臨床免疫學檢驗：移植免疫與免疫學檢測

1、移植免疫與免疫學檢測第二十五章教學目標1.掌握：移植抗原的類型, 移植排斥反應的類型和特點，如何預防排斥反應的發(fā)生；排斥反應的免疫檢測2.熟悉：移植相關的概念，常用的免疫抑制劑3.了解：常見器官移植的種類和特點；一. 基本概念移植（transplantation）受體(receipt):接受移植物的個體，也稱宿主。供體(donor): 提供移植物的個體。移植物(graft, transplant):被移植的部分。 將健康細胞，組織或器官從其原部位移植到自體或異體的 一定部位，用以替代或補償機體所喪失的結構和功能的 現代醫(yī)療手段。一. 基本概念移植自體移植同系移植同種異體移植異種移植同卵雙生子、

2、近交系動物人人豬人不排斥排斥二. 同種異基因移植排斥的本質本質是對同種異型抗原（alloantigen）的免疫應答，具有免疫應答的所有特征, 如特異性和記憶性，T細胞在移植排斥反應中起關鍵作用；宿主抗移植物反應移植物抗宿主反應Host versus graft reaction ,HVGRGraft versus host reaction ,GVHR1. 靶抗原(同種異型抗原)主要組織相容性抗原 MHC抗原HLA次要組織相容性抗原 mHC抗原Major histocompatibility complexMinor histocompatibility system引起快而強烈的排斥反應引起

3、的排斥反應一般較弱是引起移植排斥的主要抗原，也稱移植抗原如 H-Y為Y染色體連鎖, 組織特異性抗原 2.細胞 識別與被識別組織細胞血管內皮細胞HLA I IIHLA I過路細胞（過客細胞）：移植物內APC、淋巴細胞HLA I II主要由受者T細胞介導：CD8+T、CD4+T3.受者T細胞對供者MHC分子的識別（同種識別）直接識別間接識別受者T細胞直接識別供者細胞表面的MHC分子或MHC分子抗原肽復合物供者MHC分子由受者APC攝取、加工后由受者MHC分子所提呈（脫落的MHC分子或脫落的細胞）引起的排斥反應快而強，是早期急性排斥的主要機制引起的排斥反應較晚一些，介導急性排斥反應的中、晚期和慢性排

4、斥反應mHC和其它抗原亦是此種方式識別TAPCAPCT供者APC受者APC任意肽 供者MHC分子的片段直接識別間接識別受者T三.同種異體移植排斥反應的類型及效應機制超急性排斥反應急性排斥反應慢性排斥反應血管接通后數分鐘 至 12天移植后數周至數月內移植后數月至數年HVGR1. 超急性排斥反應預存抗體（ABO血型抗體，HLA抗體；術前反復輸血、懷孕、再次移植等）抗原（紅細胞，血管內皮細胞表面）激活補體直接破壞靶細胞活性片段引起血管通透性增高,中性粒細胞浸潤,引起組織損傷纖維蛋白沉積和大量血小板聚集血管炎癥反應、血管內凝血，導致血栓器官不可逆性缺血、變性、壞死2. 急性排斥反應細胞免疫排斥體液免疫

5、排斥CD4+ Th介導的遲發(fā)型超敏反應性損傷CD8+ CTL的細胞毒效應補體激活,ADCC急性間質炎急性血管炎抗體在移植排斥中的作用1 導致移植物被排斥CDC: 補體依賴的細胞毒性。參與這種作用的抗體主要 是IgM類抗體。2 保護移植物不被排斥ADCC: 抗體依賴的細胞毒性。與移植物結合后，可通過其Fc段 與具有IgG Fc受體的NK細胞、巨噬細胞結合，導致它們 活化，直接破壞移植物。參與這種ADCC作用的抗體是 IgG類。可與移植物上的抗原結合，但不激活補體，也不引起細胞毒效應，卻可阻斷其他抗體或T細胞與這一抗原決定簇結合，從而起到保護作用，此類抗體被稱為封閉抗體/增強抗體（blocking

6、 antibody/enhancing antibody）。 3. 慢性排斥反應由多因素參與急性排斥反應的延續(xù)CD4+Th和巨噬細胞相關的慢性炎癥反復多次抗體或細胞介導的內皮損傷細胞損傷誘發(fā)持續(xù)分泌多種生長因子(如胰島素樣生長因子、血小板源性生長因子、轉化生長因子等）導致血管壁增厚、間質纖維化間質纖維化、移植物內血管硬化移植物抗宿主反應（Graft versus host reaction ,GVHR ）骨髓移植：供者T細胞對受者細胞的MHC抗原產生的免疫應答，導致宿主皮膚、肝臟、腸道上皮細胞等損害。主要分為急性和慢性兩種。四.同種異體移植排斥反應的防治1. ABO抗體篩查2. 細胞毒試驗(交

7、叉配型)CDC: 受者血清+供者T/B細胞超急性排斥自身交叉配型:排除假陽性流式細胞術交叉配型3.HLA配型：4. 淋巴細胞交叉配型急、慢性排斥反應供受者淋巴細胞混合培養(yǎng)抗原分型(血清):等位基因分型供者和受者均需做HLA分型，以便選擇最匹配的供受者。在HLA-A、B、C、DR、DQ、DP六個位點中一般主要做 DR、A、B，其中II抗原比I類抗原更重要一些。相關統(tǒng)計結果提示：3位點6個抗原均匹配時，移植腎的10年存活率為62%，5抗原為47%，4抗原為45%，3抗原為40%，無1匹配時為33%，說明HLA配型可減少移植物的同種異型抗原性，有助于提高移植物的長期存活率。移植物存活與HLA配型的關

8、系群體反應性抗體（PRA）:1.用40-100份已知HLA類型的無關淋巴細胞做CDC試驗，檢測待移植受者血清中所含細胞毒性HLA抗體的百分數(PRA)。2.國際上，應用群體反應性抗體水平，判斷器官移植 時受體的敏感程度。高PRA 狀態(tài)的受體對所接受的 移植物將構成較大的威脅。4.使用免疫抑制劑環(huán)孢霉素A（CsA）, FK506 :抑制IL-2/IL-2R表達硫唑嘌呤,環(huán)磷酰胺：抑制DNA合成，細胞增殖糖皮質激素：抑制MHC分子表達，巨噬細胞的活化生物性免疫抑制劑化學類免疫抑制劑抗淋巴細胞球蛋白（ALG）或抗胸腺細胞球蛋白(ATG)細胞性單克隆抗體：抗CD3,CD4,CD8融合蛋白：IL-2與白

9、喉毒素融和蛋白，CTLA-4/Ig Fc反義寡核苷酸5. 誘導對移植物的免疫耐受大量輸入可溶性供者MHC分子或其中的關鍵性基序，誘導特異性T細胞凋亡乃至耐受大量輸入可溶性CTLA-4，以阻斷B7與CD28的相互作用，干擾共刺激信號的形成，誘導T細胞無能T細胞疫苗：誘導抗獨特性抗體，破壞針對移植物的特異性T 細胞，誘導免疫耐受誘導或過繼調節(jié)性T細胞、耐受性DC細胞，誘導免疫耐受五 . 排斥反應的免疫監(jiān)測1. 體液免疫水平的檢測： a.特異性抗體水平的檢測； b.補體水平的檢測；2. 細胞免疫水平的檢測： a.外周血T細胞及其亞群的計數和比值變化， CD30、CD69； b.NK細胞活性測定，CD3-CD16+CD56+； c.血清細胞因子測定，IL-2, IFN-, sIL-2R； d.黏附分子及其配體的檢測3. 尿微量蛋白的檢測： a.有助于判斷大器官移植，尤其是腎移植時排斥反應 的發(fā)生； b.作為免疫抑制藥物肝腎毒副作用的觀察指標；4. 急性時相反應