項目二 疫苗的生產(chǎn)技術課件

1、項目二 疫苗生產(chǎn)技術 在發(fā)展中國家，死亡總?cè)藬?shù)的30%50%死于傳染病。 在發(fā)達國家，傳染病死亡人數(shù)僅占死亡總?cè)藬?shù)的4%8%，主要得益于疫苗的廣泛應用。一、概述1、疫苗的概念 人工免疫：有計劃、有目的地給人體接種抗原，或輸入抗體或免疫細胞，使機體獲得某種特異性抵抗力，從而達到預防或治療某種疾病的目的。被動免疫 被動免疫是將抗體從人或者動物輸入到其他人或動物獲得。被動免疫可在短時間內(nèi)為免疫對象提供足夠數(shù)量的抗體以得到針對一些感染的保護，但是這種保護持續(xù)時間很短，常在數(shù)周或者數(shù)月內(nèi)逐漸消失。因此被動免疫通常需要多次重復接種。一、概述 疫苗：刺激機體免疫系統(tǒng)對某種病原微生物處于高度戒備狀態(tài)-“時刻準

2、備著！”一、概述2、理想疫苗的標準 安全：無致病性和接種后異常反應 有效：可誘導產(chǎn)生可靠的保護性免疫 實用：易于接種、保存和運輸，價廉3、疫苗的發(fā)展歷史 古典疫苗時期：牛痘苗、狂犬病疫苗 培養(yǎng)疫苗時期：脊髓灰質(zhì)炎疫苗、卡介苗 基因工程疫苗時期：乙型肝炎基因工程疫苗 一、概述 結核病、麻疹、乙型腦炎、甲型肝炎、風疹疫苗、腮腺炎等疫苗。 減毒活疫苗 基因缺失活疫苗（gene deleted live vaccine）：采用分子生物學技術，去除與毒力或毒力相關基因片段，使病原微生物毒力減低或喪失。用缺失突變毒株制成的疫苗。減毒活疫苗 與自然突變株（多為點突變毒株）相比，基因缺失活疫苗具有突變性狀明確

3、、穩(wěn)定、不易發(fā)生毒力返祖的優(yōu)點。 百日咳、乙型腦炎、流行性腦脊髓膜炎、狂犬病、傷寒、鉤體病、甲型肝炎、鼠疫、流感等疫苗。 滅活疫苗 缺點：免疫力維持時間短，需要多次重復接種；主要誘發(fā)體液免疫，不能產(chǎn)生細胞免疫或黏膜免疫應答；接種劑量較大，不良反應；需要嚴格滅活。 滅活疫苗 優(yōu)點：易于制備；免疫原性穩(wěn)定性高；儲存及運輸方便；易于制備多價疫苗；疫苗安全性高。 SARS疫苗研究 1、國內(nèi)全病毒滅活疫苗所用的SARS毒株均為原始毒力很強的毒株，其研發(fā)、檢定和將來的生產(chǎn)都必須需在P3級條件下進行，不能適應規(guī)?；a(chǎn)。滅活疫苗 2、尚無有效的動物模型，SARS流行爆發(fā)具有不確定性，各種疫苗的安全性和有效性

4、的臨床前驗證較困難。H7N9 H7N9是禽流感的一種亞型。流感病毒顆粒外膜由兩型表面糖蛋白覆蓋，一型為血細胞凝集素（即H），一型為神經(jīng)氨酸酶（即N），H又分15個亞型，N分9個亞型。 所有人類的流感病毒都可以引起禽類流感，但不是所有的禽流感病毒都可以引起人類流感，禽流感病毒中，H3、H5、H7、H9可以傳染給人，其中H5為高致病性。H3為人犬共患，依據(jù)流感病毒特征可分為HxNx共135種亞型，H7N9亞型禽流感病毒是其中的一種，既往僅在禽間發(fā)現(xiàn)，未發(fā)現(xiàn)過人的感染情況。這個病毒的生物學特點、致病力、傳播力，還沒有依據(jù)進行分析判斷 。發(fā)病癥狀：發(fā)熱、咳嗽等急性呼吸道感染癥狀，尤其是會出現(xiàn)高熱、呼吸

5、困難。2022/8/2617二、免疫接種 免疫接種是預防和控制傳染病的綜合措施之一，是指利用免疫制劑和疫苗通過適宜的途徑對機體進行接種，使機體獲得對某種疾病的特異免疫力，以提高個體或群體的免疫水平，從而達到保護機體，預防和控制針對疾病的目的。項目實施一 卡介苗的生產(chǎn) 結核病是由結核桿菌感染引起的慢性傳染病。結核菌可能侵入人體全身各種器官，但主要侵犯肺臟，稱為肺結核病。結核病又稱為癆病和“白色瘟疫”，是一種古老的傳染病，自有人類以來就有結核病。每年3月24日為世界防治結核病日。 2022/8/2621結核病的發(fā)生和發(fā)展結核病的發(fā)生和發(fā)展 ：核菌首次侵入人體主要是通過呼吸道進入肺泡并在此繁殖，稱為

6、原發(fā)感染。原發(fā)感染處形成原發(fā)病灶，結核菌從原發(fā)病灶中沿淋巴管進入到血流中，叫做血行播散 。結核菌通過血行播散進入各臟器中，有的立即發(fā)病，發(fā)生嚴重的粟粒型結核病和結核性腦膜炎。有的結核菌潛伏在各種器官內(nèi)，待機體免疫力下降時發(fā)病，稱為繼發(fā)結核病，也叫內(nèi)源性發(fā)病 。 但是，近年來證實，如果多次、大量感染結核菌，也能形成外源性發(fā)病 。所以，積極發(fā)現(xiàn)并治愈傳染源，減少結核菌傳播的機會；經(jīng)常保持室內(nèi)通風換氣；保持健康的身體、增強免疫力、新生兒要接種卡介苗。就可以減少感染和發(fā)病的機會。 2022/8/2623卡介苗的簡史 卡介苗簡稱BCG，1907年法國內(nèi)科醫(yī)生卡美特和介蘭在前人不斷實踐和經(jīng)驗總結的基礎上，

7、認識到有效的結核免疫需活菌感染，但必須改變結核菌的毒力。于是他們從牛乳中分離出來的一株毒力很強的牛型結核桿菌在甘油牛膽汁馬鈴薯培養(yǎng)基上移植培養(yǎng)，經(jīng)過13年231代的移植培養(yǎng)和傳代，并通過近似人類的動物猩猩身上試驗。2022/8/2624卡介苗2022/8/2626卡介苗接種的預防效果 1、目的：卡介苗是一次人工原發(fā)感染，通過人工方法，使未感染機體產(chǎn)生一次輕微的沒有危險的感染，機體可自動的產(chǎn)生特異性免疫力，這種獲得性的免疫力可限制以后結核菌感染在體內(nèi)的播散，從而可以減少結核病發(fā)病的目的。2022/8/2627 人工原發(fā)感染優(yōu)點是： （1）可以掌握人工感染時在機 體健康狀況下進行； （2）可以掌握

8、人工劑量； （3）可以產(chǎn)生特異性免疫力。2022/8/2628 卡介苗接種對象 卡介苗接種對象應根據(jù)結核病流行情況而定，主要是未受結核桿菌感染的嬰兒，結核病感染機會多的地區(qū)接種越早越好，因此新生兒是主要接種對象，最遲在1歲以內(nèi)接種。有些新生兒由于出生時種種原因未能接種卡介苗，補種時應根據(jù)各地疫情情況，采用做結素試驗或不做結素試驗直接接種法。（建議超過三個月小兒補種卡介苗先做結素試驗陰性，接種為好，因為現(xiàn)在流動人員多、雜，流行感染機會也就多，假如已自然感染再加上接種人工感染，這樣就有可能引起強反應，如局部強反應或腋下淋巴結腫大。2022/8/2630卡介苗的生產(chǎn)卡介菌種在綜合培養(yǎng)液中培養(yǎng)后，收集

9、菌膜，混懸于適宜的滅菌的保護液內(nèi)，經(jīng)冷凍干燥制成。所得到的活菌制劑，具有產(chǎn)生抗體、增強免疫力、誘導-干擾素產(chǎn)生的作用。 2022/8/2631基本要求生產(chǎn)、檢定用設施、原料及輔料、水、器具、動物等應符合凡例的有關要求。卡介苗生產(chǎn)車間必須與其他生物制品生產(chǎn)車間及實驗室分開。所需設備及器具均須單獨設置并專用?？ń槊缰圃臁b及保存過程均須避光。從事卡介苗制造的工作人員及經(jīng)常進入卡介苗制造室的人員，必須身體健康，經(jīng)X射線檢查無結核病，且每年經(jīng)X射線檢查12次，可疑者應暫離卡介苗的制造。2022/8/2632種子批的制備菌種生產(chǎn)用菌種應符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定。1、名稱及來源采用卡

10、介菌 D2 PB302 菌株。嚴禁使用通過動物傳代的菌種制造卡介苗。2、種子批的建立應符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定。2022/8/2633種子批的傳代3、種子批的傳代 工作種子批啟開至菌體收集單批收獲培養(yǎng)物的總傳代數(shù)應不得超過12代。2022/8/26344、種子批菌種的檢定1）培養(yǎng)特性 卡介菌在蘇通培養(yǎng)基上生長良好，培養(yǎng)溫度在3739之間?？顾崛旧珣獮殛栃浴Ｔ谔K通馬鈴薯培養(yǎng)基上培養(yǎng)的卡介菌應是干皺成團略呈淺黃色。 在牛膽汁馬鈴薯培養(yǎng)基上為淺灰色黏膏狀菌苔。 在雞蛋培養(yǎng)基上有突起的皺型和擴散型兩類菌落，且?guī)\黃色。 在蘇通培養(yǎng)基上卡介菌應浮于表面，為多皺、微帶黃色的菌膜。202

11、2/8/2635毒力試驗 用結核菌素純蛋白衍生物皮膚試驗（皮內(nèi)注射0.2ml，含10IU）陰性、體重300400g的同性豚鼠4只，各腹腔注射1ml菌液（5mg/ml），每周稱體重，觀察5周動物體重不應減輕；同時解剖檢查，大網(wǎng)膜上可出現(xiàn)膿皰，腸系膜淋巴結及脾可能腫大，肝及其他臟器應無肉眼可見的病變。2022/8/2636有無毒分枝桿菌試驗 用結核菌素純蛋白衍生物皮膚試驗（皮內(nèi)注射0.2ml，含10IU）陰性、體重300400g的同性豚鼠6只，于股內(nèi)側(cè)皮下各注射1ml菌液（10mg/ml），注射前稱體重，注射后每周觀察1次注射部位及局部淋巴結的變化，每2周稱體重1次，豚鼠體重不應降低。6周時解剖3

12、只豚鼠，滿3個月時解剖另3只，檢查各臟器應無肉眼可見的結核病變。2022/8/2637 若有可疑病灶時，應做涂片和組織切片檢查，并將部分病灶磨碎，加少量生理氯化鈉溶液混勻后，由皮下注射2只豚鼠，若證實系結核病變，該菌種即應廢棄。當試驗未滿3個月時，豚鼠死亡則應解剖檢查，若有可疑病灶，即按上述方法進行，若證實系結核病變，該菌種即應廢棄。若證實屬非特異性死亡，且豚鼠死亡1只以上時應復試。2022/8/2638免疫力試驗 用種子批菌種制備疫苗，經(jīng)皮下免疫體重300400g豚鼠4只，每只注射0.2ml（1/10人用劑量），對照組注射0.2ml生理氯化鈉溶液。豚鼠免疫后45周，經(jīng)皮下攻擊103104強毒

13、人型結核分枝桿菌，攻擊后56周解剖動物，免疫組與對照組動物的病變指數(shù)及脾臟毒菌分離數(shù)的對數(shù)值經(jīng)統(tǒng)計學處理，應有顯著差異。種子批保存種子批應凍干保存于8以下。2022/8/2639疫苗生產(chǎn)流程2022/8/2640保存、運輸及有效期于28避光保存和運輸。自生產(chǎn)之日起，按批準的有效期執(zhí)行。保質(zhì)期一般是一年。2022/8/2641項目實施二 乙型肝炎疫苗的生產(chǎn) 乙肝疫苗是用于預防乙肝的特殊藥物。疫苗接種后，可刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生保護性抗體，這種抗體存在于人的體液之中，乙肝病毒一旦出現(xiàn)，抗體會立即作用，將其清除，阻止感染，并不會傷害肝臟，從而使人體具有了預防乙肝的免疫力，從而達到預防乙肝感染的目的。接種乙

14、肝疫苗是預防乙肝病毒感染的最有效方法。2022/8/2642乙肝疫苗的發(fā)展史乙肝疫苗形成于1986年，為了得到乙肝疫苗，研究人員從研究復試病毒，到酵母，并研究純化的蛋白質(zhì)序列。并經(jīng)過了大量的誘導免疫反應。 1991年，疫苗被應用于高危險人群。主要是一些兒童，因為兒童的感染率極高。 2005年，美國推行常規(guī)的疫苗注射。給所有未注射過乙肝疫苗的兒童注射。治療性疫苗是指在已感染病原微生物或已患有某些疾病的機體中，通過誘導特異性的免疫應答，達到治療或防止疾病惡化的天然、人工合成或用基因重組技術表達的產(chǎn)品或制品2022/8/2643接種乙肝疫苗接種程序：共3針，按照0、1、6 個月程序，即接種第1針疫苗

15、后，間隔1或6個月注射第2 及第3針疫苗。新生兒接種乙型肝炎疫苗越早越好，要求在出生后24h內(nèi)接種。接種部位新生兒為大腿前部外側(cè)肌肉內(nèi)，兒童和成人為上臂三角肌中部肌肉內(nèi)注射。由于嬰幼兒和成人的免疫應答敏感性不同，所以有的人打疫苗容易產(chǎn)生抗體，而部分人不會產(chǎn)生抗體。乙肝疫苗第一針后大概有30%左右的人產(chǎn)生抗體，而第二針后有50%70%左右，第三針后90%左右產(chǎn)生抗體。 2022/8/2644預防乙肝從新生兒開始 乙肝疫苗可以成功預防乙肝病毒的感染，新生兒一出生就接種乙肝疫苗，基本可以確保將來不得乙肝。 2022/8/2645控制乙肝蔓延人類是乙型肝炎病毒的唯一宿主，當安全、有效、足量的乙型肝炎疫

16、苗提供接種使用時，肯定將對控制乙型肝炎病毒的傳播起到?jīng)Q定性的作用。我國已實施新生兒國家免疫規(guī)劃，乙肝疫苗即是免費且強制性接種的疫苗之一。2022/8/2646 乙型肝炎疫苗的研制 乙型肝炎疫苗的研制先后經(jīng)歷了血源性疫苗和基因工程疫苗階段。目前基因工程乙肝疫苗技術已相當成熟，我國自行研制的疫苗經(jīng)多年觀察證明安全有效，亦已批準生產(chǎn)。乙肝疫苗的發(fā)展與應用，將對乙型肝炎的預防和控制起重要作用。 2022/8/2647乙肝疫苗的制備 目前使用的乙肝疫苗是基因工程疫苗-重組酵母乙肝疫苗和重組CHO乙肝疫苗，其主要成分是乙肝病毒的表面抗原，即一種乙肝病毒外衣殼蛋白，并非完整病毒。 這種表面抗原不含有病毒遺傳物質(zhì)，不具備感染性和致病性，但保留了免疫原性，即刺激機體產(chǎn)生保護性抗體的能力。 乙肝表面抗原曾經(jīng)是從乙肝病毒攜帶者的血液，經(jīng)純化滅活等嚴格工序制備而來，即血源性疫苗，該疫苗由于安全、來源和成本等原因已被淘汰(如，有引起血源性疾病的嫌疑和浪費大量的