千金藤屬植物地不容和云南地不容中多糖和葡聚糖的含量測定

1、千金藤屬植物地不容和云南地不容中多糖和葡聚糖的含量測定【摘要】目的千金藤屬植物具有良好藥用價值，許多研究說明其含有豐富的生物堿成分，但對該屬植物其他成分的研究很少。對千金藤屬植物非生物堿成分的組成和活性的研究，有利于更加深化地理解該屬植物的藥效和藥理作用。方法從防己科千金藤屬植物地不容StephaniaepigeaeH.S.L及云南地不容StephaniayunnanensisH.S.L中，采用苯酚硫酸測定法、銅試劑沉淀測定法分別測定地不容和云南地不容中的總多糖和葡聚糖的含量。結(jié)果地不容和云南地不容中分別含有25.14，13.66的總多糖及1.00，0.71的葡聚糖。結(jié)論苯酚硫酸法和銅試劑沉淀

2、法結(jié)合使用，為該植物多糖的別離純化及多糖成分的構(gòu)造、活性研究提供可行手段。千金藤屬植物的葡聚糖具有免疫促進(jìn)作用，提示可對地不容的多糖成分做活性挑選研究。千金藤屬植物的藥用價值較高，目前對地不容的生物堿成分研究比擬透徹，但對其非生物堿成分研究仍處于空白，此項研究將有助于推動其藥用價值的開發(fā)?！娟P(guān)鍵詞】地不容；云南地不容；多糖；葡聚糖；含量測定ntentDeterinatinfPlysaharidesandGluansinStephaniaepigeaeH.S.LandStephaniayunnanensisH.S.L.Abstrat：bjetiveStephaniaisvaluableinffi

3、inalusing.ItasindiatedinanyresearhesthatStephaniantentsisplentyfalkalid.therpsitinshavesarelybeenstudied.Thestudynnn-alkalidpsitinsuldhelpustprehenditspharieffets.ethdsExtratedplysaharidesfrenisperaeaeStephaniaepigeaeH.S.LandStephaniayunnanensisH.S.L.Deterinedthententsfttalplysaharidesandgluans.Resu

4、ltsTheresultsfexperientsindiatedthatthereere25.14%ttalplysaharidesinStephaniaepigeaeH.S.Land13.66%inStephaniayunnanensisH.S.L.,hile1.00%gluansinStephaniaepigeaeH.S.Land0.71%inStephaniayunnanensisH.S.L.nlusinAneffetivetehniqueisprvidedtpurifyandseparatetheplysaharidesfStephaniaintheseexperients.Steph

5、aniaisakindfffiinalherb.Thestudynalkalidissuffiient,butitisvidntheresearhfnn-alkalidpsitins.ThisstudyishelpfultdevelptheffiinalusingftheStephania.Keyrds：Stephaniaepigeae;Stephaniayunnanensis;Plysaharides;Gluan;ntents防己科千金藤屬植物有較好的藥用價值，國內(nèi)外都有相關(guān)報道。該屬植物約60種，我國有39種和1變種，20世紀(jì)60年代科學(xué)家對其有效成分產(chǎn)生了興趣，大量研究工作說明該屬植物含

6、有豐富的生物堿成分，但對該屬植物其他成分的研究還較少見報道，國內(nèi)曾報道對千金藤屬植物粉防己地上局部別離得到兩個雙黃酮化合物、谷甾醇和正三十五烷1，2，從其根部還別離到兩種葡聚糖3。由于千金藤屬植物的良好藥用價值，對其非生物堿成分的組成和活性的研究可幫助我們更加深化的理解該屬植物的藥效和藥理作用。地不容和云南地不容為防己科千金藤屬下的兩種藥用植物。地不容StephaniaepigeaeH.S.L為云南著名的傳統(tǒng)中草藥，民間常以山烏龜、金不換、地膽、白地膽稱之。其味苦、辛，性寒，有小毒，具有清熱、解毒、鎮(zhèn)靜、止痛、理氣等功能；民間用于治療風(fēng)濕骨痛，胃痛，毒蛇咬傷等。研究說明地不容含有輪環(huán)藤寧、千金

7、藤素、箭毒堿和異紫堇定堿4等生物堿成分。云南地不容StephaniayunnanensisH.S.L的塊根含有顱痛定rtundine和青藤堿sinenine，前者有鎮(zhèn)靜作用，后者有肌松作用5。我們采集地不容和云南地不容的塊根，用苯酚硫酸法對其總多糖含量進(jìn)展測定，同時采用銅試劑沉淀法對其具葡聚糖構(gòu)造的多糖進(jìn)展了含量測定。為該兩種植物多糖的別離純化及多糖成分的構(gòu)造、活性研究提供一定根據(jù)。1材料與設(shè)備地不容和云南地不容藥材購自云南永仁藥材，經(jīng)本實驗室王治平鑒定為防己科千金藤屬植物地不容StephaniaepigeaeH.S.L和云南地不容StephaniayunnanensisH.S.L的新穎塊根，

8、切片枯燥后備用；重蒸苯酚北京鼎國生物技術(shù)開展中心，標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖，其余試劑均為分析純，實驗用水為單蒸水。電子分析天平瑞士SartriusBP221S，核酸蛋白儀美國BekanDU600，臺式冷凍離心機(jī)德國universal32R。2方法與結(jié)果2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液與標(biāo)準(zhǔn)曲線制備2.1.1標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的配制精細(xì)稱取枯燥至恒重的葡萄糖0.4988g，置50l量瓶中，加水溶解，定容，作為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲藏液9.976g/L。取儲藏液1l，置100l量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，配成濃度為99.76g/L的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液備用。2.1.25苯酚試劑的配制稱取重蒸酚5.0g，置100l棕色容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻

9、，放冰箱備用。2.1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精細(xì)量取99.76g/L的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00l分別置于具塞試管中，準(zhǔn)確補(bǔ)水至2.0l，再分別參加5苯酚溶液1.0l，在旋轉(zhuǎn)混合器上混勻，小心參加濃硫酸10.0l,于旋轉(zhuǎn)混合器上混勻，置沸水浴中煮沸2in，冷卻后在485n波長處測定其最大光吸收值，同時以水做空白，以吸光度為縱坐標(biāo)，糖濃度為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)計算回歸方程為A7.60940.0224，r0.9980n=7，葡萄糖濃度在4.98849.88g/L范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2苯酚硫酸法測定總多糖含量2.2.1

10、樣品溶液制備精細(xì)稱取已經(jīng)枯燥好的藥材粉末1g，置圓底燒瓶中，加50l水，加熱回流1h，稍冷即過濾，濾液置50l量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精細(xì)量取上述溶液5l，置于80l離心管中，加無水乙醇20l，混勻5in后，以3000r/in離心5in，棄去上清液。殘渣用水溶解并定容至10l，混勻，即得樣品測定母液。取母液1l，置25l量瓶中，加水稀釋至刻度，即得樣品測定液。2.2.2樣品含量測定精細(xì)汲取樣品測定液2.0l參加具塞試管，照“2.1.3項下自“參加5苯酚溶液1.0l起，依法測定吸光度，隨行空白，計算。結(jié)果見表1。2.2.3回收率精細(xì)稱取藥材粉末0.5g，共3份，分別精細(xì)參加標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液2

11、l63.05g/L，按上述方法測定，計算回收率。地不容總多糖的平均回收率為95.81，云南地不容總多糖的平均回收率為93.22。2.3銅試劑沉淀法測定葡聚糖含量2.3.1試劑氫氧化鈉溶液100g/L：稱取100g氫氧化鈉，加水溶解并稀釋至1L，參加無水硫酸鈉至飽和，備用。銅試劑儲藏液：稱取3.0guS45H2，30.0g檸檬酸鈉，加水溶解并稀釋至1L，混勻，備用。銅試劑溶液：取銅試劑儲藏液50l，加水50l，混勻后參加固體無水硫酸鈉12.5g并使其溶解。臨用新配。洗滌劑：取水50l，參加10l銅試劑溶液、10l氫氧化鈉溶液，混勻。硫酸溶液10：取10l硫酸參加到80l左右的水中，混勻，冷卻后稀

12、釋至100l。2.3.2樣品溶液制備精細(xì)稱取已經(jīng)枯燥的藥材粉末1g，置圓底燒瓶中，加50l水，加熱回流1h，稍冷即過濾，濾液置50l量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精細(xì)量取上述溶液5l，置于80l離心管中，加無水乙醇20l，混勻5in后，以3000r/in離心5in，棄去上清液。殘渣用水溶解并定容至10l，混勻，取該溶液2l，置于離心管中，參加100g/L氫氧化鈉溶液2.0l，銅試劑2.0l，沸水浴中煮沸2in，冷卻，以3000r/in離心5in，棄去上清液。殘渣用洗滌液數(shù)毫升洗滌，離心后棄去上清液，殘渣用10硫酸溶液2.0l溶解并轉(zhuǎn)移至10l容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，即得樣品測定液。2.

13、3.3樣品含量測定精細(xì)汲取樣品測定液2.0l參加具塞試管，照“2.1.3項下自“參加5苯酚溶液1.0l起，依法測定吸光度，隨行空白，計算。結(jié)果見表1。表1地不容和云南地不容中總多糖和葡聚糖含量測定結(jié)果略2.3.4回收率精細(xì)稱取藥材粉末0.5g，共3份，分別精細(xì)參加標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液1l63.05g/L，按上述方法測定，計算回收率。地不容葡聚糖的平均回收率為90.6，云南地不容葡聚糖的平均回收率為92.74。上述實驗結(jié)果說明，采用苯酚硫酸法測定兩種藥材中的總多糖含量以及采用銅試劑沉淀法測定藥材中的葡聚糖含量是穩(wěn)定可行的。3討論苯酚硫酸法是最常用的測定粗多糖含量的一種方法，其測定值可反映樣品中粗多糖的

14、總含量。由于地不容和云南地不容采用的是塊根作為藥用局部，因此用苯酚硫酸法測定的總多糖含量中存在淀粉等物質(zhì)的干擾。使用銅試劑沉淀法，可排除淀粉類物質(zhì)對測定的干擾，將具有葡聚糖構(gòu)造的多糖沉淀下來，測定藥材中葡聚糖的含量。董群等3從千金藤屬植物漢防己根的熱水提取液中別離出2個葡聚糖，通過免疫藥理試驗發(fā)現(xiàn)其具有一定的免疫促進(jìn)作用。實驗結(jié)果說明其同屬植物地不容和云南地不容的根塊莖中也含有一定量的葡聚糖，其活性如何，需要對地不容和云南地不容的多糖成分進(jìn)一步別離純化后進(jìn)展活性篩眩對地不容和云南地不容的生物堿成分研究目前已經(jīng)比擬透徹，但對其非生物堿成分研究幾乎處于空白狀態(tài)，由于該類植物的藥用價值較高，對其非生物堿化學(xué)成分的全面、深化的研究將進(jìn)一步進(jìn)步它們的藥用價值?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1馬養(yǎng)民.千金藤屬植物化學(xué)成分研究J.西北林學(xué)院學(xué)報,2022,19(3)：125.2SiD,ZhngD,ShaY,etal,Bi