是說，沒做驗(yàn)證或驗(yàn)證不全，肯定退回去。 2、如果是委托檢驗(yàn)，由于是協(xié)議性質(zhì)，我們就按協(xié)議進(jìn)行檢驗(yàn)。73、微生物限度檢查時(shí)，只有細(xì)菌數(shù)不合格，那么復(fù)試是否可以只做細(xì)菌數(shù)檢查就行了？答：可以。74、樣品制備中，如羧甲淀粉鈉等崩解劑遇水膨脹，經(jīng)試驗(yàn)1g100ml仍為膠體漿糊狀，無法過濾且難與培養(yǎng)基融合，再加大稀釋倍數(shù)，則代表量太少，請(qǐng)問這種輔料采用何種方法進(jìn)行微生物限度檢查？答：羧甲淀粉鈉應(yīng)該沒有抑菌作用，無法過濾可用平皿法進(jìn)行檢查，且供試液制備時(shí)，稀釋劑的溫度適當(dāng)調(diào)低些。75、若樣品對(duì)微生物生長(zhǎng)有促進(jìn)性，采用薄膜過濾法應(yīng)如

30、何消除此影響，或者有什么其他方法可以消除促進(jìn)性以獲得更準(zhǔn)確結(jié)果？答：采用薄膜過濾法就是很好的消除影響的方法；藥典上規(guī)定“供試液從制備到加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)基不得超過1個(gè)小時(shí)”，就是考慮到樣品對(duì)微生物存在促進(jìn)或者抑制作用的影響。因此要獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果，就必需盡量縮短從供試液的制備到加入培養(yǎng)基的時(shí)間。另外，也可根據(jù)樣品的特性有針對(duì)性的加入中和劑等。76、控制菌檢查對(duì)于大腸的檢查，MUG試驗(yàn)中顯陽性或難以判斷時(shí)，“將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到EMB”，這里的培養(yǎng)液是指MUG還是之前擴(kuò)增的BL？答：藥典上并沒有“將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到EMB”這一描述。但對(duì)于MUG和靛基質(zhì)試驗(yàn)結(jié)果不一致時(shí)，是這么規(guī)定的：“如MUG 陽性、靛基質(zhì)陰

31、性，或MUG 陰性、靛基質(zhì)陽性，則應(yīng)取膽鹽乳糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)物劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)1824 小時(shí)?！?7、膽香鼻炎含有豬膽汁膏，毛雞藥酒含有毛雞浸出夜，霍膽丸含豬膽粉，這三個(gè)產(chǎn)品需要檢沙門菌嗎？答：是的。（因含豬膽汁膏、毛雞、豬膽粉）。78、微生物檢驗(yàn)時(shí)，勻漿機(jī)應(yīng)把轉(zhuǎn)速調(diào)到多少才不會(huì)對(duì)微生物有損傷？答：沒有相關(guān)的規(guī)定，目前一般使用轉(zhuǎn)速為3000-4000轉(zhuǎn)/分鐘。79、如果使用藥典以外的培養(yǎng)基進(jìn)行微生物限度檢查（比如TSA），怎么進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查，是否有合適的對(duì)照培養(yǎng)基？答：可以參照“藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”對(duì)所用培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行控制。至

32、于是否有相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基，要看中檢所是否來得及研制。80、微生物限度檢查的方法驗(yàn)證，至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立平行試驗(yàn)，每個(gè)獨(dú)立平行試驗(yàn)可否使用不同批號(hào)的樣品？答：可以，且最好是用3個(gè)不同批號(hào)樣品進(jìn)行驗(yàn)證。81、每個(gè)獨(dú)立的平行試驗(yàn)是否有必要用3個(gè)不同批號(hào)的樣品進(jìn)行驗(yàn)證？答：用3個(gè)不同批號(hào)的樣品進(jìn)行驗(yàn)證，可以增加驗(yàn)證結(jié)果的重現(xiàn)性。82、微生物限度檢查中，培養(yǎng)基的適用性檢查時(shí)對(duì)每個(gè)批號(hào)的培養(yǎng)基進(jìn)行還是對(duì)每次制備好的培養(yǎng)基進(jìn)行？答：請(qǐng)看藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則中，關(guān)于培養(yǎng)基第3點(diǎn)，質(zhì)量控制試驗(yàn)的描述：“除藥典附錄另有規(guī)定外，在實(shí)驗(yàn)室中，若采用已驗(yàn)證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)行一次。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗(yàn)證，那么每一批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn)，試驗(yàn)的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān)附錄中進(jìn)行選擇，也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株?！?3、能否舉例說明哪些培養(yǎng)基是指示能力檢查培養(yǎng)基？答：請(qǐng)看“微生物限度檢查法”中表2。84、05版SOP中有說經(jīng)驗(yàn)證后控制菌可以不用做陽性對(duì)照，10版是否有相同的說法？已建立控制菌方法是否還需作陽性對(duì)照？答：藥典規(guī)定，控制菌檢查必需同時(shí)檢查陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。05版SOP中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作中并沒有說經(jīng)驗(yàn)證后控