實驗一紙層析法分離鑒定氨基酸

1、關(guān)于實驗一紙層析法分離鑒定氨基酸181第一張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月182 【二、實驗原理】 層析技術(shù) 是利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)的差別，使各組分以不同程度分布在兩相中，其中一相為固定相，另一相流過此相稱作流動相，并使各組分以不同速度移動，從而達(dá)到分離的目的。 可分離物質(zhì) 糖類、有機(jī)酸、氨基酸、核苷等第二張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月183固定相 在層析中起分離作用而不隨層析過程移動的物質(zhì)。如紙層析中固定相是濾紙纖維中結(jié)合的水。固定相被看成是樣品移動的阻力。流動相 在層析過程因其本身流動而推動樣品移動的物質(zhì)。第三張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月184名稱

2、操作方式固定相流動相分離依據(jù) 分配層析 紙層析 薄層層析液體液體 溶解度 離子交換層析 離子交換柱層析固體液體 帶電性 靜電引力 吸附層析 吸附薄層層析 氣體吸附層析固體液體氣體 吸附力 親和層析 酶與底物 抗原與抗體固體液體 配體專一性 凝膠層析 凝膠過濾固體液體 分子大小層析的分類第四張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月185 分配層析：是利用不同物質(zhì)在兩種不相溶的溶劑中的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離的一種技術(shù)。分配系數(shù) =溶質(zhì)在固定相的溶解度溶質(zhì)在流動相的溶解度第五張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月186 紙層析是以濾紙作為惰性支持物的分配層析：紙纖維上的 OH 基具有親水性，所以能

3、吸附一層水作為固定相，而通常把有機(jī)溶劑作為流動相。流動相流經(jīng)支持物時與固定相間連續(xù)抽提，使物質(zhì)在兩相間不斷地分配而得到分離。第六張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月187 溶質(zhì)在濾紙上的移動速率用f（比移）值來表示： 展層層斑點中心與原點間的距離 Rf = - 溶劑前沿與原點之間的距離第七張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月188第八張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月189 影響Rf值的因素（多種） 物質(zhì)結(jié)構(gòu)與極性 物質(zhì)的極性大小決定了物質(zhì)在水 和有機(jī)溶劑之間的分配情況。pH值 展層劑的pH影響被分離物質(zhì)的極性基團(tuán)的解離形式。 層析濾紙的質(zhì)量 層析用濾紙要質(zhì)地均勻，緊密， 有一定

4、的機(jī)械強(qiáng)度，并含雜質(zhì)少。國產(chǎn)新華濾紙可 用于一般的紙層析。第九張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1810 【三、器材與試劑】 器材： 1、層析缸 2、毛細(xì)管 3、噴霧器 4、培養(yǎng)皿 5、層析濾紙(新華一號) 試劑： 1、擴(kuò)展劑 （正丁醇：水：冰醋酸= 4：3：1） 2、顯色劑 0.1茚三酮正丁醇溶液。 3、氨基酸溶液 0.5的賴氨酸、脯氨酸、纈氨酸、亮氨酸溶液 及它們的混合液 第十張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1811 1、層析濾紙準(zhǔn)備：取層析濾紙(長20 cm、寬15 cm)一張。在紙的一端距邊緣23 cm處用鉛筆劃一條直線，在此直線上每間隔2cm作一記號。 2、點樣：用毛細(xì)

5、管將各氨基酸樣品分別點在這5個位置上，干后再點一次。每點在紙上擴(kuò)散的直徑，最大不超過3 mm?！舅?、實驗步驟】第十一張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1812 3、擴(kuò)展 ：用線將濾紙縫成筒狀，紙的兩邊不能接觸。將濾紙直立于培養(yǎng)皿中（點樣的一端在下，擴(kuò)展劑的液面需低于點樣線1 cm）。待溶劑上升約15 cm時即取出濾紙，鉛筆描出溶劑前沿界線，自然干燥或用吹風(fēng)機(jī)熱風(fēng)吹干。 4、顯色： 用噴霧器均勻噴上0。1茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分鐘(100)或用熱風(fēng)吹干即可顯出各層析斑點。 5、計算Rf值第十二張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1813【五、實驗結(jié)果與分析】【六、注意事項

6、】【七、思考題】1、實驗中作為固定相和流動相的物質(zhì)分別是什么？2、Rf值的含義、影響因素？ 下次實驗 ：實驗二 蛋白質(zhì)和氨基酸的顏色反應(yīng)值 日 生 值 日第十三張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1814小實驗當(dāng)濾紙接觸到溶劑時，溶液將上升。濾紙上的小圓點是4種不同的氨基酸的混合物。看看接下來會發(fā)生什么事情第十四張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1815可以看出1號氨基酸上升的最高，在濾紙上跑得最快。而4號氨基酸與濾紙的結(jié)合最緊，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。1234第十五張，PPT共十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1816這就是紙色譜法。對照上圖，可知道1-4號的各代表什么氨基酸。紙色譜法是分離鑒定蛋白質(zhì)的氨基酸組成的重要工具。 1234甘氨酸半胱氨