液相色譜儀原理及使用操作規(guī)程、原子吸收儀使用規(guī)程

1、 液相色譜儀原理及使用操作規(guī)程原理液相色譜法就是同一時(shí)刻進(jìn)入色譜柱中的各組分，由于在流動(dòng)相和固定相之間溶解、吸附、滲透或離子交換等作用的不同，隨流動(dòng)相在色譜柱中運(yùn)行時(shí)，在兩相間進(jìn)行反復(fù)多次（103106次）地分配過(guò)程，使得原來(lái)分配系數(shù)具有微小差別的各組分，產(chǎn)生了保留能力明顯差異的效果，進(jìn)而各組分在色譜柱中的移動(dòng)速度就不同，經(jīng)過(guò)一定長(zhǎng)度的色譜柱后，彼此分離開來(lái)，最后按順序流出色譜柱而進(jìn)入信號(hào)檢測(cè)器，在記錄儀上或色譜數(shù)據(jù)機(jī)上顯示出各組分的色譜行為和譜峰數(shù)值。測(cè)定各組分在色譜圖上的保留時(shí)間（或保留距離），可直接進(jìn)行組分的定性；測(cè)量各峰的峰面積，即可作為定量測(cè)定的參數(shù)，采用工作曲線法（即外標(biāo)法）測(cè)定相

2、應(yīng)組分的含量。液相色譜儀工作原理圖高效液相色譜儀是實(shí)現(xiàn)液相色譜分離分析過(guò)程的裝置，如上圖所示。貯液器中存貯的載液（用作流動(dòng)相的液體常需除氣）經(jīng)過(guò)過(guò)濾后由高壓泵輸送到色譜柱入口（當(dāng)采用梯度洗脫時(shí)，一般需用雙泵系統(tǒng)來(lái)完成輸送）。樣品由進(jìn)樣器注入載液系統(tǒng)，而后送到色譜柱進(jìn)行分離。分離后的組分由檢測(cè)器檢測(cè)，輸出信號(hào)供給記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置。如果需收集餾分作進(jìn)一步分析，則在色譜柱出口將樣品餾分收集起來(lái)，對(duì)于非破壞型檢測(cè)器，可直接收集通過(guò)檢測(cè)器后的流出液。其中輸液泵，色譜柱及檢測(cè)器是儀器的關(guān)鍵部件。儀器使用操作步驟1、打開主機(jī)（Waters1525泵）；待泵穩(wěn)定后（大約需要25秒鐘，即有兩次“嘀”的響聲）

3、打開紫外檢測(cè)器；檢測(cè)器預(yù)熱需要610min鐘的時(shí)間，在此時(shí)間內(nèi)你可以執(zhí)行第2步操作。2、打開電腦（電腦必須進(jìn)入英文界面）待檢測(cè)器穩(wěn)定后，方可打開Breeze應(yīng)用程序，應(yīng)用程序有個(gè)自檢過(guò)程（需要12分鐘）。3、建立新方法（打開Breeze程序時(shí)，系統(tǒng)默認(rèn)為上次使用的方法和文件名。如果需要建立新的文件名和方法，你可以繼續(xù)下一步操作）：（1）點(diǎn)擊“ManageBreeze按鈕f“Makeanewprojectf“Nextf在“projectName框內(nèi)輸入新的文件名，也可以在omment內(nèi)輸入需要說(shuō)明的一些注釋,也可以不填f“Finish”；（2）建好新的文件夾后，還要轉(zhuǎn)換到該文件夾中，即在“Man

4、ageBreeze”界面下點(diǎn)擊“changeproject/user”按鈕f在project內(nèi)選擇剛建立的或是需要的文件名f“OK”；（3）此時(shí)已經(jīng)在剛建立的新文件夾下，那么，現(xiàn)在應(yīng)該再建立一個(gè)新的方法，操作步驟是：、點(diǎn)擊“ViewMethod”f選擇“LC或GPC”f點(diǎn)OK-點(diǎn)擊“pump”在“IsocraticFlowA/B”內(nèi)輸入A/B流動(dòng)相的比值（例如：A：B=70：0且流速為1ml/min，那么，就在A下輸入0.7,在B下輸入0.3；再如A：B=70：30且流速為0.8mL/min，那么，就在A下輸入0.56，在B下輸入0.24；依此類推）；、點(diǎn)擊“UVDet（紫外檢測(cè)器）”f選擇“

5、Channell”f在“wavelength/nm”框內(nèi)輸入檢測(cè)波長(zhǎng)；（4）保存新方法，點(diǎn)擊菜單欄中的“File”選擇“saveAs.”f在“Name”框內(nèi)輸入剛建立的新方法的名稱，如“LCmethodl”，然后點(diǎn)擊“save”按鈕，即可保存剛剛設(shè)立的各項(xiàng)色譜條件。4、用新建的方法平衡系統(tǒng)：?jiǎn)螕糇笙陆堑摹癊quilibrate”f在“methodforEquilibrate”內(nèi)選擇新建立的方法（如：LCmethod1）f點(diǎn)擊“Equilibrate”即開始基線平衡（基線平衡大約需要20min）。5、待基線平衡后即可進(jìn)行單次進(jìn)樣：（1）點(diǎn)擊單次進(jìn)樣按鈕f在“SampleName”內(nèi)輸入樣品名稱，

6、或備注（可不填）f注意：在“method內(nèi)一定要選定需要的方法(如“LCmethod1)f“vial內(nèi)選1,表示這是第1次進(jìn)樣(用于自動(dòng)進(jìn)樣器)f在“runtime”內(nèi)輸入所要運(yùn)行的時(shí)間f單擊“inject(進(jìn)樣)”按鈕；待進(jìn)樣圖示出現(xiàn)后,方可進(jìn)樣(若發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣時(shí)的方法選錯(cuò)了,可以點(diǎn)擊圖示右下方的“abortinject”來(lái)取消這次進(jìn)樣操作，然后重新點(diǎn)擊進(jìn)樣按鈕，確保進(jìn)樣時(shí)method選擇的是你所需要的方法)；在進(jìn)樣過(guò)程中，要注意的是：a、取樣要力保一致；b、在將進(jìn)樣環(huán)從“Load”位移到“inject”位時(shí)間要停留1.2秒以上，因?yàn)樵?ml/min的流速下，樣品完全脫離定量環(huán)所需要的時(shí)間0.0

7、2min(1.2秒)；c、要保證運(yùn)行時(shí)間的一致性，每次進(jìn)樣后將“Load”位移到“inject”位時(shí)間要停留的時(shí)間必須一致；6、每次進(jìn)樣后，都要對(duì)運(yùn)行的結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理：點(diǎn)擊“ViewData”f點(diǎn)擊“PrecessingParameteryWigard”或點(diǎn)擊采集欄右下角的“senddatatoreview；選擇“startnewprocessingporameters”如果是進(jìn)行同一個(gè)樣品且在此之前有過(guò)數(shù)據(jù)處理可以選擇第二項(xiàng)，點(diǎn)OK；在“start”內(nèi)輸入要處理峰值的開始時(shí)間，在“end內(nèi)輸入結(jié)束時(shí)間，然后單擊下一步；確?！癱learpeakwidthandthreshold”不被選中，然

8、后多次點(diǎn)擊“下一步”直到對(duì)話框結(jié)束。7、若要更換洗脫劑，必需要對(duì)泵、檢測(cè)器進(jìn)行沖洗(點(diǎn)擊沖洗灌注按鈕按照提示一步一步操作)：將需要更換的洗脫劑，先超聲20min后換上；用注射器，抽出兩泵內(nèi)原有洗脫劑大約各10mL，然后打開參考閥進(jìn)行沖洗灌注；沖洗灌注后，關(guān)緊參考閥；用新的方法平衡系統(tǒng)(大約需要20min)。8、梯度洗脫程序的設(shè)置：在第3步（3）項(xiàng)步驟中點(diǎn)擊“pump欄內(nèi)選擇“Gradent（梯度）”后，將出現(xiàn)一個(gè)表格，在“時(shí)間”欄內(nèi)輸入要開始梯度洗脫的時(shí)間和結(jié)束時(shí)間，在A、B“內(nèi)輸入開始洗脫時(shí)的“A、B”流動(dòng)相的比例和結(jié)束時(shí)的比例。在最后一欄內(nèi)輸入所需要的洗脫程序的變化曲線。9、樣品組方法的建

9、立及運(yùn)行：在建立樣品組方法前必須先建立好所需要的洗脫程序并命名：（1）點(diǎn)擊命令欄內(nèi)的“samplequeue”，將出現(xiàn)樣品組工作窗口；（2）點(diǎn)擊樣品組工作窗口左上角的“wizard”按鈕，出現(xiàn)“selectlocationofstandards頁(yè)面，在此頁(yè)面中，可選擇Nostandards或其他，“startloadingvialsintrayposition”可選擇1,然后單擊“下一步”；（3）是手動(dòng)進(jìn)樣，必須確保Eachstardardvialcontainsadifferentlevelstandard”被選中（默認(rèn)選項(xiàng)），然后單擊“下一步”；（4）在Numberofstandardvi

10、alsineachgroup中輸入1（默認(rèn)值）；在Numberofinjectionspervial內(nèi)輸入一個(gè)數(shù)（自動(dòng)進(jìn)樣器用）；在Runtime內(nèi)輸入每一個(gè)樣品所需要運(yùn)行的時(shí)間；在injectionvolume內(nèi)輸入需要進(jìn)樣的的量如10ul；在method內(nèi)選擇需要的洗脫方法，然后點(diǎn)擊“下一步”；（5）可輸入所用分析柱的型號(hào)和規(guī)格，如“KF-C187um也可不填，點(diǎn)擊“下一步”；（6）可以什么都不管，各項(xiàng)均采用默認(rèn)值，點(diǎn)擊“下一步”；（7）選擇運(yùn)行模式：如果只運(yùn)行而不需要報(bào)告可以選擇“runonly；如果既想運(yùn)行且需要打印出過(guò)程可以選擇“runandprocess”；如果既想運(yùn)行且需要打印出

11、結(jié)果可以選擇“runandreport”。（注：“runandreport”只是將圖打印出來(lái)，并不給出峰值。）（8）單擊“Next”后出現(xiàn)“summary界面，點(diǎn)擊此界面中的“options”按鈕，在出現(xiàn)的對(duì)話框中需要在“Function欄中選擇Equilibrate”，在“method”中選擇需要的方法，在“Runtime”內(nèi)輸入平衡系統(tǒng)的時(shí)間（一般為20min）；（注：此步可以不做，但在運(yùn)行樣品組前，必需先平衡系統(tǒng)。）（9）點(diǎn)擊“完成”，并保存樣品組方法；（10）運(yùn)行樣品組方法注：如果沒有做第（8）步必需先平衡基線，待基線平衡后才可以進(jìn)行此步操作:點(diǎn)擊采集欄中的runcurrentsamp

12、lesetmethod”（在單次進(jìn)樣按鈕的下方）按鈕，在“Nameforthissamplese”內(nèi)輸入樣品組方法名（默認(rèn)為剛建立的樣品組方法），在runmode內(nèi)選擇運(yùn)行模式，然后點(diǎn)擊“Run”，待出現(xiàn)進(jìn)樣圖示后，按第5步（2）、（3）項(xiàng)操作。參照WatersBreeze入門指南，P53。（附：打開您建立的樣品組方法，點(diǎn)擊樣品組工作欄上方的“Opensamplesetmethod”按鈕，選擇您需要的方法，點(diǎn)擊“Open”。）10、分析結(jié)束后，必須充分沖洗色譜柱：先用原A、B兩相洗脫液的比例，再逐步增大甲醇比例，直到甲醇占沖洗液的100%，例如：原洗脫液A:B=甲醇:水=50:50，則分別用A

13、:B=：50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、100:0，每個(gè)梯度均要沖洗至基線穩(wěn)定（一般要20min左右）方可改換下一個(gè)梯度，直到完全沖洗凈為止。再關(guān)泵、檢測(cè)器和主機(jī)。特別注意：1、任何物質(zhì)測(cè)定完后，都不得不沖洗泵而直接關(guān)機(jī)！2、溶劑多為揮發(fā)性有機(jī)溶劑，易燃，故室內(nèi)嚴(yán)禁吸煙！WatersBreeze高效液相色譜系統(tǒng)操作規(guī)程1.開機(jī)依次打開泵以及檢測(cè)器、柱溫箱的電源，等到檢測(cè)器口檢完畢后，打開計(jì)算機(jī)，登錄Windows,并進(jìn)入Breeze軟件。2.灌注泵2丄配制準(zhǔn)備流動(dòng)相，過(guò)濾并超聲后置于清潔的溶劑瓶?jī)?nèi)，將溶劑過(guò)濾頭放到222.3.單擊采集欄上的“Purgewizardn

14、選擇魚1purgepump沖洗該泵，然后單擊“Next”。若未灌泵，應(yīng)使用灌注注射器，打開排液閥并抽取l（）ml的洗脫劑，（般為超聲過(guò)濾的注射用水）關(guān)閉排液閥，再單擊“Nex（”24打開參比閥（右邊）25如果沖洗時(shí)的流速低于默認(rèn)的流速5ml/min,在標(biāo)尺下方的文本框屮輸入新的流速，單擊Next,此時(shí)開始沖泵。“Purgetime計(jì)數(shù)器監(jiān)視沖洗時(shí)間,26（默認(rèn)時(shí)間為5分鐘）在完成之前，單擊“Stoppurge”按鈕停止清除操作。沖洗完畢，關(guān)閉對(duì)話框。3.平衡3.J.單擊采集欄上的IaEquilibrateJ,a3.2.在下拉列表屮選擇所;需方法，單擊“EquilibnHe”。3.3.系統(tǒng)留出約

15、20min時(shí)間進(jìn)行平衡，或直到基線穩(wěn)定。（單擊Run”退出基線監(jiān)視器）“abort34手動(dòng)進(jìn)樣3.5.單擊采集欄上的“makesingleinjection*36對(duì)話框(SpecifySingleInjectFJarameters)將出現(xiàn),SpecifySingleInjectParaweters在此框中輸入樣品名稱(SampleName),方法(method)進(jìn)樣體積(InjectionVolume)運(yùn)行時(shí)間(runtime)o單擊“Inject”，彈出進(jìn)樣對(duì)話框。把進(jìn)樣器于柄扳到載樣位置(load)39用供試溶液清洗配套的注射器，再抽取適量供試品溶液八如川定量環(huán)(Wop)滿載樣，則注射器抽

16、取量應(yīng)不少于定量環(huán)容積的5倍，用微量注射器定屋進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量不得多/環(huán)容積的50%,在排除氣泡后方能向進(jìn)樣器小注入供試溶液。30把注射器的平頭針直插至進(jìn)樣器的底部，注入供試溶液，除另有規(guī)眾外，注射器不應(yīng)立即取下。H.將手柄扳轉(zhuǎn)至進(jìn)注樣位置(Inject),定量環(huán)內(nèi)供試溶液即被流動(dòng)相帶入流路口結(jié)束采樣及數(shù)據(jù)處理。采樣完畢后，單擊囤AbortRun退出基線監(jiān)視器。42單擊命令欄上的FindData,選擇Results選項(xiàng)卡。4.3.單擊uReviewData,選擇柑應(yīng)的色譜。44單擊壓J(處理方法向?qū)?ProcessingMethodWizard)，出現(xiàn)下圖：ProcessingParameter

17、sWizard遼I區(qū)YoucanusetheProcessingParameterswizardtoeditthecurrentprocessingparametersortostartnewprocessingparameters.StartingnewprocessingpatametetsusingthewizardalwaysstartsanewcalibfationlotthenewprocessingpafametersIfyouareeditingthecunentprocessingparameterswiththeProcessingParameterswizard,youc

18、anchoosetoeitherkeeplheexitingcalibrationordearthecdibfation朗dstartanewcalbalionforthemodiedpoce$singparametefs.StartNewProcessingPafametersEditExistingProcessingPacametefsandKeeptheCaftwationEditExistingProcessingParametersandCleartheCabbrationOK|Cancel|Help|選擇“StartNewProcessingParameters然后單擊OK。彈出

19、44Integration-IntegrationRegion-Uvchlv對(duì)話窗,輸入積分開始時(shí)間(Sstart)及積分結(jié)束時(shí)間(End),選擇Next”。彈岀Tmcgnition-PcakWidthandThrcshold-Uvchl”，確保沒冇選屮44clearPeakWidthandThreshold,然后單擊“Next,采用默認(rèn)的參數(shù)。彈出aIntegration-PeakRejection對(duì)話窗，使用鼠標(biāo)左鍵，放大最小的所關(guān)注峰值，然后單擊選川該峰值(峰值變?yōu)榧t色)。彈出uCalibration-General-UVchlv對(duì)話窗，單擊Next,即可。單擊wCalibration-

20、NamesandRetentionTimes-Uvchf刪除不需要的峰。彈岀Calibration-DefaultAmounts-Uvchf,單擊“Next”。彈出Calibndion-IrHc門kiIStandards-Uvchl”対話窗，選擇44ExternalStandardCalibration”,單擊Next彈出“MethodName-Uvch1”對(duì)話窗，填入方沙、名稱43.單擊44ProcessingParametersn,選擇Suitability在CalculateSuitabilityResultsw前打“J”,在“VoidVolumeTime(min)處，輸入“1.0”單擊

21、Integrate,再單擊ReviewMainWindow,即查看USP理論板數(shù)(USPPlateCount)n及分離度(Resolution)拖尾因子(SymmetryFactor)單擊“SaveAll”，保留數(shù)據(jù)。4J6.在!FindData“FindDatr屮，選擇Results,選定所打印文件名，單擊右鍵，選“Pwview,點(diǎn)擊Uj;ethefollowingRcpoilMethod選擇所需方法，單擊“OK”，點(diǎn)擊Print即可。5試驗(yàn)操作后的儀器維護(hù)若流動(dòng)相含鹽類物質(zhì),先用超聲過(guò)濾的注射用水沖洗30min后，用甲醇梯度洗脫后，純甲醇保存柱子。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，換上水或甲醇活洗色譜柱的過(guò)程

22、中，用洗瓶或者次性針筒吸取蒸錨水，緩緩注入色譜泵淸洗孔，以清洗泵桿與密封圈上可能附右的鹽類物質(zhì)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，換上水或甲醇清洗色譜柱的過(guò)程屮，用注射器吸取清洗溶液對(duì)進(jìn)樣器進(jìn)行清洗,洗去進(jìn)樣閥中可能殘留的雜質(zhì),Z后再插上保護(hù)針和外蓋。6注意事項(xiàng)在開機(jī)后沖洗色譜泵時(shí)，若所使用的流動(dòng)相為緩沖溶液，則應(yīng)先用10%甲醇-水溶液沖洗30分鐘，再用流動(dòng)相平衡，若所使用的流動(dòng)柑為純有機(jī)溶液,則立接用流動(dòng)相沖洗平衡。在儀器工作時(shí)，應(yīng)隨時(shí)觀察爪力的變化，若壓力過(guò)高，則應(yīng)立即停止工作*檢査儀器是否正常，管道繪否堵寒.在沖洗色譜柱時(shí)流速不能過(guò)高，否則容易損壞色譜柱前的過(guò)濾裝置.在更換流動(dòng)和吋應(yīng)將濾頭緩慢放入,以防止產(chǎn)

23、久氣泡,若在沖洗時(shí)，發(fā)現(xiàn)柱床力不升高或不能吸入流動(dòng)和，則應(yīng)檢査儀器杲否漏液或進(jìn)氣泡；進(jìn)液管道迢否堵塞。若所使用的流動(dòng)相若為進(jìn)I丨的色譜純?cè)噭?，?duì)以百接使用，若所使用的流動(dòng)柑為非進(jìn)II色譜純?cè)噭?，則應(yīng)過(guò)濾并去除氣泡后方可使用。6.5.用微量進(jìn)樣器進(jìn)樣時(shí)，.應(yīng)先用供試溶液潤(rùn)洗進(jìn)樣器三次，再吸取適雖溶液進(jìn)樣，吸取時(shí)應(yīng)盡量避免氣泡產(chǎn)生，應(yīng)先將氣泡排除后方可進(jìn)樣。WFX110A型火焰原子吸收分光光度計(jì)操作步驟確保氣路、電路連接正確，主機(jī)與電腦信號(hào)連接好。打開電腦，打開主機(jī)開關(guān)，運(yùn)行其專用程序（WFXSTOP圖標(biāo)）。待主機(jī)各機(jī)構(gòu)自檢完成后，自動(dòng)進(jìn)入條件設(shè)置頁(yè)面；設(shè)置各項(xiàng)儀器條件：文件f創(chuàng)建f主頁(yè)面，選擇測(cè)定兀素f波長(zhǎng)、光譜帶寬（狹縫）、燈號(hào)位置f選擇火焰法f選擇儀器參數(shù)，編輯項(xiàng)目信息等內(nèi)容f輸入標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度參數(shù)（如：Sl:0.0,S2: