《球形蛋白質(zhì)-表觀分子量檢測(cè)-核磁共振方法》編制說(shuō)明

1、球形蛋白質(zhì)-表觀分子量檢測(cè)-核磁共振方法標(biāo)準(zhǔn)方法編制說(shuō)明書(shū)工作簡(jiǎn)況項(xiàng)目來(lái)源根據(jù)CSTM標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)2022年6月6日材試標(biāo)字【2022】089號(hào)文件簽發(fā)的關(guān)于CSTM標(biāo)準(zhǔn)的立項(xiàng)公告，批準(zhǔn)CSTM標(biāo)準(zhǔn)球形蛋白質(zhì)表觀分子量的核磁共振檢測(cè)方法立項(xiàng)，中文版立項(xiàng)編號(hào)為：CSTM LX 9802 00956-2022，英文版立項(xiàng)編號(hào)為：CSTM LX 9802 00956-2022 E，標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目由科學(xué)試驗(yàn)領(lǐng)域委員會(huì)（CSTM/FC98）或技術(shù)委員會(huì)（CSTM/FC98/TC02）歸口，由北京大學(xué)分析測(cè)試中心負(fù)責(zé)牽頭起草。參與單位及工作組成員主編單位及成員：北京大學(xué)分析測(cè)試中心，李紅衛(wèi)博士和扶暉博士。協(xié)作單位

2、及成員：清華大學(xué)蛋白質(zhì)研究技術(shù)中心，徐寧博士；深圳灣實(shí)驗(yàn)室公共技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，吳宇杰博士；布魯克（北京）科技有限公司，呂娟工程師。工作簡(jiǎn)要過(guò)程2022年3月2日，北京大學(xué)分析測(cè)試中心在征求了多個(gè)協(xié)作單位同意的情況下，決定牽頭組織制定球形蛋白質(zhì)-表觀分子量檢測(cè)-核磁共振方法的標(biāo)準(zhǔn)方法。協(xié)作單位同意由北京大學(xué)分析測(cè)試中心負(fù)責(zé)方法的申請(qǐng)工作。2022年3月7日，北京大學(xué)分析測(cè)試中心完成了標(biāo)準(zhǔn)草案的預(yù)審稿和項(xiàng)目建議書(shū)等文件，北京大學(xué)分析測(cè)試中心老師以及各個(gè)協(xié)作單位的老師都提出了寶貴的建議。2022年4月29日，立項(xiàng)答辯前夕，北京大學(xué)分析測(cè)試中心專(zhuān)門(mén)召開(kāi)CSTM標(biāo)準(zhǔn)制定的工作會(huì)議。李紅衛(wèi)老師進(jìn)行了立項(xiàng)答辯

3、的試講，中心其它老師提出了修改意見(jiàn)。2022年5月6日，在CSTM標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)的組織下，李紅衛(wèi)代表北京大學(xué)分析測(cè)試中心完成了球形蛋白質(zhì)-表觀分子量檢測(cè)-核磁共振方法的標(biāo)準(zhǔn)方法的立項(xiàng)答辯。答辯過(guò)程中各個(gè)專(zhuān)家給出了修改建議。2022年6月6日，CSTM委員會(huì)簽發(fā)了正式的立項(xiàng)公告。2022年5月6日，完成立項(xiàng)答辯后，由北京大學(xué)分析測(cè)試中心、清華大學(xué)蛋白質(zhì)研究技術(shù)中心、深圳灣實(shí)驗(yàn)室公共技術(shù)服務(wù)平臺(tái)等單位成員成立了標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)工作組，建立了微信工作群，并進(jìn)行了第一次工作組線(xiàn)上會(huì)議，正式開(kāi)始了標(biāo)準(zhǔn)方法的編寫(xiě)工作。會(huì)上北京大學(xué)分析測(cè)試中心通報(bào)了項(xiàng)目立項(xiàng)情況，工作組確定了標(biāo)準(zhǔn)制定方案和時(shí)間安排，并進(jìn)行了工作劃分。北

4、京大學(xué)分析測(cè)試中心負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)方法理論文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)制定的調(diào)研工作，完成球形蛋白質(zhì)-表觀分子量測(cè)定-核磁共振方法標(biāo)準(zhǔn)草案和標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明的起草工作，并負(fù)責(zé)設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案和匯總整理試驗(yàn)結(jié)果等工作。清華大學(xué)蛋白質(zhì)研究技術(shù)中心和深圳灣實(shí)驗(yàn)室公共技術(shù)服務(wù)平臺(tái)負(fù)責(zé)設(shè)計(jì)和完成方法準(zhǔn)確性驗(yàn)證試驗(yàn)及方法準(zhǔn)確度的相關(guān)工作。布魯克（北京）科技有限公司負(fù)責(zé)試驗(yàn)儀器軟硬件保障及相關(guān)試驗(yàn)參數(shù)校驗(yàn)等工作。2022年5月23日標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)工作組線(xiàn)上召開(kāi)了第二次會(huì)議，對(duì)北京大學(xué)分析測(cè)試中心提供的標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行了討論和修改，進(jìn)一步完善了標(biāo)準(zhǔn)草案，并確定了測(cè)試試驗(yàn)與驗(yàn)證試驗(yàn)的試驗(yàn)方案與試驗(yàn)參數(shù)。2022年6月30日、7月7日和7月8日，北京大學(xué)分

5、析測(cè)試中心、清華大學(xué)蛋白質(zhì)研究技術(shù)中心和深圳灣實(shí)驗(yàn)室公共技術(shù)服務(wù)平臺(tái)分別完成了測(cè)試實(shí)驗(yàn)和驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的采集與處理。2022年7月15日北京大學(xué)分析測(cè)試中心完成了光散射驗(yàn)證數(shù)據(jù)的采集與處理。2022年7月18日北京大學(xué)分析測(cè)試中心完成了數(shù)據(jù)的匯總與精密度分析，并進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)草案的完善和標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明草案的編寫(xiě)。2022年7月21日，標(biāo)準(zhǔn)工作組召開(kāi)第三次線(xiàn)上工作會(huì)議，對(duì)北京大學(xué)分析測(cè)試中心提供的標(biāo)準(zhǔn)草案和標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明草案進(jìn)行了討論和修改，形成了標(biāo)準(zhǔn)的征求意見(jiàn)稿。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李紅衛(wèi)，扶暉，徐寧，吳宇杰，呂娟。標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)象簡(jiǎn)要情況及制訂標(biāo)準(zhǔn)的原則標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)象簡(jiǎn)要情況蛋白質(zhì)溶液體系中的表觀分子量更加真實(shí)的反

6、映了蛋白質(zhì)在接近生理狀態(tài)下的聚集狀態(tài)，而該聚集狀態(tài)與許多蛋白質(zhì)的功能直接相關(guān)，也是導(dǎo)致一些疾病的直接原因。核磁共振脈沖梯度場(chǎng)擴(kuò)散序譜實(shí)驗(yàn)可以測(cè)定溶液體系中化合物的擴(kuò)散系數(shù)，進(jìn)而得到分子在溶液條件下的表觀分子量，從而研究分子在溶液中的聚集狀態(tài)。對(duì)于蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)，其研究多在緩沖體系中完成，蛋白質(zhì)的緩沖體系多種多樣，緩沖體系的不同直接影響溶液的粘度從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子擴(kuò)散系數(shù)發(fā)生改變，得到的表觀分子量也不同。并且由于蛋白質(zhì)分子量較大，蛋白質(zhì)濃度不同也將改變?nèi)芤旱恼扯?，引起擴(kuò)散系數(shù)改變從而影響表觀分子量的測(cè)定。并且在實(shí)際測(cè)定過(guò)程中，不同的儀器脈沖梯度場(chǎng)強(qiáng)度也存在一些誤差，而此誤差將會(huì)以平方的形式放大作用于

7、擬合的擴(kuò)散系數(shù)，從而導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的差別。因此在不同的測(cè)試條件下得到可比的數(shù)據(jù)是非常困難的。標(biāo)準(zhǔn)制定的必要性在不同測(cè)試條件下測(cè)得的表觀分子量不能直接進(jìn)行比較，大大降低了已測(cè)定的表觀分子量在不同蛋白質(zhì)體系中的應(yīng)用價(jià)值。因此建立一套標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試方法，使得不同實(shí)驗(yàn)室、不同儀器和不同樣品條件測(cè)定的結(jié)果具有可比性可以提高數(shù)據(jù)結(jié)果的使用率，提高測(cè)試效率。并且，蛋白質(zhì)表觀分子量與蛋白質(zhì)的功能息息相關(guān)，建立一套標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試方法在蛋白質(zhì)的功能研究，以及蛋白質(zhì)類(lèi)藥物的研發(fā)和生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制中均有較好的應(yīng)用前景。制訂標(biāo)準(zhǔn)的原則2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)的編寫(xiě)格式按照GB/T 1.1-2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)

8、和編寫(xiě)規(guī)則、GB/T 20001.4 標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則 第4部分：試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一規(guī)定和要求的統(tǒng)一規(guī)定和要求進(jìn)行編寫(xiě)。2.3.2 本標(biāo)準(zhǔn)以建議一套在不同實(shí)驗(yàn)條件下結(jié)果具有普適性的標(biāo)準(zhǔn)化球形蛋白質(zhì)表觀分子量的測(cè)定方法為原則。方法中通過(guò)加入內(nèi)標(biāo)，以核磁共振測(cè)定相對(duì)擴(kuò)散系數(shù)代替擴(kuò)散系數(shù)進(jìn)行表觀分子量的測(cè)定，有效降低了測(cè)定條件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，使得即使不同實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果依然具有可比性，這是現(xiàn)有的方法無(wú)法實(shí)現(xiàn)的。2.3.3 本標(biāo)準(zhǔn)以北京大學(xué)分析測(cè)試中心李紅衛(wèi)博士2018發(fā)表的新方法的論文為基礎(chǔ)，旨在探索一條針對(duì)“高精尖”儀器設(shè)備新技術(shù)方法“實(shí)驗(yàn)室研發(fā)-實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用-形成標(biāo)準(zhǔn)方法-廣泛工業(yè)應(yīng)用”的科技成果轉(zhuǎn)化途

9、徑。此類(lèi)設(shè)備對(duì)操作人員技術(shù)水平要求較高，更多的時(shí)候是使用已經(jīng)具有的技術(shù)方法為科學(xué)研究提供服務(wù)。針對(duì)此類(lèi)設(shè)備新技術(shù)的開(kāi)發(fā)對(duì)操作人員技術(shù)水平要求更高，更加難以實(shí)現(xiàn)，而研發(fā)新方法后再進(jìn)行科技成果轉(zhuǎn)化的更少。采用國(guó)內(nèi)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)情況本標(biāo)準(zhǔn)為創(chuàng)新方法，在制定過(guò)程中未采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容確定的論據(jù)概述標(biāo)準(zhǔn)起草人對(duì)國(guó)內(nèi)外檢測(cè)蛋白質(zhì)表觀分子量的檢測(cè)技術(shù)以及應(yīng)用環(huán)境進(jìn)行了調(diào)研，目前還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)能夠測(cè)定蛋白質(zhì)表觀分子量的標(biāo)準(zhǔn)，而蛋白質(zhì)表觀分子量更加真實(shí)的反映了蛋白質(zhì)在接近生理狀態(tài)下的聚集狀態(tài)，該聚集狀態(tài)與許多蛋白質(zhì)的功能直接相關(guān)，也是導(dǎo)致一些疾病的直接原因，在科研與醫(yī)藥行業(yè)具有廣泛的應(yīng)用前景。在解

10、決了不同測(cè)試環(huán)境影響下，核磁共振技術(shù)是測(cè)定蛋白質(zhì)在各種體系下表觀分子量最有效的手段之一。因此標(biāo)準(zhǔn)起草人編制了球形蛋白質(zhì)-表觀分子量檢測(cè)-核磁共振方法標(biāo)準(zhǔn)方法草案，主要包括范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語(yǔ)和定義、原理、試劑或材料、儀器設(shè)備、樣品、試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理和精密度等內(nèi)容。標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)本標(biāo)準(zhǔn)在立項(xiàng)時(shí)的名稱(chēng)為球形蛋白質(zhì)表觀分子量的核磁共振檢測(cè)方法，根據(jù)立項(xiàng)時(shí)專(zhuān)家的建議，在編制過(guò)程中標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)工作組決定采用符合GB/T 1.1-2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則要求的三段式寫(xiě)法，將標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)變更為球形蛋白質(zhì)-表觀分子量檢測(cè)-核磁共振方法，相應(yīng)的英文名稱(chēng)并更為Globular Prot

11、ein - Determination of Apparent Molecular Weight - NMR Method。范圍關(guān)于測(cè)定對(duì)象的分子形狀：實(shí)際使用過(guò)程中球形和近球形的蛋白質(zhì)分子均適用于本標(biāo)準(zhǔn)的方法，大多數(shù)的蛋白質(zhì)均滿(mǎn)足這兩種情況，包括對(duì)重組的蛋白質(zhì)類(lèi)藥物、抗體藥物以及其它用于科研的具有特殊功能的蛋白質(zhì)分子的檢測(cè)。此方法也可以應(yīng)用于非球形蛋白質(zhì)的研究，通過(guò)對(duì)比測(cè)定表觀分子量和本身分子量，可以得出非球形蛋白質(zhì)分子性質(zhì)偏離球形的程度。關(guān)于檢測(cè)對(duì)象分子量：分子量超過(guò)100kDa時(shí)，蛋白質(zhì)的核磁信號(hào)較弱，測(cè)定結(jié)果誤差會(huì)變大，故限定為100kDa以下的蛋白質(zhì)。如果信號(hào)強(qiáng)度足夠，100kDa的

12、限定是可以突破的。關(guān)于檢測(cè)對(duì)象濃度：標(biāo)準(zhǔn)中使用的內(nèi)標(biāo)和蛋白質(zhì)分子分子量差別較大，體系屬于復(fù)雜體系，復(fù)雜體系在較稀情況下，粘度對(duì)兩類(lèi)分子影響差別不大（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)原理部分），因此給出了濃度限制，實(shí)際上，平時(shí)用來(lái)測(cè)試的蛋白質(zhì)濃度極少會(huì)用到1mM以上的濃度，因此絕大多少樣品滿(mǎn)足此條件。關(guān)于蛋白質(zhì)的緩沖體系：緩沖體系中可以不同，這也是這個(gè)方法的優(yōu)勢(shì)，但是最好不要有更大的分子添加劑，因此更大分子的添加劑會(huì)增大粘度對(duì)兩類(lèi)分子的粘度影響（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)原理部分），實(shí)際上常規(guī)測(cè)試樣品是極少有大分子添加劑的，因?yàn)樘砑觿?huì)產(chǎn)生信號(hào)干擾。原理 幾乎所有的關(guān)于核磁共振測(cè)定擴(kuò)散系數(shù)進(jìn)而測(cè)定分子量、分子形狀相關(guān)的文獻(xiàn)都是從Stokes

13、Einstein方程開(kāi)始，即核磁共振測(cè)得的擴(kuò)散系數(shù)通過(guò)該方程與分分子形狀進(jìn)而與分子量相關(guān)。最初在編寫(xiě)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)原理也是從這方面開(kāi)始的。但是立項(xiàng)時(shí)專(zhuān)家提出如果同時(shí)考慮內(nèi)標(biāo)小分子和蛋白質(zhì)大分子的復(fù)雜體系，StokesEinstein方程可能需要修正，由于目前該方法還比較新，建議夯實(shí)基礎(chǔ)。標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)組覺(jué)得這是非常好的建議，進(jìn)一步更深層次的調(diào)研了這方面的文獻(xiàn)，整理后加入了原理部分，使得原理部分更加詳實(shí)。儀器、參數(shù)及數(shù)據(jù)擬合 考慮到蛋白質(zhì)大分子信號(hào)較弱，所以需要采用高場(chǎng)超低溫探頭來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。蛋白質(zhì)大分子的樣品都是在水的緩沖體系中檢測(cè)，相對(duì)與水的信號(hào)，蛋白質(zhì)的分子的信號(hào)是非常非常弱的，所以水峰壓制應(yīng)格外重視，如

14、應(yīng)有好的勻場(chǎng)，準(zhǔn)確的水的化學(xué)位移中心以及準(zhǔn)確刻度的脈沖時(shí)間等。由于最終是通過(guò)強(qiáng)度的擬合得到擴(kuò)散系數(shù)，所以譜圖應(yīng)保證有足夠的信噪比，同時(shí)數(shù)據(jù)處理時(shí)要仔細(xì)調(diào)信號(hào)相位和基線(xiàn)。擬合使用的是e指數(shù)擬合，最強(qiáng)的信號(hào)和最弱的信號(hào)在保證信噪比的情況下，要到擬合曲線(xiàn)兩端的平臺(tái)區(qū)，否則擬合會(huì)有誤差，經(jīng)過(guò)工作組的多次實(shí)踐，當(dāng)最強(qiáng)信號(hào)和最弱信號(hào)強(qiáng)度比2030倍時(shí)最佳，所以需要對(duì)擴(kuò)散時(shí)間和梯度場(chǎng)時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化。精密度和不確定度目前并沒(méi)有測(cè)定表觀分子量的標(biāo)準(zhǔn)方法，關(guān)于精密度的計(jì)算并沒(méi)有可用的參考。編寫(xiě)工作組根據(jù)該方法實(shí)際使用的場(chǎng)景，經(jīng)過(guò)討論，認(rèn)為同一樣品在不同的實(shí)驗(yàn)條件下的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%，就能很好的滿(mǎn)足實(shí)際使用的需

15、求。實(shí)際試驗(yàn)過(guò)程中，由北京大學(xué)分析測(cè)試中心、清華大學(xué)蛋白質(zhì)研究技術(shù)中心以及深圳灣實(shí)驗(yàn)室公共技術(shù)平臺(tái)對(duì)同一實(shí)驗(yàn)不同核磁共振儀器以及不同實(shí)驗(yàn)室的核磁共振儀器條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果顯示，無(wú)論同一實(shí)驗(yàn)室的不同儀器還是不同實(shí)驗(yàn)室的儀器，實(shí)際測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%?？紤]到本標(biāo)準(zhǔn)的方法還比較新，立項(xiàng)時(shí)專(zhuān)家提出的使用更多的方法如質(zhì)譜進(jìn)行對(duì)比的問(wèn)題，經(jīng)過(guò)工作組的調(diào)研，質(zhì)譜直接測(cè)定的是分子的絕對(duì)分子量和我們所提出的考慮溶液條件下的表觀分子量還是有些出入的，但如果驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中采用的蛋白質(zhì)在溶液中是以穩(wěn)定的單體形式存在，則絕對(duì)分子量和表觀分子量是比較接近的，這種情況下質(zhì)譜可以進(jìn)行試驗(yàn)方法的驗(yàn)證。工作組選擇了

16、滿(mǎn)足以上條件的標(biāo)準(zhǔn)蛋白，并且此標(biāo)準(zhǔn)蛋白出廠時(shí)已經(jīng)進(jìn)行了質(zhì)譜分子量的測(cè)定，故工作組認(rèn)為可以直接使用標(biāo)注分子量驗(yàn)證，無(wú)需再重復(fù)進(jìn)行質(zhì)譜試驗(yàn)，結(jié)果顯示標(biāo)注分子量與核磁共振結(jié)果平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%。另外，光散射可以測(cè)定特定溶液條件下的表觀分子量，使用光散射的方法測(cè)定的表觀分子量與核磁共振測(cè)定結(jié)果的平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.4%。不同的試驗(yàn)手段都驗(yàn)證了核磁共振測(cè)定表觀分子量的可靠性。主要試驗(yàn)（或驗(yàn)證）結(jié)果的分析、綜述報(bào)告等 試驗(yàn)結(jié)果包括核磁共振儀器試驗(yàn)結(jié)果和其它手段試驗(yàn)結(jié)果。前者包括同一實(shí)驗(yàn)室、不同核磁共振儀器的試驗(yàn)結(jié)果和不同實(shí)驗(yàn)室、不同儀器的試驗(yàn)結(jié)果，這些結(jié)果用于驗(yàn)證不同儀器和不同操作人結(jié)果的重復(fù)性

17、。同時(shí)測(cè)定時(shí)每個(gè)樣品分別在三種不同的緩沖體系下進(jìn)行，測(cè)定結(jié)果用于驗(yàn)證緩沖體系中不同鹽離子濃度和不同粘度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果都具有較好的重復(fù)性。其它的實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括了標(biāo)注分子量（質(zhì)譜結(jié)果）和光散射結(jié)果與核磁共振試驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比，用于驗(yàn)證核磁共振試驗(yàn)方法的可靠性。結(jié)果顯示核磁共振方法具有較好的可靠性。具體結(jié)果見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)精密度部分，使用參數(shù)及擬合曲線(xiàn)等見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)附錄部分。與有關(guān)的現(xiàn)行的方針、政策、法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本標(biāo)準(zhǔn)符合現(xiàn)行方針、政策、法律、法規(guī)的規(guī)定?，F(xiàn)行的JY/T 0578-2020,超導(dǎo)脈沖傅里葉變換核磁共振波譜測(cè)試方法通則標(biāo)準(zhǔn)中界定術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)征求意見(jiàn)及重大分歧意見(jiàn)的處理經(jīng)過(guò)和依據(jù)（暫無(wú)）標(biāo)準(zhǔn)水平建議，預(yù)期的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效果本標(biāo)準(zhǔn)建立了一套使用核磁共振技術(shù)測(cè)定球形或近球形蛋白質(zhì)表觀分子量的標(biāo)準(zhǔn)