人類白細(xì)胞抗原等位基因與HBV宮內(nèi)感染關(guān)系

1、人類白細(xì)胞抗原等位基因與HBV宮內(nèi)感染關(guān)系【關(guān)鍵詞】乙型肝炎病毒；宮內(nèi)感染；人類白細(xì)胞抗原DR等位基因(HLA-DR)摘要：目的研究人類白細(xì)胞抗原(HLA)-DR3、DR7、DR13、DR53等位基因與乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)宮內(nèi)感染的關(guān)系，討論HBV宮內(nèi)感染的遺傳易感性，確定HBV宮內(nèi)感染的易感基因和保護(hù)基因。方法采用聚合酶鏈反響/序列特異性引物(PR-SSP)技術(shù)檢測(cè)HBsAg陽性孕婦及其新生兒各187例外周靜脈血血塊中HLA-DR3、DR7、DRl3、DR53等位基因型分布及頻率。結(jié)果(1)宮內(nèi)感染組孕婦HLA-DR3基因頻率為2414(729)，顯著高于非

2、宮內(nèi)感染組孕婦的633(10158)(P=0007)。其余各表型比擬，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)。(2)宮內(nèi)感染組新生兒HLA-DR3基因頻率為1724(529)，顯著高于非宮內(nèi)感染組新生兒的506(8158)(P=0033)。其余各表型比擬，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)。(3)母嬰HLA-DR3同陽性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組間比擬差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0049)；母嬰HLA-DR7、DR13、DR53同陽性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組間比擬，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)。結(jié)論HBsAg陽性孕婦及其胎兒同時(shí)或任一攜帶HLA-DR3，易導(dǎo)致HBV宮內(nèi)感染；HLA-DR3是HBV宮內(nèi)感染的易感基

3、因。關(guān)鍵詞：乙型肝炎病毒；宮內(nèi)感染；人類白細(xì)胞抗原DR等位基因(HLA-DR)AssiatinbeteenHLA-DRallelesandHBVintrauterineinfetinAbstrat：bjetiveTstudytheassiatinbeteenHLA-DR3,DR7,DR13,DR53andHBVintrauterineinfetintprbeintthesuseptibilitytintrauterineinfetinfhepatitisBvirusandtfinditspredispsinggenesandprtetinggenes.ethdsHLA-DR3,DR7,DR13

4、,DR53eredetetedbythetehniquefplyerasehainreatin-sequenespeifipriers(PR-SSP)inaternalandnenatalbldlt.Results(1)ThefrequenyfHLA-DRas24.14%inenithintrauterineinfetin,hihashigherthanthat(6.33%)inenithutintrauterineinfetin(P=0.007).ThereasnassiatinbeteenHLA-DR7,DR13,DR53psitiveinpregnantenandHBVintrauter

5、ineinfetin(P0.05).(2)ThefrequeneyfHLA-Rfnebrnsas17.24%inenithintrauterineinfetin,hihishigherthat(5.06%)inenithtllinfetin(P=0.033).ThereasnassiatinbeteenHLA-DR7,DR13,DR53psitiveinnebrnsandHBVintrauterineinfetin(P0.05).(3)ThereassignifiantassiatinbeteenHLA-DR3nrdaneandHBVintrauterineinfetin(P=0.049).T

6、hereasnassiatinbeteenDR7,DR13,DR53nrdaneandHBVintrauterineinfetin(P0.05).nlusinHLA-DR3arriersfpregnantenandthEirnebrnshavesuseptibilitytHBVintrauterineinfetin.HLA-DR3isthepredispsinggenefHBVintrauterineinfetin.Keyrds：HBV；intrauterineinfetin；HLA-DRantigen肝炎是一種嚴(yán)重危害人類安康的世界性傳染病，我國是乙肝高發(fā)區(qū)，乙肝病毒的母嬰傳播不僅造成人群中

7、眾多的HBsAg攜帶者，而且是引起成人慢性肝炎、肝硬化以及肝癌的重要因素。迄今，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，人類白細(xì)胞抗原DR等位基因(HLA-DR)與乙型肝炎病毒(HBV)感染親密相關(guān)，而HLA-DR等位基因與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系爭(zhēng)議較多。本文通過研究HLA-DR3、DR7、DR13、DR53與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系，討論HBV宮內(nèi)感染的遺傳易感性，為防制HBV宮內(nèi)感染提供理論根據(jù)。1對(duì)象與方法11對(duì)象以2022年6月2022年11月太原市省各市級(jí)醫(yī)院篩檢，并在太原市傳染病院婦產(chǎn)科進(jìn)展產(chǎn)前檢查及分娩的HBsAg陽性孕婦及其新生兒各187例作為研究對(duì)象。并根據(jù)新生兒有無宮內(nèi)感染，分為宮內(nèi)感染組(29例)和宮內(nèi)

8、未感染組(158例)，2組在年齡分布、文化程度、職業(yè)構(gòu)成等平衡可比。12方法121標(biāo)本采集及處理搜集孕婦肘靜脈血及新生兒出生24h內(nèi)且未注射高效價(jià)免疫球蛋白(HBIG，hepatitisBiuneglbulin)的股靜脈血各2l，4冰箱保存，6h內(nèi)以4000r/in4離心15in，別離血清與血塊，-20保存?zhèn)錂z。122乙肝血清標(biāo)志物檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，試劑盒上海科華實(shí)業(yè)總公司。123HBVDNA檢測(cè)(1)HBVDNA提取：參考文獻(xiàn)1，采用異硫氰酸胍一步法提取血清DNA；(2)HBVDNA的擴(kuò)增：采用巢式聚合酶鏈反響(nPR)。124HLA-DR等位基因檢測(cè)(1)人類基因組DN

9、A的提取十二烷基磺酸鈉SDS蛋自酶K法提取血塊基因組DNA。(2)HLA-DR等位基因擴(kuò)增：參考文獻(xiàn)2的引物設(shè)計(jì)采用聚合酶鏈反響序列特異性引物(PR-SSP)技術(shù)檢測(cè)孕婦及其新生兒外周靜脈血血塊中HLA-DR3、DR7、DR13、R53基因型分布及頻率。(3)PR產(chǎn)物的檢測(cè)：取擴(kuò)增產(chǎn)物510l，按5：1(V：V)與溴酚蘭混勻，加樣于15瓊脂糖凝膠(含05gl溴化乙錠)板，在60V電壓下泳動(dòng)50in，紫外燈下觀察結(jié)果。125新生兒HBV宮內(nèi)感染診斷標(biāo)準(zhǔn)新生兒外周血血清HBsAg和/或HBVDNA陽性，即診斷為HBV宮內(nèi)感染。13統(tǒng)計(jì)分析資料輸入SPSS115軟件進(jìn)展統(tǒng)計(jì)分析；計(jì)算各指標(biāo)的陽性率，

10、四格表2、Fisher確切概率、R值及R95%I。2結(jié)果21HBsAg陽性孕婦及其新生兒HLA-DR擴(kuò)增圖譜提取的血塊DNA經(jīng)PR擴(kuò)增后呈現(xiàn)明顯條帶，與標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)記物arker條帶比擬，確定HLA-DR基因型圖1，2，3，4。DR3+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR3陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長(zhǎng)度為151bp;DR3-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR3陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；：標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)記物(arker)圖1HLA-DR3等位基因的PR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果略DR7+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR7陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長(zhǎng)度為232bp；DRT-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR7陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；：

11、標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)記物(arker)圖2HLA-DR7等位基因的PR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果略DR13+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR13陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長(zhǎng)度為130bp；DR13-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR13陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；：標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)記物(arker)圖3HLA-DR13等位基因的PR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果略DR53+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR53陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長(zhǎng)度為213bp；DR53-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR53陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；：內(nèi)對(duì)照注：DR53引物與內(nèi)對(duì)照引物可能發(fā)生了引物間的錯(cuò)配等，故分管同時(shí)擴(kuò)增圖4HLA-DR53等位基因的PR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果略22

12、HLA-DR與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系221孕婦HLA-DR等位基因分布及頻率比擬表1宮內(nèi)感染組孕婦HLA-DR3基因頻率明顯高于宮內(nèi)未感染組，經(jīng)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義R=4709,P=0007；HLA-DR7、DR13、DR53基因頻率在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組孕婦比擬，經(jīng)檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。表1宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組孕婦HLA-DR基因分布及頻率比擬略注：*為fisher確切概率法計(jì)算結(jié)果222新生兒HLA-DR等位基因分布及頻率比擬(表2)宮內(nèi)感染組新生兒HLA-DR3基因頻率明顯高于宮內(nèi)未感染組，經(jīng)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(R=3906，P=0033)；HLA-DR7、DR13

13、、DR53基因頻率在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組新生兒比擬，經(jīng)檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)。223母嬰HLA-DR等位基因同陽性分布及頻率比擬表3母嬰HLA-DR3同陽性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組間比擬，經(jīng)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義R=596,P=0049，母嬰HLA-DR7、DR13、DR53同陽性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組間比擬，經(jīng)歷驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。表2宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組新生兒HLA-DR基因分布及頻率比擬略注：*為fisher確切概率法計(jì)算結(jié)果表3宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組母嬰HLA-DR同陽性分布及頻率比擬略注：*為fisher確切概率法計(jì)算結(jié)果3討論Kilpatrik

14、D3的研究發(fā)現(xiàn)，HLA-A3是人類免疫缺陷病毒(HIV)宮內(nèi)感染的保護(hù)基因，HLA-DR3是HIV宮內(nèi)感染的易感基因。BsiL等4采用Lgisti回歸分析發(fā)現(xiàn)，HLA-DR13與發(fā)生HV宮內(nèi)感染呈負(fù)相關(guān)，即HLA-DR13是HV宮內(nèi)感染的保護(hù)因素。在母親同時(shí)感染HIV者中，HLA-DR13和HIV同時(shí)感染在HV宮內(nèi)感染的發(fā)生中具有獨(dú)立而相反的作用，即HLA-DR13是HV宮內(nèi)感染的保護(hù)因素；HLA-DR13表達(dá)在未發(fā)生HV，宮內(nèi)感染和發(fā)生了HV宮內(nèi)感染者的R值為84(95I=11608)，且母乳喂養(yǎng)不影響該HV宮內(nèi)感染的危險(xiǎn)度。王素萍等5以HBsAg陽性孕婦新生兒為研究對(duì)象，隨機(jī)選擇發(fā)生及未發(fā)

15、生HBV宮內(nèi)感染的新生兒各20例，應(yīng)用試劑盒提供的序列特異性引物(sequenespeifipriers,SSP)采用PR-SSP技術(shù)擴(kuò)增HLA-DR基因區(qū)18對(duì)等位基因，斷定HLA-DR抗原的型別，計(jì)算HLA-DR抗原各型別出現(xiàn)頻率并分析其在2組間的差異，發(fā)現(xiàn)DR3、DR51在宮內(nèi)感染組的頻率較高，分別為45，40。在非宮內(nèi)感染組分別為20，15，P值分別為018，016。DR53在非宮內(nèi)感染組的頻率較高，為60，在宮內(nèi)感染組為35。推測(cè)HLA-DR3、DR51可能是HBV宮內(nèi)感染的易感型，而DR53有可能是具有保護(hù)作用型別。劉海英等6采用PR-SSP法合成相應(yīng)的特異性引物序列，對(duì)HLA-D

16、R3、DR4、DR13、DR15進(jìn)展研究。結(jié)果顯示，宮內(nèi)感染組孕婦HLA-DR3的基因頻率為50，顯著高于宮內(nèi)未感染組的147(RR=58，2=490,P005)，其余各基因表型比擬，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；宮內(nèi)感染組新生兒HLA-DR3的基因頻率為30，明顯高于宮內(nèi)未感染組的74，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)，提示孕婦或胎兒攜帶HLA-DR3，易導(dǎo)致HBV宮內(nèi)感染，即孕婦或胎兒HLA-DR3陽性是HBV宮內(nèi)感染的易感基因。本文同樣采用PR-SSP技術(shù)研究HLA-DR特異性等位基因與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系。結(jié)果說明，HBsAg陽性孕婦及其胎兒同時(shí)或任一攜帶HLA-DR3，易導(dǎo)致HBV宮內(nèi)感染；HLA

17、-DR3是HBV宮內(nèi)感染的易感基因。提示在防制HBV宮內(nèi)感染時(shí)不能無視人類遺傳因素的作用，應(yīng)采取綜合措施防制HBV宮內(nèi)感染。參考文獻(xiàn)1向海平，郭雁賓，孟慶華，等.聚合酶鏈反響定量檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA及其臨床意義分析J.中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，1999，131：89-90.2lerup,ZetterquistH.HLA-DRtypingbyPRaplifiatinithsequenespeifipriers(PR-SSP)in2hurs:analternativatserlgialDRtypinginlinialpratieinludingdnr-reipientathinginadaveritransplantatinJ.TissueAntigens,1992,39:225-229.3KilpatrikD,HagueRA,YapPL,etal.HLAantigenfrequeniesinh