呼腸孤病毒與鏈球菌混合感染雛鴨的病理學(xué)研究

1、 呼腸孤病毒與鏈球菌混合感染雛鴨的病理學(xué)研究 李美霞+楊軍+艾博+谷長(zhǎng)勤+劉曉麗+張萬(wàn)坡+程國(guó)富+胡薛英Summary：以攜帶有鴨源呼腸孤病毒（）的日齡雛鴨為試驗(yàn)動(dòng)物，人工感染解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種（S. gallolyticus subsp. pasteurianus）菌株，旨在建立混合感染的病理模型。采用病理學(xué)研究手段，觀察感染雛鴨的臨床癥狀、病理變化及組織學(xué)病理變化。研究結(jié)果表明，雛鴨于感染后 出現(xiàn)死亡，感染后 表現(xiàn)出典型臨床癥狀，死亡率為；剖檢病理變化主要表現(xiàn)為脾臟表面灰白色壞死灶，質(zhì)地堅(jiān)實(shí)，心包膜炎和肝包膜炎，腦膜充血嚴(yán)重；組織學(xué)病理變化主要表現(xiàn)為脾組織壞死、包囊的形成、心肌炎、腦

2、膜炎等。Key：解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種（ ）；鴨源呼腸孤病毒（）；混合感染；病理學(xué)研究：（）1848 ies ed p ， ， ， ， ， ， ， （ ， ， ）： （） （） ， with of occurred ， ， ， ， ： ； ； ； 解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種（S. gallolyticus subsp. pasteurianus）又被稱為牛鏈球菌/21，可以感染人也可以感染多種動(dòng)物，感染人主要是引起新生兒的腦膜炎和菌血癥及成年人的腦膜炎2-6；感染動(dòng)物如禽類(lèi)，已報(bào)道的有鴿子、火雞、鵝、鴨，主要是引起多器官的損傷及敗血癥7-10。AL101002菌株是2010年華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)

3、學(xué)院獸醫(yī)病理實(shí)驗(yàn)室從發(fā)病雛鴨的腦和脾分離并鑒定的一株高致病性菌株10。2006年以來(lái)湖北省周邊地區(qū)的部分鴨場(chǎng)相繼出現(xiàn)一種新的傳染性疾病，剖檢以肝臟和脾臟的壞死為主要特點(diǎn)，且該實(shí)驗(yàn)室已從發(fā)病雛鴨的脾臟成功分離并鑒定了多株呼腸孤病毒11；與此同時(shí)北京市周邊地區(qū)多個(gè)鴨場(chǎng)也出現(xiàn)了一種新的傳染性疾病，2010年有學(xué)者首次從北京鴨壞死的脾臟分離并鑒定了一株高致病性呼腸孤病毒，命名為DRV-HC12。鑒于目前臨床鴨發(fā)病已不僅僅因某一種病毒或細(xì)菌感染發(fā)病，常常是混合感染，或是某種病原微生物感染之后的繼發(fā)感染。因此本研究建立了解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種AL101002和鴨源呼腸孤病毒DRV的混合感染模型，以期為臨

4、床發(fā)病雛鴨的診斷及確診提供可靠的理論依據(jù)。1材料與方法1.1試驗(yàn)菌種及復(fù)蘇解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種AL101002由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院獸醫(yī)病理實(shí)驗(yàn)室分離鑒定并保存13。取凍干菌種在無(wú)菌超凈臺(tái)里接種于TSA血清平板上，37 恒溫培養(yǎng)24 h，從優(yōu)勢(shì)菌落中挑取單菌落于10 mL TSB培養(yǎng)基中，37 200 r/min振蕩培養(yǎng)12 h至菌液渾濁。1.2試驗(yàn)動(dòng)物分組及處理1日齡雛鴨15羽購(gòu)于武漢市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，籠養(yǎng)自由采食和飲水，飼養(yǎng)至7日齡后采用頸部皮下接種TSB細(xì)菌培養(yǎng)液，0.2 mL/羽，對(duì)照組頸部皮下接種TSB培養(yǎng)基0.2 mL/羽。于感染后第5天剖殺3羽，感染后14 d所有雛鴨全

5、部剖殺，處死方式采用頸靜脈放血處死。1.3病毒學(xué)檢測(cè)隨機(jī)取1日齡雛鴨5羽，頸靜脈放血處死，取脾臟做鴨源呼腸孤病毒的檢測(cè)。特異性引物參照楊旭13畢業(yè)論文，目的片段大小為282 bp。1.4臨床癥狀觀察觀察雛鴨的臨床癥狀，記錄雛鴨的食欲及精神狀態(tài)變化。1.5剖檢病變觀察與細(xì)菌學(xué)檢查觀察并記錄雛鴨的剖檢病理變化；感染5 d后取剖殺雛鴨的脾臟和心血在無(wú)菌條件下用TSA血清平板進(jìn)行細(xì)菌分離，37 恒溫培養(yǎng)16 h，觀察菌落形態(tài)，按照常規(guī)方法進(jìn)行革蘭氏染色。1.6組織學(xué)病理變化觀察分別取心、肝、脾、肺、腎、胸腺、法氏囊、腦組織用10%的福爾馬林充分固定，常規(guī)石蠟切片，切片厚4 m，HE染色，顯微鏡下觀察組

6、織病理學(xué)變化。 2結(jié)果與分析2.1病毒學(xué)檢測(cè)結(jié)果鴨源呼腸孤病毒的PCR檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，說(shuō)明此次購(gòu)買(mǎi)的雛鴨本身攜帶有鴨源呼腸孤病毒。2.2臨床癥狀雛鴨于感染1 d后開(kāi)始出現(xiàn)死亡，鴨群整體精神狀態(tài)很差，感染3 d后表現(xiàn)出典型的臨床癥狀：站立不穩(wěn)、眼睛流淚、縮頸（圖1-A），瀕死鴨頭頸震顫，出現(xiàn)典型的神經(jīng)癥狀。感染7 d后停止死亡，共死亡5羽，死亡率為50%。2.3剖檢病變觀察死亡雛鴨剖檢病變表現(xiàn)為：脾臟極度腫大，表面有灰白色的壞死灶，質(zhì)地較硬（圖1-B），肝臟表面有細(xì)小的出血點(diǎn)（圖1-C），心包積液，心包膜增厚，肺和腎淤血，腦膜充血，胰腺出血，法氏囊萎縮。感染后5 d，隨機(jī)取3羽雛鴨，頸靜脈放血

7、致死，剖檢病變可見(jiàn)心包積液、脾臟腫大，表面有小的白色壞死灶，質(zhì)地堅(jiān)實(shí)。耐過(guò)雛鴨剖檢可見(jiàn)心內(nèi)膜出血，嚴(yán)重的纖維素性心包膜炎（圖1-D）。2.4組織學(xué)病理變化觀察脾臟組織結(jié)構(gòu)消失，壞死包囊的形成（圖2-A）；肝細(xì)胞脂肪變性嚴(yán)重，肝血管單核細(xì)胞及肝竇內(nèi)可見(jiàn)大量細(xì)菌團(tuán)塊（圖2-B），肝細(xì)胞壞死；心肌纖維間有大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；大腦可見(jiàn)腦膜炎、小膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)節(jié)、噬神經(jīng)元現(xiàn)象（圖2-C）；小腦軟腦膜增厚，炎性細(xì)胞滲出，血管內(nèi)可見(jiàn)細(xì)菌栓塞，浦肯野細(xì)胞嗜酸性增強(qiáng)（圖2-D）；肺淤血，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管內(nèi)可見(jiàn)細(xì)菌團(tuán)塊；腎小球細(xì)菌栓塞，腎小管上皮細(xì)胞壞死，異嗜性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。討論鴨源呼腸孤病毒主要引起雛鴨的肝脾壞

8、死，進(jìn)而引起免疫抑制，表現(xiàn)為對(duì)中樞免疫器官和外周免疫器官的直接損傷，從而導(dǎo)致雛鴨機(jī)體的免疫力下降，但死亡率不高。解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種主要引起雛鴨多臟器的炎癥和敗血癥，且死亡率較高。人工接種高毒力株解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種后，雛鴨的死亡率顯著升高，顯然當(dāng)雛鴨的免疫器官受到損傷時(shí)，解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種可以乘機(jī)侵入血液，導(dǎo)致多器官損傷及敗血癥，尤其是較單獨(dú)感染時(shí)腦組織的損傷更為嚴(yán)重。根據(jù)該實(shí)驗(yàn)室之前對(duì)解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞的研究結(jié)果可知，其本身對(duì)免疫器官的損傷也比較嚴(yán)重，尤其是對(duì)脾臟和法氏囊的損傷，但筆者并沒(méi)有在腦血管周發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌團(tuán)塊及小腦浦肯野細(xì)胞的嗜酸性增強(qiáng)，因此，攜帶有鴨源呼腸孤病毒的

9、雛鴨在感染解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種后，更有助于細(xì)菌侵入機(jī)體，逃避宿主的免疫機(jī)制，近而在機(jī)體內(nèi)大量增殖，對(duì)雛鴨各器官造成更加嚴(yán)重的病理?yè)p傷。Reference： ， ， - （） ： J S E M，（）： ， ， ， （ ）： C M，（）： ， ， ， ， ， （）： ， ， ， ，（）： ， ， ， C M，（）： ， ， ， （ ）， C M， ， （）： ， ， ， ， ， （）： ， ， ， ， ， （）： ， ， ， ， ， （）： ， ， ， ， ， （）： 張寶來(lái)鴨源呼腸孤病毒的分離和鑒定武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)， ， ， ， M，（）： 楊旭鴨源呼腸孤病毒熒光定量方法的建立與應(yīng)用武

10、漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)， 李爽鴨源禽呼腸孤病毒感染雛鴨的免疫病理學(xué)研究武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，討論鴨源呼腸孤病毒主要引起雛鴨的肝脾壞死，進(jìn)而引起免疫抑制，表現(xiàn)為對(duì)中樞免疫器官和外周免疫器官的直接損傷，從而導(dǎo)致雛鴨機(jī)體的免疫力下降，但死亡率不高。解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種主要引起雛鴨多臟器的炎癥和敗血癥，且死亡率較高。人工接種高毒力株解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種后，雛鴨的死亡率顯著升高，顯然當(dāng)雛鴨的免疫器官受到損傷時(shí)，解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種可以乘機(jī)侵入血液，導(dǎo)致多器官損傷及敗血癥，尤其是較單獨(dú)感染時(shí)腦組織的損傷更為嚴(yán)重。根據(jù)該實(shí)驗(yàn)室之前對(duì)解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞的研究結(jié)果可知，其本身對(duì)免疫器官的損傷也比較嚴(yán)重，

11、尤其是對(duì)脾臟和法氏囊的損傷，但筆者并沒(méi)有在腦血管周發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌團(tuán)塊及小腦浦肯野細(xì)胞的嗜酸性增強(qiáng)，因此，攜帶有鴨源呼腸孤病毒的雛鴨在感染解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種后，更有助于細(xì)菌侵入機(jī)體，逃避宿主的免疫機(jī)制，近而在機(jī)體內(nèi)大量增殖，對(duì)雛鴨各器官造成更加嚴(yán)重的病理?yè)p傷。Reference： ， ， - （） ： J S E M，（）： ， ， ， （ ）： C M，（）： ， ， ， ， ， （）： ， ， ， ，（）： ， ， ， C M，（）： ， ， ， （ ）， C M， ， （）： ， ， ， ， ， （）： ， ， ， ， ， （）： ， ， ， ， ， （）： ， ， ， ， ， （）：

12、張寶來(lái)鴨源呼腸孤病毒的分離和鑒定武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)， ， ， ， M，（）： 楊旭鴨源呼腸孤病毒熒光定量方法的建立與應(yīng)用武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)， 李爽鴨源禽呼腸孤病毒感染雛鴨的免疫病理學(xué)研究武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，討論鴨源呼腸孤病毒主要引起雛鴨的肝脾壞死，進(jìn)而引起免疫抑制，表現(xiàn)為對(duì)中樞免疫器官和外周免疫器官的直接損傷，從而導(dǎo)致雛鴨機(jī)體的免疫力下降，但死亡率不高。解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種主要引起雛鴨多臟器的炎癥和敗血癥，且死亡率較高。人工接種高毒力株解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種后，雛鴨的死亡率顯著升高，顯然當(dāng)雛鴨的免疫器官受到損傷時(shí)，解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種可以乘機(jī)侵入血液，導(dǎo)致多器官損傷及敗血癥，尤其是較單獨(dú)感染時(shí)腦組織的損傷更為嚴(yán)重。根據(jù)該實(shí)驗(yàn)室之前對(duì)解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞的研究結(jié)果可知，其本身對(duì)免疫器官的損傷也比較嚴(yán)重，尤其是對(duì)脾臟和法氏囊的損傷，但筆者并沒(méi)有在腦血管周發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌團(tuán)塊及小腦浦肯野細(xì)胞的嗜酸性增強(qiáng)，因此，攜帶有鴨源呼腸孤病毒的雛鴨在感染解沒(méi)食子酸鏈球菌巴氏亞種后，更有助于細(xì)菌侵入機(jī)體，逃避宿主的免疫機(jī)制，近而在機(jī)體內(nèi)大量增殖，對(duì)雛鴨各器官造成更加嚴(yán)重的病理?yè)p傷。Reference： ， ， - （） ： J S E M，（）： ， ， ， （ ）： C M，（）： ， ， ， ， ， （）： ， ， ， ，（）