畢業(yè)論文(李娟)課件

1、辣椒拮抗內(nèi)生菌的篩選、鑒定及應(yīng)用效果評價答 辯 人：李 娟專 業(yè)：食 品 科 學(xué)導(dǎo) 師：夏延斌 教授 論文章節(jié)第一章：文獻綜述 第二章：辣椒拮抗內(nèi)生菌的分離、篩選及鑒定第三章：響應(yīng)曲面法優(yōu)化辣椒拮抗內(nèi)生菌的發(fā)酵條件 第四章：辣椒拮抗內(nèi)生菌對果蔬采后保鮮作用的研究第五章：全文結(jié)論及創(chuàng)新點 第一章 研究目的與意義 果蔬的采后病害是影響其保鮮和貯藏的主要因素之一，目前使用防腐劑或保鮮劑來減少病害仍是主要措施，但劑量不適易造成過多殘留，危害人們的健康；連續(xù)使用易誘發(fā)病原菌的抗藥性。而健康的植物體內(nèi)存在大量的內(nèi)生菌，其中有一些對病原菌具有明顯的拮抗作用，可作為控制果蔬采后病害的一種新資源，具有良好的應(yīng)用

2、前景。 從辣椒植物中篩選出能產(chǎn)生抗菌活性高、抗菌譜廣、安全的抗菌物質(zhì)的菌株，為果蔬采后保鮮方面的研究奠定技術(shù)與理論基礎(chǔ)。 本課題研究的主要內(nèi)容 1、分離和篩選辣椒拮抗內(nèi)生菌 從健康辣椒植株中經(jīng)初篩、復(fù)篩分離對辣椒疫霉病菌、辣椒黑霉病菌、辣椒炭疽病菌都有明顯拮抗作用的內(nèi)生菌X，通過形態(tài)學(xué)分析和布魯克公司UltrafleXtreme MALDI-TOF-TOF生物質(zhì)譜儀的鑒定，確定菌株所在種屬。 2、優(yōu)化拮抗內(nèi)生菌株X的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件 通過單因素試驗找出菌株最適宜的生長培養(yǎng)基和發(fā)酵條件 ，再利用Minitab15軟件設(shè)計找出該菌株X對3種病原菌拮抗作用最佳的因素組合。 3、研究拮抗內(nèi)生菌株X對辣

3、椒采后病害的影響利用優(yōu)化得到的最佳的拮抗內(nèi)生菌的培養(yǎng)條件，在此基礎(chǔ)上研究其抑菌效果，并應(yīng)用到采后的新鮮辣椒果實上，對其進行防腐保鮮的研究，提高辣椒采后的保鮮效果，從而延長貯藏時間。 第二章 辣椒拮抗內(nèi)生菌的分離、篩選及鑒定 辣椒拮抗內(nèi)生菌分離篩選及鑒定的實驗結(jié)果1、從辣椒植株的各個部位分離得到的內(nèi)生菌總數(shù)為 8.9104cfug-1，其中莖、葉、果實中分離得到內(nèi)生菌總數(shù)分別為2.3104cfug-1、5.8104cfug-1、0.8104cfug-1。其中真菌有6株，細菌有35株，放線菌2株。2、從不同辣椒品種中分離到的內(nèi)生菌種類和數(shù)量來看，朝天椒中內(nèi)生細菌相對較多，有103cfu/g級別，其

4、次為線椒，尖椒最少，而不同部位的內(nèi)生真菌在數(shù)量上和細菌差別不大。線椒分離出5種不同細菌，2株不同形態(tài)的真菌；柿子椒4種內(nèi)生細菌，1株內(nèi)生真菌；朝天椒和尖椒中分別分離出2株和1株內(nèi)生細菌，無內(nèi)生真菌。 辣椒不同部位內(nèi)生菌的分布情況 不同辣椒品種果實內(nèi)生菌的分布情況 辣椒內(nèi)生拮抗菌X對3種病原菌的抑制效果圖 辣椒內(nèi)生拮抗菌X的生理生化鑒定結(jié)果 第三章 響應(yīng)曲面法優(yōu)化辣椒拮抗內(nèi)生菌的發(fā)酵條件 實驗?zāi)康模涸趩我蛩卦囼灥幕A(chǔ)上，運用Minitab15響應(yīng)曲面法的中心復(fù)合試驗設(shè)計原理對辣椒拮抗內(nèi)生菌菌株X的發(fā)酵條件進行優(yōu)化，以菌株X對三種病原菌的平均抑制率為指標，優(yōu)化出抑制率最大的單因素的組合，為提高拮抗

5、內(nèi)生菌對病原菌的拮抗作用提供一定的基礎(chǔ)。 單因素實驗：選擇6個因素（溫度、pH值、接種量、金屬離子、碳源、氮源）來測定其對辣椒內(nèi)生拮抗菌X對病原菌的影響，選出抑制率最大的單因素組合工藝參數(shù)。其中，對X抑制病原菌的最適溫度為28；最適pH值為7.0；最適接種量為1%；最佳金屬離子、碳源、氮源分別為NaCl、葡萄糖、酵母膏。 響應(yīng)曲面法設(shè)計：運用Minitab 15數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析軟件使用未編碼單位對試驗數(shù)據(jù)進行多元回歸擬合分析，設(shè)接種量、酵母膏、葡萄糖、NaCl，分別記作A、B、C、D，為4個自變量，設(shè)五個試驗水平，分別以-2、-1、0、l、2進行編碼，編碼表采取全因子，共31個實驗的實驗設(shè)計。 金

6、屬離子對X抑制病原菌的影響 不同碳源對X抑制病原菌的影響 不同氮源對X抑制病原菌的影響響應(yīng)曲面法優(yōu)化辣椒拮抗內(nèi)生菌X的發(fā)酵條件的結(jié)果分析 響應(yīng)曲面優(yōu)化辣椒拮抗內(nèi)生菌X的發(fā)酵條件的結(jié)果 為了驗證響應(yīng)曲面法的可靠性，同時考慮到實際操作的可行性，將上述單因素組合工藝條件修正為：接種量為0.80%,酵母膏為0.5%,葡萄糖為2.5%，NaCl為0.13%。 第四章：辣椒拮抗內(nèi)生菌對果蔬采后保鮮作用的研究 辣椒貯藏后的品質(zhì)是衡量其在貯藏保鮮中的可利用價值和營養(yǎng)價值的重要指標。辣椒的貯藏后品質(zhì)主要包括以下指標：可溶性固形物含量、有機酸含量、失重率、Vc含量等。通過這些指標的測定來研究菌株X對辣椒自然腐爛的

7、抑制效果及其對貯藏品質(zhì)的影響。 處理方式：分別配制ll07cell/mL、1108cell/mL以及5108cell/mL的菌株X的菌懸液，命名為A、B和C，以無菌水作為空白對照（CK）。 拮抗菌X的不同處理對人工刺傷接種辣椒黑霉菌的防病效果 拮抗菌X的不同處理對人工刺傷接種辣椒疫病菌的防病效果 拮抗菌X對辣椒自然腐爛的抑制效果 辣椒在貯藏過程中有機酸含量的變化 辣椒在貯藏過程中Vc含量的變化 第五章 全文主要結(jié)論1、對拮抗菌菌株X進行了生理生化測定，并經(jīng)布魯克公司生物質(zhì)譜儀分析，故確定該菌株為解淀粉芽孢桿菌，以辣椒疫霉病菌、辣椒黑霉病菌、辣椒炭疽病菌為病原菌，研究拮抗菌發(fā)酵液的抑制率在34.

8、8048.0之間2、發(fā)現(xiàn)在不同培養(yǎng)條件下，拮抗菌發(fā)酵液抑制率不同，其中一株抗菌性較強的菌X最佳培養(yǎng)基組成為接種量0.80%,酵母膏0.5%，葡萄糖2.5%、NaCl 0.13%、pH 7.0。培養(yǎng)條件為溫度28、轉(zhuǎn)速180 r/min，培養(yǎng)時間48h。在此條件下菌株X對病原菌的抑制率達到最大為73.02%3、該菌在培養(yǎng)基中添加不同的碳源時，葡萄糖抑制率為70.11%，蔗糖、可溶性淀粉、麥芽糖和乳糖的抑制率依次降低4、氮源中酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、NH4ClO和KNO3其抑菌作用依次降低5、不同金屬離抑菌效果不一樣，NaCl 、CaCl2 、KH2PO4 、FeSO4和MnSO4，抑制率依次降低

9、6、開展了新鮮辣椒的采后保鮮及抑菌效果研究，發(fā)現(xiàn)拮抗菌培養(yǎng)液在不同溫度、不同處理方式均有一定保鮮效果。在試驗期內(nèi)浸泡組辣椒的失重率隨貯藏時間的延長均呈上升趨勢，但上升趨勢不同；可溶性固形物的含量隨著時間的延長而下降，從4.06%降到1.31%；而有機酸的含量也呈下降趨勢，3.15mmol/100g降為0.96mmol/100g，Vc含量隨貯藏時間的延長均呈下降趨勢，但下降趨勢不同 創(chuàng)新點1、本文研究了對辣椒疫霉病菌、辣椒黑霉病菌和辣椒炭疽病菌都有較強抑菌作用的內(nèi)生菌菌株X，利用響應(yīng)曲面法試驗設(shè)計對其培養(yǎng)基條件和發(fā)酵條件進行優(yōu)化，顯著提高了其抑菌的能力。2、以消費量大的地方品種辣椒為研究對象，進行內(nèi)生拮抗菌的的高效篩選。研究成果不僅可能發(fā)掘出一個新的具有高效抑菌作用的拮抗內(nèi)生菌株，而且通過后期的研究可以將它作為一個新型的生物防腐保鮮劑代替化學(xué)殺菌劑直接應(yīng)用于果蔬采后保