腎小球腎炎動物模型研究概述

1、腎小球腎炎動物模型研究概述【摘要】慢性腎小球腎炎hrniglerulnephritis的發(fā)病機制有多種，設(shè)計模型時都是針對某一發(fā)病機制，使動物出現(xiàn)類似人類腎炎的情況而建模。本文對腎小球腎炎動物模型的造模機制、造模方法等方面進展了歸納和總結(jié)，簡要說明其中存在的問題?！娟P(guān)鍵詞】腎小球腎炎；動物模型；造模機制；造模方法腎小球腎炎是由多種病理類型的原發(fā)性腎小球疾病開展而來的，以血尿、蛋白尿、高血壓和水腫為主要臨床表現(xiàn)的慢性疾玻目前認為腎小球腎炎是一種自身免疫反響性疾病，通過免疫作用而造成腎臟損害。1Heyann腎炎模型本模型是通過針對自身抗原的免疫復(fù)合物I誘發(fā)而成，故稱其為自身免疫復(fù)合物性腎炎autl

2、gusiuneplex，AI。Heyann腎炎模型根據(jù)是否由同種動物提供抗體分為主動型和被動型兩種模型。主動型Heyann腎炎模型機制:動物由自體抗腎抗體或自體抗原抗體復(fù)合物刺激引起腎小球基膜產(chǎn)生免疫反響形成腎炎。被動型Heyann腎炎模型機制：用甲種動物的腎皮質(zhì)勻漿免疫乙種動物,使后者產(chǎn)生抗甲種動物的抗腎血清抗腎抗體,然后將這種抗腎血清注射給安康的甲種動物,而使其產(chǎn)生腎炎。主動型Heyann腎炎，孫永寧1用大鼠腎皮質(zhì)勻漿加弗氏完全佐劑制備乳化液,同種大鼠腹腔注射次乳化液，2l/只，每周注射1次，共注射7次?，F(xiàn)研究常用模型為被動型Heyann腎炎模型。其詳細造模方法2為大鼠后足墊注射含6.5g

3、免疫球蛋白的完全弗氏佐劑0.25l后，由大鼠尾靜脈注射1.0l兔抗FXIA抗血清，qd，共2天，造模完成。這一實驗?zāi)Ｐ团c人類原發(fā)性膜性腎病非常相似，其特征為彌漫性基膜增厚伴釘突形成。2原位免疫復(fù)合物性腎炎模型該模型的特點是在腎小球基膜上直接形成免疫復(fù)合物。由細菌感染合并異種免疫蛋白結(jié)合作用造成模型。楊宏等3制作家兔原位免疫復(fù)合物腎小球腎炎模型:將大腸桿菌毒素和陽離子化牛血清白蛋白BSA溶于0.15l/L、pH值為7.2的磷酸緩沖液PBS溶液中,最終濃度為每1l溶液中含1g大腸桿菌毒素和1g牛血清白蛋白,每只兔經(jīng)耳緣靜脈注射2l預(yù)免疫,7天后開場正式免疫造模:每只免疫兔每天經(jīng)耳緣靜脈給予陽離子化

4、牛血清白蛋白20g預(yù)先溶于PBS溶液中,共7周。腎臟組織學(xué)檢查顯膜性腎小球腎炎的典型病變，故一般認為，膜性腎炎病理模型是原位免疫復(fù)合物性腎炎模型的典型病理代表。3馬杉腎炎此模型4又稱asugi腎炎、腎毒血清性腎炎、大鼠抗腎小球基膜GB腎炎。其根本原理5是以A種動物的腎小球基膜作為抗原，與完全佐劑一起注射到B種動物身上，使之產(chǎn)生抗A種動物的腎小球基膜抗體，將含有此種抗體的B種動物血清給A種動物靜脈注射，A種動物經(jīng)過一定的埋伏期之后尿中出現(xiàn)明顯蛋白，伴腎小球增生，終至新月體形成與完全纖維化改變，是利用異體抗GB抗體直接誘導(dǎo)后產(chǎn)生的具有典型的人類新月體性腎炎病理變化的動物模型6。畢柳等7報道,英國K

5、azuhir等用牛腎小球基膜免疫istar大鼠造成實驗性自身免疫抗腎小球基膜腎小球腎炎。伍小波等8用鼠腎皮質(zhì)勻漿每周3次，每次10l免疫大耳白兔，在最后加強免疫后第11天，從兔耳緣靜脈采血測效價，利用雙向瓊脂擴散法測定兔抗大鼠GB-Ab的效價為116,收獲血清-30保存?zhèn)溆?。正常兔IgG加等量完全弗氏佐劑皮下注射SD大鼠進展預(yù)免疫,預(yù)免疫后第7天和第8天后從大鼠尾靜脈注射稀釋一倍兔血清，劑量1l/只，連續(xù)兩天為致病免疫。本模型的優(yōu)點9是造模簡單、陽性率高、重復(fù)性好，常被用于多發(fā)性腎炎的研究。缺點是病情反響較重，易導(dǎo)致局部動物中途死亡，同時在人的腎炎中，與這種模型相似的發(fā)病機制的病例很少，僅限肺

6、出血-腎炎綜合征Gdpasture綜合征。4系膜增殖性腎炎sPGN模型機制有以下兩種，由細菌感染合并異種免疫蛋白結(jié)合作用造成模型及單純異種免疫蛋白造成模型。朱聲永等10復(fù)制家兔膜增殖型腎炎模型按北京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎炎研究室介紹的方法復(fù)制,預(yù)免疫:每只家兔背部皮下注射牛血清白蛋白1g,每周1次,連續(xù)3次。第4周時每只家兔耳緣靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素1g,共1次。正式免疫:第3周開場每只家兔耳緣靜脈注射牛血清白蛋白25g,每日1次,每周6次,共6周,并于最后1周中血清白蛋白劑量加倍注射。按照吳衡生法11制備兔模型，每只兔第1天從耳靜脈一次性注射牛血清白蛋白250g/kg。第4周分別從兔耳靜脈抽

7、血做各項檢查。第8周后處死動物，做腎臟病理檢查，此病理改變與人類sPGN極相似。由于兔模型費用昂貴，石志超等12制備大鼠血清白蛋白模型，即每只大鼠尾靜脈注射1g/kg結(jié)晶性小牛血清白蛋白，7天造模成功。目前,國際上普遍采用抗Thy-1抗體誘導(dǎo)的腎炎模型研究人類系膜增殖性腎小球腎炎的發(fā)病機制?！翱筎hy-1抗體腎炎模型可用抗Thy-1多克隆抗體或抗Thy-1單克隆抗體nlnalantibdy,Ab經(jīng)靜脈注射大鼠而建立。如蔣文功等13對單克隆抗體X-7誘導(dǎo)的系膜增殖性腎小球腎炎大鼠模型的研究，經(jīng)大鼠尾靜脈單獨注射單克隆抗體X-71g/kg,第7天模型制作成功?？筎hy-1單抗引起的腎病可能于1周后

8、緩解，故馮媛等14用單側(cè)腎切除后3天按5g/kg體重靜脈注射磷酸鹽緩沖溶液溶解的Thy-1單抗1-22-3法造模。單純性sPGN模型制作方法簡便易行，且病變穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好，因此越來越受到人們的重視。5血清病腎炎模型它是一種經(jīng)典的免疫復(fù)合物腎病模型，包括急性血清病腎炎和慢性血清病腎炎兩類：急性模型由一次性大劑量注入牛血清白蛋白抗原，使動物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗BSA抗體，并和循環(huán)中剩余的抗原結(jié)合，形成循環(huán)免疫復(fù)合物I滯留于腎臟。丁秋蘭等15按Dixn方法首先將牛血清白蛋白用生理鹽水溶解。按250g/l劑量1次家兔耳靜脈注射，即成功制作急性兔腎毒血清性實驗?zāi)Ｐ?。慢性模型由屢次注入牛血清白蛋白每?次

9、，使動物體內(nèi)抗原持續(xù)對免疫系統(tǒng)形成刺激，隨著血清中抗BSA抗體的增多，可溶性I在循環(huán)中出現(xiàn)，分別沉積在腎小球毛細血管壁或系膜區(qū)，形成腎小球腎炎。楊解人等16選用新西蘭大耳白兔,耳緣靜脈注射-BSA10g,1次/d,共5周,第6周劑量加倍的方法成功制作家兔-BSA腎炎模型。由于慢性血清病腎炎復(fù)制周期長、陽性率低，而急性血清病腎炎較慢性血清病腎炎模型方便省時且抗原消耗少，因此得到更為廣泛的應(yīng)用。6氨基核苷腎病模型此模型又名嘌呤霉素腎病，屬于腎毒性藥物導(dǎo)致腎損傷造成的腎炎模型?，F(xiàn)常用17，18注射鹽酸阿霉素ADR、氯化汞、灌服碳酸鋰等制造模型。彭蘊茹等19用鹽酸阿霉素復(fù)制模型，大鼠一次性尾靜脈注射鹽

10、酸阿霉素7.5g/kg，于第10天獲得滿意造模效果。7其他腎炎模型如IgA腎病模型、局灶性節(jié)段性腎小球硬化模型、狼瘡性腎炎模型等。20世紀70年代末Rifai等用牛血清白蛋白BSA作為載體交聯(lián)二硝基苯酚DNP6；20世紀80年代初Isaas等用帶不同電荷的右旋糖酐經(jīng)腹腔靜脈注射，結(jié)果均誘發(fā)小鼠IgA腎玻劉志紅等20每周一次，連續(xù)3周給大鼠靜脈注射葡萄球菌腸毒素BSEB0.4g/kg成功地復(fù)制出IgA腎病模型。局灶性節(jié)段性腎小球硬化模型嘌呤霉素一側(cè)腎切除嘌呤霉素法，或5/6腎切除等。狼瘡性腎炎模型包括自發(fā)性腎炎小鼠模型及慢性移植物抗宿主病模型。這些腎炎模型由于臨床病理類型的發(fā)病較少見或模型制作的

11、繁瑣復(fù)雜性而應(yīng)用較少。綜上所述,腎小球腎炎動物模型的研究已經(jīng)越來越細致和深化。其中馬杉腎小球腎炎模型因與人的發(fā)病機制相近，研究相對成熟和完善；而嘌呤霉素腎病腎小球腎炎模型的研究相對復(fù)雜和不易操作；陽離子牛血清白蛋白引起的腎炎模型的研究以其簡便、高效與病理相似性而被廣泛應(yīng)用。另外，腎炎模型近十余年無新的研究進展，只是對原有模型的復(fù)制，如何找出既省時又經(jīng)濟的模型更有利于腎炎機制的闡述，也成為實驗研究的迫切問題?！緟⒖嘉墨I】1孫永寧.慢腎康膠囊治療實驗大鼠HN腎炎主要藥效學(xué)研究.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2001,243:40-43.2NagaT,NagaatsuT,SuzukiI.EffetfDP1904

12、,athrbxaneAsynthaseinhibitr,npassiveHeyannnephritisinrats.EnrJphardel,1996,3161:73-80.3楊宏,朱明德,黃佩文,等.中藥白鶴粉治療腎小球腎炎的實驗研究.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2000,232:42-45.4王海燕.腎臟病學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，1996，532.5張家瑋.中醫(yī)藥治療腎小球腎炎的實驗研究進展.國醫(yī)論壇，2000，151：52.6朱起芝，杜學(xué)海.腎炎的動物實驗?zāi)Ｐ?國外醫(yī)學(xué):內(nèi)科學(xué)分冊，1980，71：11-16.7畢柳,王文余.TLA24鑲和蛋白對大鼠自身免疫腎小球腎炎的作用.國外醫(yī)學(xué)：免疫學(xué)分冊

13、,1995,83:163.8伍小波，羅先欽，徐嘉紅.昆明山海棠治療大鼠腎毒血清性腎炎的實驗研究.西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2022,284:636-639.9戴春筍，劉志紅，陳惠萍，等.大黃素與雷公藤內(nèi)酯醇結(jié)合治療大鼠抗腎小球基膜腎炎的實驗研究.腎臟病與透析腎移植雜志，2000，92：117-123.10朱聲永,劉玉寧,杜寶榮,等.腎炎育陰片對家兔系膜增殖型腎炎免疫功能影響的實驗研究.河南中醫(yī)藥學(xué)刊,2000,155:23-24.11吳衡生，王宏偉，劉銅林，等.穿心蓮成分API134對系膜增殖性腎炎家兔一氧化氮、內(nèi)皮素的影響.同濟醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2000，295：384.12石志超，王欣榮，張奎軍.益氣化瘀湯對大鼠慢性腎炎的實驗研究.實用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2022，192:105-106.13蔣文功,李幼姬.骨碎補類黃酮對系膜增殖性腎小球腎炎大鼠模型的抑制作用.中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2022，78：382-385.14馮媛，劉敏，吳義超，等.BAY41-2272防治大鼠Thy-1腎炎的實驗研究.現(xiàn)代生物學(xué)進展，2022，711：1615-1618.15丁秋蘭，劉萍，畢柳，等.環(huán)胞霉素A加輸新穎血清治療免疫復(fù)合物型腎小球腎炎.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1996,630：552-553.16楊解人,丁伯平,陳國祥,等.腎康寧對家兔-BSA腎炎模型治療作用研究.中國實驗方劑學(xué)雜志,2000,66