DB13-T1384-1-2011飼料中4種β-內酰胺類藥物的測定

1、ICS 65.120B 46DB13河北省地方標準DB13/T 1384.12011飼料中 4 種內酰胺類藥物的測定Determination of four kinds of -lactams in feed2011 - 05 - 10 發(fā)布2011 - 05 - 20 實施河北省質量技術監(jiān)督局發(fā) 布DB13/T 1384.12011I前言本標準按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標準由河北省質量技術監(jiān)督局提出。本標準起草單位：河北大學、河北省食品質量監(jiān)督檢驗研究院、河北醫(yī)科大學、北京出入境檢驗檢疫局技術中心、石家莊市疾病預防控制中心、河北省飼料產品質量監(jiān)督檢驗站。本標準主要起草人

2、：張巖、李揮、呂品、叢斌、盧曉宇、張敬軒、沈磊、米振杰、賈茜、張宏、楊立學、李志平、高振同、武英利。 PAGE 6飼料中 4 種內酰胺類藥物的測定范圍本標準規(guī)定了飼料中青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林 4 種-內酰胺類藥物的液相色譜- 串聯(lián)質譜測定方法。本標準適用于飼料中青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林的測定。本標準的方法檢出限：青霉素G、青霉素V為1.0 g/kg；氨芐西林、阿莫西林為2.0 g/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

3、GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。原理試樣中的 4 種 -內酰胺類藥物殘留，用 Oasis HLB 或相當的固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質譜儀測定，外標法定量。試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級水。甲醇：色譜純。乙腈：色譜純。乙酸：優(yōu)級純。乙腈+水（13）：量取 25 mL 乙腈與 75 mL 水混勻。Oasis HLB 固相萃取柱或相當者：500 mg，6 mL。使用前分別用 5 mL 甲醇和 10 mL 水預處理， 保持柱體濕潤。青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林：純度99。青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林標準

4、儲備溶液：準確稱取適量的每種標準物質，分別用乙腈配制成濃度為 1.0 mg/mL 的標準儲備溶液。儲備液貯存在-18冰柜中。青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林標準工作溶液：根據需要吸取適量青霉素 G、青霉素V、氨芐西林、阿莫西林標準儲備溶液，用空白樣品稀釋成適當濃度的基質混合標準工作溶液。儀器液相色譜-串聯(lián)四極桿質譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。漩渦混勻器。固相萃取真空裝置。微量進樣器：25 L，100 L?？潭葮悠饭埽? mL，精度為 0.1 mL。真空泵：真空度應達到 80 kPa。pH 計：測量精度 0.01。氮吹儀。高速離心機。

5、測定步驟試樣溶液的制備稱取 5 g 試樣（精確到 0.01 g）置于 100 mL 離心管中，加人 45 mL 去離子水，于漩渦混勻器上快速混合 5 min，以 5 000 r/min 離心 10 min，將上清液移至 Oasis HLB 柱中，以小于或等于 3 mL/min 的流速通過固相萃取柱后，用 5 mL 水洗柱，棄去全部流出液。在 65 kPa 的負壓下，減壓抽干 20 min，最后用 3 mL 甲醇洗脫，收集洗脫液于刻度樣品管中，于 40水浴中用氮吹儀吹干，用乙腈定容至 1 mL， 搖勻后，供液相色譜-串聯(lián)質譜儀測定。測定液相色譜條件色譜柱：SunFireTM C18 3.5 m，

6、150 mm2.1 mm 或相當者。流動相及流速見表 1。柱溫：30。 進樣量：20 L。表1液相色譜梯度洗脫條件時間/min流速/（L /min）水（含 0.4乙酸）/（）乙腈/（）0.0020060.040. 015.0020035.065. 015.0120060.040. 025.0120060.040. 0質譜條件離子源：電噴霧離子源（ESI）。掃描方式：正離子掃描。檢測方式：多反應監(jiān)測。定性離子對、定量離子對，見表 2。其余質譜條件見附錄 A。表2定性離子對與定量離子對青霉素G青霉素V氨芐西林阿莫西林定性離子對（m/z）335/160335/176351/160351/192350

7、/192350/160366/114366/208定量離子對（m/z）335/160351/160350/160366/208液相色譜串聯(lián)質譜測定定性測定在相同試驗條件下，樣品中待測物質與基質標準溶液中對應物質的保留時間偏差在2.5之內； 樣品色譜圖中各定性離子對相對豐度與濃度接近的基質標準溶液的色譜圖中離子相對豐度相比，若偏差不超過表 3 規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在該殘留。表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度502050102010允許的最大偏差20253050定量測定在儀器最佳工作條件下，用青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林標準儲備溶液配成的基質混合標準溶液分

8、別進樣，以標準工作溶液濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線。用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林的響應值均應在儀器測定的線性范圍內。在上述色譜條件下，青霉素 G、青霉素 V、氨芐西林、阿莫西林的總離子流圖與保留時間見附錄 B。平行試驗按上述步驟，對同一試樣進行平行試驗測定?？瞻自囼灣环Q取試樣外均按上述分析步驟進行。結果計算從標準工作曲線上得到試樣中相應的 -內酰胺類藥物濃度后，結果按公式(1)計算：c V 1000式中：X m 1000（1）X試樣中被測組分殘留量，單位為微克每千克（g/kg）。c從標準工作曲線得到的試樣溶液中被測組分

9、的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）。 V試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）。m最終試樣溶液所代表的試樣質量，單位為克（g）。注：計算結果需將空白值扣除。精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15。附錄A（資料性附錄） 參考質譜條件A.1電噴霧電壓：5 500 V。A.霧化氣壓力：0.055 MPa。A.氣簾氣壓力：0.079 MPa。A.輔助氣流速：6 L/min。A.離子源溫度：400。A.去簇電壓（DP），聚焦電壓（FP）、碰撞能量（CE）及碰撞室出口電壓（CXP），見表A.1。表A.1去簇電壓，聚焦電壓、碰撞能量及碰撞室出口電壓名稱定性離子對（m/z）定量離子對（m/z）碰撞能量v去簇電壓v聚焦電壓v碰撞室出口電壓/v青霉素G335/160335/176335/16020234520011青霉素V351/160351/192351/16020154020011氨芐西林350/192350