實(shí)驗(yàn)室生物化學(xué)常規(guī)玻璃儀器使用講述課件

1、第四節(jié) 生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)玻璃儀器的使用學(xué)習(xí)目的說出生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室各種常規(guī)儀器的使用方法學(xué)會血液、尿液標(biāo)本的正確收集、處理與保存說出微量加樣器校正的目的及方法離心機(jī)轉(zhuǎn)速(rpm) 相對離心力(RCF)原理:利用離心機(jī)在高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生的強(qiáng)大離心力,使懸 浮于溶液中密度不同的微粒依不同的速度沉降 從 耳達(dá)到分離.純化.制備的目的.用途:分離血清,沉淀蛋白質(zhì),收集細(xì)胞.細(xì)胞器等RCF=1.118*10 *(rpm) *r普通離心機(jī)30000rpm-52普通離心機(jī)普通離心機(jī)的使用1. 使用前應(yīng)先檢查調(diào)速旋鈕（手柄）是否子啊起點(diǎn)位置“0”處，外 套筒有無破損，有無離心后的破碎殘留物，如有應(yīng)清理干

2、凈，其底 部應(yīng)放有橡皮軟墊。2. 將待離心溶液倒入容積大小適宜的離心管內(nèi)，盛液量不宜超過離心 管的2/3，以免溢出。然后放入離心外套筒。3. 將一對裝有離心管的外套筒置天平上，于離心管與外套筒間用自來 水加減法平衡至等重，然后對稱放入離心機(jī)，并將不用的離心外套 筒取出，蓋好離心機(jī)蓋。4. 接通電源，然后慢慢調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)，使轉(zhuǎn)速逐漸增加至所需的離心 轉(zhuǎn)速數(shù)。停機(jī)時，應(yīng)先將調(diào)速旋鈕撥回到幾點(diǎn)“0”處，斷電，待 其停止離心后再打開機(jī)蓋，輕輕取出離心管。用完后，倒立外套同 使其干燥存放。注意事項(xiàng)：放置離心機(jī)的位置應(yīng)平穩(wěn)，堅固，外接電源應(yīng)為三眼插座 且地線接地良好。高速離心機(jī)高速離心機(jī)的使用高速離心機(jī)技

3、術(shù)方法 主要適用于分離、純化、制備、分析高分子化合物及亞細(xì)胞組分。依其原理不同，其方法分差速離心法、速率區(qū)帶離心法和等密度離心法三種。1. 差速離心法；含有數(shù)種大小或密度不同顆粒的溶液，對密度差 速離心法將其分離成比較單一的組分。 該種方法操作簡便，適用于分離大小和密度相差較大的顆粒，對密 度相差較小的顆粒，分離效果不甚理想。2. 速率區(qū)帶離心法；該法與差速離心法的區(qū)別在于，后者整個離心過 程都是在均一介質(zhì)中進(jìn)行，而速率區(qū)帶離心法，則必須選擇合適的 梯度介質(zhì)，使樣品在梯度介質(zhì)中依其顆粒大小的不同進(jìn)行分離3. 等密度區(qū)帶離心法；先在離心管內(nèi)裝入密度梯度介質(zhì)，其密度沿離 心方向逐漸增加。在離心過程

4、中，樣品中不同密度的顆粒在離心力 作用下，分別遷移至與其密度相等的介質(zhì)中而停止沉降，由此使不 同密度的顆粒停止在各自的等密度區(qū)帶而得以分離。其沉降平衡主 要依賴于顆粒的密度，與顆粒大小及形狀無關(guān)。該法分離純化效果 好，但操作復(fù)雜。高速離心技術(shù)用的轉(zhuǎn)頭 高速和超高速離心技術(shù)用的轉(zhuǎn)頭結(jié)構(gòu)簡單，但技術(shù)要求極高，因轉(zhuǎn)頭在高速旋轉(zhuǎn)時受到很大內(nèi)應(yīng)力和拉力，長期使用會造成累積性塑性變形。內(nèi)部結(jié)構(gòu)細(xì)微缺陷，選擇和使用不當(dāng)會導(dǎo)致轉(zhuǎn)頭撕裂或爆炸事故。使用轉(zhuǎn)頭時，必須根據(jù)分離要求，正確選用轉(zhuǎn)頭。高速離心機(jī)使用中注意事項(xiàng) （1）兩管重量必須平衡等重至1.0g （2）更換、取、放轉(zhuǎn)頭時，應(yīng)小心輕放，不能與硬物碰 撞，必

5、須反復(fù)檢查轉(zhuǎn)頭的卡口是否對準(zhǔn)。嚴(yán)格控制 轉(zhuǎn)速在轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速限制的90%內(nèi)，不能滿速，甚至超 速。 （3）高速運(yùn)轉(zhuǎn)前，離心室內(nèi)一定要抽成真空，并降至規(guī) 定溫度。 （4）離心過程中增減速度不能過快。電熱恒溫水浴箱二、電熱恒溫水浴箱簡稱水浴箱主要用于恒溫水溫，保持化學(xué)反應(yīng)所需恒溫條件。加熱裝置浸入式電熱管，溫度控制為螺旋管式溫控器，靈敏度一般為0.51. 關(guān)閉水浴箱底部放水開關(guān)，注入水至適當(dāng)深度，水位不能低于電熱管。2. 接通電源，打開開關(guān)，此時若紅燈亮，表示電熱管開始加熱。調(diào)節(jié)溫控旋鈕至適當(dāng)位置。3. 觀察溫度計，當(dāng)溫度升志距所需約2時，逆時針方向旋轉(zhuǎn)調(diào)溫旋鈕至紅燈剛好熄滅。此后紅燈不斷熄滅，表示恒溫

6、控制器發(fā)揮作用，在繼續(xù)觀察一段時間溫度升降變化情況，若與所需溫度不符，只需略微調(diào)節(jié)溫控旋鈕直至達(dá)到所需恒定溫度。4. 調(diào)溫旋鈕刻度盤上的溫度標(biāo)本值與箱內(nèi)水的實(shí)際溫度不符，但可記錄水箱內(nèi)溫度計所指示的溫度與調(diào)溫旋鈕在刻度盤上的指示位置，并做好相應(yīng)記號，在多次使用的基礎(chǔ)上，就可比較迅速，準(zhǔn)確地得到需要恒定的水溫。5. 若較長時間不使用，應(yīng)將溫控旋鈕退回零位，打開放水開關(guān)，放盡水浴箱內(nèi)水，保持箱內(nèi)干燥，以免生銹。電熱恒溫干燥箱 三、電熱恒溫干燥箱 電熱恒溫干燥箱又稱烤箱，其主要用途是加熱烘干洗凈的物品和干熱滅菌。恒溫范圍一般為50300，溫控靈敏度為1.1. 將溫度計插入箱頂放氣調(diào)節(jié)器中部的插孔內(nèi)。

7、2. 將電源插頭插入接地良好的三眼插座。3. 開啟電熱絲分組開關(guān)，并視所需加熱溫度的高低，開啟一組或多組電熱絲，此時紅燈亮，表示電熱絲開始加熱，開啟箱內(nèi)鼓風(fēng)機(jī)，可幫助箱內(nèi)熱空氣對流。4. 觀察箱頂溫度計溫度指示，待溫度上升至所需溫度差23時，調(diào)節(jié)自動恒溫器旋鈕，使綠色指示燈剛好亮，此時表示電熱絲停止加熱。繼續(xù)觀察溫度計和紅綠指示燈，了解溫度變化及恒定情況，略微細(xì)調(diào)溫控器，直至溫度自動控制在所需溫度1為止。5. 加熱干燥或干熱滅菌完畢后，不能立即開烤箱取物品，須關(guān)閉電源待溫度降溫至50以下，在開門去物，否則玻璃器皿會因驟冷而爆裂。6. 烤箱內(nèi)不能烘烤易爆、易燃、易揮發(fā)的物品以免發(fā)生事故。電熱攪拌

8、儀四、電熱攪拌儀原理： 電熱攪拌儀是一種即可用于溶液加熱，又可攪拌溶液的儀器 儀器托盤下夾在云母片中的電熱絲起加熱的作用，托盤下面 還有一微型電機(jī)帶動一塊磁鐵旋轉(zhuǎn)，以帶動容器中攪拌子轉(zhuǎn) 動，達(dá)到攪拌溶液的目的。攪拌子是用一小段鐵絲密封在玻 璃管或塑料管中而制成（避免鐵絲與溶液起化學(xué)反應(yīng)），攪 拌子隨磁鐵的旋轉(zhuǎn)而轉(zhuǎn)動。使用方法：1. 將轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)至最小，接上電源，打開電源開關(guān)，指示燈亮2. 將需攪拌的容器置托盤中央，選擇合適的攪拌子放入溶液，并置容器的中央3. 調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速旋鈕至攪拌子旋轉(zhuǎn)速度適度4. 需加熱時，打開加熱開關(guān)，并調(diào)節(jié)調(diào)溫旋鈕至合適的溫度注意事項(xiàng)： 使用時，保持容器外壁干燥，轉(zhuǎn)速不

9、能太快，以免溶液外濺，腐蝕托盤，用完切斷電源第五節(jié)：生物化學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本的采集與處理一、血液標(biāo)本生化檢驗(yàn)血液標(biāo)本分靜脈血、動脈血和毛細(xì)血管血靜脈穿刺采血是臨床最常用的采血方法靜脈血標(biāo)本最好在上午79時空腹采血較為適宜，門診病人提倡靜坐15min后再采血。（一）采集標(biāo)本前準(zhǔn)備要核對病人姓名，床號，檢品聯(lián)號，若用條形碼，需將條碼正聯(lián)縱向貼在標(biāo)本管上。（二）采血部位前臂肘正中靜脈取血必要時可采手背靜脈血幼兒可采頸外靜脈采血方法采血部位：肘靜脈；手背部手腕部等體表靜脈；幼兒可采用頸外靜脈采血采血器材：一次性注射器，真空定量采血裝置注意事項(xiàng)： （ 1 ）防止溶血：造成溶血的因素有注射器和容器不干燥、不清潔；

10、淤血時間過長； 穿刺不順利，組織損傷過多；抽血速度太快；血液注入容器時未取下針頭或注入 速度過快產(chǎn)生大量泡沫；震蕩過于劇烈等。若用普通注射器采血后，未取針頭直 接將血注入真空管內(nèi)也易造成溶血體內(nèi)溶血屬合格標(biāo)本，但應(yīng)在報告單上注明。 如ACP、LDH、AST、K+等物質(zhì)在紅細(xì)胞內(nèi)的濃度較血清高22160倍，故輕微溶血 都會導(dǎo)致結(jié)果偏高，此外溶血釋放出的血紅蛋白可干擾膽固醇酶法測定，抑制膽 紅素的重氮反應(yīng)等。（ 2 ）避免充血和血液濃縮：采血時應(yīng)動作迅速，盡可能縮短止血帶使用時間。用止 血帶壓迫時間最好不超過半分鐘，否則將使生化結(jié)果升高或下降。 （ 3 ）若病人正在進(jìn)行靜脈輸液，不宜在輸液同側(cè)手臂

11、采血；若女性病人做了乳腺切 除術(shù)，應(yīng)在手術(shù)對側(cè)手臂采血。 （ 4 ）采血的體位：體位改變可引起一系列的生理變化，使血液中的許多指標(biāo)發(fā)生改 變。一般采取直立位采血，其二標(biāo)本的測定值比臥位高5 15 。因此， 采血時要注意保持正確的體位（坐位或臥位），以及體位的一致性。 （ 5 ）采血時只能向外抽，決不能向靜脈內(nèi)推，以免注入空氣，形成氣栓而造成嚴(yán)重 后果。 （ 6 ）很多生化成分受膳食影響，因此，采血前要確認(rèn)病人是否空腹。 （ 7 ）采血過程中暈厥：拔出針頭，囑其平臥，必要時可給患者嗅芳香氨酊，針刺（ 或拇指壓掐）人中、合谷，靜點(diǎn)葡萄糖或口服糖水標(biāo)準(zhǔn)真空采血管采用國際通用頭蓋和標(biāo)簽顏色普通血清管快

12、速血清管惰性分離膠促凝管標(biāo)準(zhǔn)真空采血管采用國際通用頭蓋和標(biāo)簽顏色肝素抗凝管草酸鉀/氯化鈉管血漿分離管標(biāo)準(zhǔn)真空采血管采用國際通用頭蓋和標(biāo)簽顏色EDTA抗凝管枸櫞酸鈉凝血管枸櫞酸鈉血沉管抗凝劑1. 草酸鉀 草酸鉀與血液中鈣離子結(jié)合成草酸鈣而阻止凝血。因草酸鉀的加入，改變了血液PH，故草酸鉀抗凝的血漿不能用于酸堿平衡實(shí)驗(yàn)的測定，不能用于鉀，鈣測定；因草酸鉀對乳酸脫氫酶，酸性磷酸酶，堿性磷酸酶，淀粉酶有抑制作用，故不能用于此類酶活性的測定。2. 氟化鈉-草酸鉀 因氟離子抑制糖酵解途徑中的烯醇化酶，阻止糖酵解，故特適合血糖測定。但氟離子亦抑制轉(zhuǎn)氨酶，淀粉酶堿性磷酸酶等酶的活性，故不適于酶活性的測定。3.

13、 肝素 因肝素能拮抗凝血活酶和凝血酶的合成，阻止血小板凝聚而阻止凝血。肝素抗凝的血漿，適合血?dú)夂徒^大多數(shù)生化檢測項(xiàng)目的測定，僅對酸性磷酸酶活性測定有干擾。二尿液標(biāo)本尿液標(biāo)本分隨機(jī)性一次新鮮尿，定時尿及24h尿。定時分析多用24h尿。（一）24h尿標(biāo)本收集 第一天囑病人將尿排盡棄去，并記錄排尿時間，以后每次排出 的尿均收集于潔凈干燥帶蓋得容器中，直至收集至第二天同一 時間最后一次排尿?yàn)橹??；靹?，量其總量。此記?4小時尿。（二） 尿液標(biāo)本的保存 尿液易生長細(xì)菌，而細(xì)菌的生長會致尿液中化學(xué)成分發(fā)生改變 故24小時尿的收集均應(yīng)在收集第一次尿時即加入防腐劑。收集 的尿液應(yīng)及時送檢，若不能，應(yīng)將收集的尿

14、液充分混勻，準(zhǔn)確 量其總量，記錄體積，留取一部分分置冰箱46保存。腦脊液標(biāo)本采集部位有腰椎，小腦延髓池等臨床多以腰椎穿刺法采集腦脊液第一管作細(xì)菌學(xué)檢查第二管作生化，血清學(xué)檢查第三管作細(xì)胞計數(shù)久置會至細(xì)胞破壞影響細(xì)胞計數(shù)；因葡萄糖分解使其結(jié)果降低；病原菌破壞或溶解。細(xì)胞計數(shù)管應(yīng)避免標(biāo)本凝固，遇高蛋白標(biāo)本時，可用EDTA鹽抗凝。標(biāo)本采集中影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素常見的影響因素有標(biāo)本采集的時間、體位、年齡、性別、運(yùn)動、情緒、食物和藥物等。（一）運(yùn)動的影響 運(yùn)動對體液化學(xué)成分影響程度受到運(yùn)動時間、強(qiáng)度及平時有無體育訓(xùn)練習(xí)慣有關(guān)。運(yùn) 動會致機(jī)體新陳代謝快。細(xì)胞內(nèi)ATP減少。細(xì)胞膜透性增加。致機(jī)體許多胞內(nèi)酶如丙

15、 氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶等在血清中的活性增高、乳酸明 顯增高、尿酸和血PH上升。（二）飲食的影響 飲食對體液化學(xué)成分的影響與飲食量和食品性質(zhì)有關(guān)。 一般飲食或可使血糖、鉀、鐵、三酯酰甘油濃度升高高蛋白飲食可是血清中尿素、尿 酸、及 氨略升高，但對肌酐的影響不大。飲茶、咖啡可使體內(nèi)兒茶酚胺釋放增多。葡 萄糖濃度略升高，飲咖啡可是血中游離脂肪酸明顯升高飲酒可使血中乳酸、尿酸、丙 氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶升高，長期飲酒者，往往伴高三酯酰甘油血癥及 -谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶不正常 (三)藥物的影響 藥物對體液化學(xué)成分測定結(jié)果的影響主要有兩種原因： 一種是由藥物引起的生理變化導(dǎo)致血中某些化學(xué)成分濃度的改變