食品安全檢測技術(shù)

1、精品文檔第一章樣品的前處理技術(shù)超臨界流體萃取的定義： 用超臨界流體作為溶劑，用來有選擇性地溶解液體或固體混合物中溶質(zhì)的分離技術(shù)稱為超臨界流體萃取。超臨界流體的性質(zhì)： （ 1）超臨界流體的傳遞性質(zhì)超臨界流體的密度與液體接近； 粘度與普通氣體接近； 自擴散系數(shù)也遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于一般液體。 因此，與一般溶劑相比，在超臨界流體中，可更快進(jìn)行傳質(zhì)，短時間內(nèi)達(dá)到平衡，從而高效地進(jìn)行分離。甚至可以簡化固體粉末的預(yù)處理。（ 2）超臨界流體的溶解性能超臨界流體的密度接近液體超臨界流體的密度接近液體，超臨界流體對液體、固體的溶解度也與液體接近。超臨界流體溶解能力與壓力、溫度及是否加入提攜劑有關(guān)。提攜劑的作用提攜劑也稱共溶

2、劑、修飾劑、改進(jìn)劑, 是一種加入超臨界流體系統(tǒng)中的少量溶劑, 它的加入能明顯改變超臨界流體系統(tǒng)的相行為 , 可增加溶解度；可降低操作壓力或減少流體的用量P11P12PT2222P2PP1T21 T1212T1 T332T4T1 5434(a) 等溫法(b) 等壓法(c) 吸附法T1=T2P1P21 2P1=P2T1=T2 P1=P2TT共溶劑的作用 : 提高溶解度 ; 增加萃取1萃取槽2膨脹閥2加熱器萃取槽吸收劑1萃取槽123分離槽4壓縮機5冷卻器分離槽過程的分離因素；提高溶解度對溫度或壓力的4敏感性。其作用機理可能是分子間的范德華力或形成氫鍵。4. 超臨界萃取典型流程 ：超臨界流體萃取過程基

3、本上由萃取階段 和分離階段 組成，右上圖就是三種典型的流程。固相萃取的原理固相萃取 (Solid Phase Extraction，簡稱 SPE) ，也稱固相提取，是一項結(jié)合了選擇性保留、選擇性洗脫等過程的分離技術(shù)。當(dāng)復(fù)雜的樣品溶液通過吸附劑時，吸附劑會通過作用力選擇性地保留目標(biāo)化合物或者干擾物，其他組分則透過吸附劑流出小柱，然后用另一種洗脫能力較強的溶劑體系選擇性地把目標(biāo)物洗脫下來，從而實現(xiàn)對復(fù)雜樣品的分離、純化和富集。6.固相萃取的作用：凈化：去除干擾物，優(yōu)化色譜圖，增加定量準(zhǔn)確性富集 ：濃縮樣品增加靈敏度轉(zhuǎn)換溶劑： 適合色譜分析保護(hù)色譜柱不受污染, 延長使用壽命固相萃取的操作程序： （活

4、化、上樣、洗滌、洗脫）1）活化吸附劑 ：萃取之前要用適當(dāng)?shù)娜軇┝芟葱≈允刮絼┍３譂駶?，可以吸附目?biāo)化合物或干擾化合物。2）上樣（吸附）：倒入活化后的固相萃取小柱，然后利用抽真空，加壓或離心的方法使樣品進(jìn)入吸附劑。3）洗滌（去除雜質(zhì)） ：在樣品進(jìn)入吸附劑，目標(biāo)化合物被吸附后，可先用較弱的溶劑將弱保留干擾化合物洗掉4）洗脫（ 洗脫并收集目標(biāo)物質(zhì) ）3、固相微萃取的原理（數(shù)學(xué)表達(dá)式） ， SPME的特點（集取樣、萃取、富集、進(jìn)樣于一身） ；提高固相微萃取萃取效率的方法固相微萃取的原理（數(shù)學(xué)表達(dá)式）對于一個單組分的單相體系, 當(dāng)被分析有機物在萃取頭與萃取體系之間達(dá)到平衡時, 分析物與萃取頭之間有

5、一分配系數(shù)K, 該分配系數(shù)與分.精品文檔析物在萃取體系中的量有如下關(guān)系: （右圖所示）式中 :N 為吸附于萃取頭上分析物的量;C0為萃取前分析物在樣品中的濃度;K為分析物在萃取頭和樣品間的分配系數(shù);Cs為分析物在萃取后樣品中的濃度;Cf為分析物在萃取頭中的濃度;Vf為萃取頭的體積;Vs為樣品的體積?？梢钥闯?, 體系中的 K 及 Vf值是影響方法靈敏度的重要因素。9. SPME 的特點（ 1）SPME 的特點 是集取樣、萃取、富集、進(jìn)樣于一身。（ 2）SPME易于操作 , 是試樣與固相涂層直接作用, 幾乎不消耗溶劑, 降低了成本 , 保護(hù)了環(huán)境。 SPME 的速度取決于分析物分配平衡所需的時間

6、, 一般在 2 30 min 內(nèi)即可達(dá)到平衡。該技術(shù)適用于微量或痕量組分的富集。（ 3）SPME是一種基于氣固吸附( 吸收 )和液固吸附 ( 吸收 )平衡的富集方法, 利用分析物對活性固體表面( 熔融石英纖維表面的涂層)有一定的吸附( 吸收 )親合力而達(dá)到被分離富集的目的。（ 4）SPME技術(shù)是根據(jù)有機物與溶劑之間的“相似者相溶” 的原則 , 利用石英纖維表面的色譜固定相或吸附劑對分析組分的吸附作用, 將組分從試樣基質(zhì)中萃取出來, 并逐漸富集 , 完成此試樣前處理過程1 在進(jìn)樣過程中,利用氣相色譜進(jìn)樣口的高溫將吸附的組分從固定相中解吸下來, 由色譜儀進(jìn)行分析。提高固相微萃取萃取效率的方法萃取過

7、程中不可避免地出現(xiàn)由于萃取涂層體積遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于樣品體積而在競爭吸附中造成萃取靈敏度低的問題。針對這種情況，可以采用下列幾種方法解決：（ 1）加熱樣品提高待測物質(zhì)的揮發(fā)度，加快傳質(zhì)速率。這時需要注意的一個問題是, 由于溫度的升高，會使待測物在頂空與涂層間的分配系數(shù)下降，導(dǎo)致涂層吸附能力降低。所以，在實際操作中應(yīng)選擇一個最佳萃取溫度或在加熱樣品的同時將萃取纖維用干冰冷卻保護(hù)起來。減少頂空體積和不斷攪拌樣品也有利于提高萃取效率。對于土壤樣品，在加熱的同時還可以加入少量水或表面活性劑來作調(diào)節(jié)劑，以提高萃取效果。例如，在高溫下涂層吸附含水10的土壤樣品中的待測物要顯著高于不含水的樣品。（ 2）增加涂層的厚度

8、是提高吸附量、降低檢測限的另一途徑。而且不同涂層厚度適用的對象也不同。通常，涂層薄的石英纖維適合于萃取分子量大的化合物，而涂層厚的則適宜于易揮發(fā)和分子量小的化合物。3）衍生化 ：對于強極性待測物還發(fā)展了現(xiàn)場衍生化的方法，通過衍生反應(yīng)來降低待測物的極性，使得易于分析。目前普遍使用的有兩種衍生化方法先將衍生試劑加入待測樣品中進(jìn)行衍生化反應(yīng)后再進(jìn)行SPME處理；先將萃取纖維浸入衍生試劑中，待涂層中吸附了一定量的衍生試劑后進(jìn)行 SPME處理，這時在纖維涂層上萃取過程和衍生化反應(yīng)同時進(jìn)行。為了提高高分子涂層對有機物的萃取能力，可以通過在水樣中加入鹽類（NaCl 、Na2SO4）調(diào)節(jié)樣品離子強度達(dá)到這一目

9、的。由于非離子涂層只能有效萃取中性物質(zhì)，所以，某些時候為了防止待測物質(zhì)的離子化，還需要調(diào)節(jié)溶液的 pH值。在實際操作中，應(yīng)根據(jù)所處理樣品的不同而靈活選用各種方法。微波加熱的原理微波被加熱的介質(zhì)是由許多一端帶正電、另一端帶負(fù)電的分子( 稱為偶極子 ) 所組成。偶極子的擺動。電場迅速交替，偶極子的取向也隨之改變，偶極子作迅速的擺動。摩擦生熱。由于分子的熱運動和相鄰分子間的相互作用， 使偶極子的擺動受到阻礙， 產(chǎn)生摩擦并產(chǎn)熱。(3) 產(chǎn)生呈瞬間集中的熱量。超高頻交替變換的電場（微波頻率為915MHz和 2450MHz，1s 內(nèi)有 9.15 次或 2.45 109 次的電場變化）引起分子頻繁的擺動，其

10、摩擦產(chǎn)生呈瞬間集中的熱量，從而能迅速提高介質(zhì)的溫度。.精品文檔微波萃取與傳統(tǒng)加熱方式的差異傳統(tǒng)的熱萃取是以熱傳導(dǎo)、熱輻射等方式由外向里進(jìn)行；而微波萃取是通過偶極子旋轉(zhuǎn)和離子傳導(dǎo)兩種方式里外同時加熱。微波萃取的機理及影響因素機理：（ 1） 一方面微波輻射過程是高頻電磁波穿透萃取介質(zhì)，到達(dá)物料的內(nèi)部維管束和腺胞系統(tǒng)。由于吸收微波能，腺胞內(nèi)溫度迅速上升，使其細(xì)胞內(nèi)部壓力超過細(xì)胞壁膨脹承受能力，細(xì)胞破裂。細(xì)胞內(nèi)有效成分自由流出，在較低的溫度條件下萃取介質(zhì)捕獲并溶解。通過進(jìn)一步的過濾和分離，便獲得萃取物料。（2）另一方面，微波所產(chǎn)生的電磁場加速被萃取部分成分向萃取溶劑界面擴散速率，用水作溶劑時，在微波場

11、下，水分子高速轉(zhuǎn)動成為激發(fā)態(tài)，加速其熱運動，縮短萃取組分的分子由物料內(nèi)部擴散到萃取溶劑界面的時間，從而使萃取速率提高數(shù)倍，同時還降低了萃取溫度，最大限度保證萃取的質(zhì)量。（3）當(dāng)微波能作用于分子上時， 促進(jìn)了分子的轉(zhuǎn)動運動， 分子若此時具有一定的極性，便在微波電磁場作用下產(chǎn)生瞬間極化，并以24.5 億次 / 秒的速度做極性變換運動，從而產(chǎn)生鍵的振動、撕裂和粒子之間的相互碰撞，以促進(jìn)分子活性部分（極性部分）更好地接觸和反應(yīng)，同時迅速生成大量的熱能，促進(jìn)細(xì)胞破裂，使細(xì)胞液流出來并擴散到溶劑中。微波萃取的影響因素（1）溶劑的影響（2）萃取時間的影響（3）萃取溫度的影響（4）式樣中水分或濕度的影響（5）

12、基體物質(zhì)的影響第二章生物檢測技術(shù)1. PCR 的過程（變性、退火、延伸）：(1)DNA 模板的解鏈（變性） 90 95， 30s理論上，在 90 左右能使 DNA雙鏈之間的所有氫鍵鏈斷開，完全分離為單鏈；且在中性pH 情況下， DNA的完整性仍能很好保存。(2) DNA 單鏈與引物的退火（復(fù)性）5565 , 3045s引物與模板單鏈特異性結(jié)合 （較高的溫度） ；不希望兩條互補的模板單鏈結(jié)合在一起（ DNA引物的量大大超過模板的量，競爭性結(jié)合：引物+模板幾率 DNA自身復(fù)性幾率 ）。(3) 引物的延伸（新鏈DNA的合成） 70 75 ， 3060s （ 2kb)首次循環(huán)：引物從 3端開始延伸，延

13、伸片段的 5端為人工合成引物是特定的，3 端沒有固定的終止點，長短不一。第二個循環(huán)：引物與新鏈結(jié)合，由于后者5端序列是固定的末端，意味著5端的序列就成為此次延伸片段3端的終止點。N 個循環(huán)后：由于多數(shù)擴增產(chǎn)物受到所加引物5端的限定，產(chǎn)物的序列是介于兩種引物5端之間的區(qū)域。引物本身也是新生DNA鏈的一部分。PCR 的反應(yīng)條件：1）預(yù)變性 ： 94 300s （高溫起動 : 充分變性，防止非特異性擴增）2）變性 ： 90-95 ， 30s -60s3）退火 ： 55-65 30s-45s（ 4）延伸 ： 70-72 30-60s（2kb)25-35次 cycle 后，延長延伸（72 ，10min

14、；充分延伸 ),冷卻至 4 或加入 EDTA至 10mmol/L 以終止反應(yīng)。PCR 的反應(yīng)試劑：（ 1）模板 ：單、雙鏈DNA均可。不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制劑、DNA結(jié)合蛋白類。一般100ng DNA.精品文檔模板 /100L 。模板濃度過高會導(dǎo)致反應(yīng)的非特異性增加。（ 2）引物濃度 ：0.2-1mol/L 。濃度過高易導(dǎo)致模板與引物錯配, 反應(yīng)特異性下降。（ 3） Taq DNA聚合酶 （ thermus aquaticus)： 0.5-2.5 U/50l 。酶量增加使反應(yīng)特異性下降; 酶量過少影響反應(yīng)產(chǎn)量。4） dNTP： dNTP濃度取決于擴增片段的長度，四種 dNTP

15、濃度應(yīng)相等。濃度過高易產(chǎn)生錯誤堿基的摻入，濃度過低則降低反應(yīng)產(chǎn)量dNTP可與 Mg2+結(jié)合，使游離的Mg2+濃度下降，影響DNA聚合酶的活性。（ 5） Mg2+：Mg2+是 DNA聚合酶的激活劑，0.5mmol/L-2.5mmol/L反應(yīng)體系。 Mg2+濃度過低會使Taq 酶活性喪失、 PCR產(chǎn)量下降；Mg2+過高影響反應(yīng)特異性。Mg2+可與負(fù)離子結(jié)合，所以反應(yīng)體系中dNTP、 EDTA等的濃度影響反應(yīng)中游離的 Mg2+濃度。（ 6）標(biāo)準(zhǔn)的緩沖液： 10X buffer（ KCl、 Tris-HCl、MgCl2、 BSA或 DDT）7）無菌雙蒸水或三蒸水8） 石蠟油或礦物油 :3050ul （

16、封閉、防止高溫時液體的揮發(fā)）4、ELISA 基本原理； ELISA 測定方法的操作步驟及關(guān)鍵點ELISA 基本原理酶聯(lián)免疫吸附分析（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）原理使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面；抗原或抗體與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗原或抗體；在測定時，使受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相抗原或固相抗體起反應(yīng)；用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例；加入酶反應(yīng)底物，底物被酶催化為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物量與標(biāo)本中受檢物的量相關(guān)，用分光光度法進(jìn)行定量。ELISA 測定方法的

17、操作步驟及關(guān)鍵點（ 1）加樣： 在 ELISA 中除了包被外，一般需進(jìn)行45 次加樣。（ 2）保溫： ELISA 中一般有二次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，此時反應(yīng)的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定的要求，保溫容器最好是水浴箱，可使溫度迅速平衡。3）洗滌： 洗滌在 ELISA 過程中不是反應(yīng)步驟，但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。4）比色： ELISA 板的實驗結(jié)果可用肉眼觀察，也可用酶標(biāo)儀測定。肉眼觀察也有一定準(zhǔn)確性。5）結(jié)果判定： 用“ +”或“ - ”表示。超過規(guī)定吸收值的標(biāo)本均屬陽性，此規(guī)定的吸

18、收值是根據(jù)事先測定大量陰性標(biāo)本取得的，是陰性標(biāo)本的均值加兩個標(biāo)準(zhǔn)差。直接以吸收值表示。吸收值越大，陽性反應(yīng)越強，此數(shù)值是固定實驗條件下得到的結(jié)果，而且每次都伴有參考標(biāo)本。以終點滴度表示。將標(biāo)本稀釋，最高稀釋度仍出現(xiàn)陽性反應(yīng)，為該標(biāo)本的滴度。以 P/N 表示。求出該標(biāo)本的吸收值與一組陰性標(biāo)本吸收值的比值，大于1.5 倍、 2 倍或 3 倍，即判為陽性。第三章食品中殘留危害物質(zhì)檢測技術(shù)1、有機氯農(nóng)藥殘留量的測定氣相色譜法 (GB T 5009 19 2008) 原理、提取、凈化的操作步驟、檢測、計算；原理： 樣品中六六六、滴滴涕經(jīng)提取、凈化后用氣相色譜法測定，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。電子捕獲檢測器對于負(fù)電

19、極強的化合物具有較高的靈敏度 ( 檢出限達(dá) 10-14g/ml) ，利用這一特點， 可分別測出微量的六六六和滴滴涕。 不同異構(gòu)體和代謝物可同時分別測定。.精品文檔薄層色譜法原理，操作步驟，測定，計算；.精品文檔（ 1）原理： 樣品中六六六、滴滴涕經(jīng)有機溶劑提取，并經(jīng)硫酸處理，除去干擾物質(zhì)，濃縮，點樣展開后，用硝酸銀顯色，經(jīng)紫外線照射生成棕黑色斑點，與標(biāo)準(zhǔn)比較，可概略定量。2）操作步驟提?。?選擇弱極性溶劑提取如石油醚、環(huán)己烷、丙酮等凈化 ：10ml 提取液濃縮至 1ml ，加 0.1ml 濃硫酸， 蓋上試管塞振搖數(shù)下， 打開塞子放氣， 再振搖 0.5min ，于 1600r min 離心 15

20、min。上層清液供薄層色譜分析（ 3）測定：薄層板的制備：稱取氧化鋁G 4.5g ，加 1ml 硝酸銀溶液 (10g L) 及 6ml 水，研磨至糊狀， 立即涂在三塊5cm 20cm的薄層板上，涂層厚度0.25mm，于 100烘 0.5h ，置于干燥器中，避光保存。點樣： 離薄層板底端2cm 處，用針劃一標(biāo)記。在薄層板上點1 10 L 樣液和六六六、滴滴涕標(biāo)準(zhǔn)溶液，一塊板可點 3 4 個。中間點標(biāo)準(zhǔn)溶液，兩邊點樣品溶液。也可用濾紙移樣法點樣。展開 ：在展開槽中預(yù)先倒入l0ml丙酮 - 己烷 (1+99) 或丙酮 - 石油醚 (1+99) 。將經(jīng)過點樣的薄層板放入槽內(nèi)。當(dāng)溶劑前沿距離原點10 1

21、2cm時取出，自然揮干。顯色 ：將展開后的薄層板噴以10ml 硝酸銀顯色液，干燥后距紫外燈8cm 處照 10 20min ，六六六、滴滴涕等全部顯現(xiàn)棕黑色斑點。A21000（ 4）計算：x2m2V4 /V3 1000式中：X2 -樣品中六六六、滴滴涕及其異構(gòu)體或代射物的 單一含量， mg kg；A2-被測定用樣液中六六六或滴滴涕及其異構(gòu)體或代謝物的單一含量, ng ;V3-樣品濃縮液總體積 , mL ；V4 - 點板樣液體積 , L； m2- 樣品質(zhì)量 , g2、有機磷農(nóng)藥殘留量的測定方法氣相色譜法原理，樣品的預(yù)處理，檢測（火焰光度檢測器原理，重點），計算（ 1）原理 ：含有機磷的試樣在富氫火

22、焰上燃燒時，能激發(fā)出HPO碎片，激發(fā)態(tài)的 P 元素發(fā)出波長為 526nm的特性光波，光波經(jīng)濾光片選擇后由光電倍增管接收，轉(zhuǎn)換成電流信號，由放大器放大并記錄下來，與標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比較定性、定量。2）樣品的預(yù)處理試樣制備 : 糧食：取樣品粉碎，過 20 目篩制成糧食試樣果蔬：取樣品洗凈，晾干，去掉非可食部分后制成待測試樣農(nóng)藥提取 : 糧食：用乙睛、丙酮、氯仿或二氯甲烷等提取果蔬：用石油醚、苯、二氯甲烷或乙睛等提取油脂類：用石油醚、丙酮、二氯甲烷等提取凈化提取物 : 目的：去除油脂、色素、蠟質(zhì)等干擾物質(zhì)。濃縮和定容 : 用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至約2 ml ，濃縮液定量轉(zhuǎn)移至5 25 ml 容量瓶中，加二氯甲

23、烷定容至刻度（ 3）檢測（火焰光度檢測器原理，重點）：當(dāng)含有機磷的試樣在檢測器中的富氫焰上燃燒時，以HPO碎片的形式，放射出波長為526 nm 的特性光。吸取 2 5 ul混合標(biāo)準(zhǔn)液及樣品凈化液注入氣相色譜儀，其中的有機磷農(nóng)藥氣化后在載氣攜帶下于色譜柱中分離。火焰光度檢測器（FPD）的濾光片將非特征光譜濾除，特性光經(jīng)由光電倍增管接收，轉(zhuǎn)變成電信號，經(jīng)微電極放大器放大后被記錄下來，繪成“電信號時間曲線” 。以保留時間（ tR ）定性。以試樣和標(biāo)準(zhǔn)的峰高或峰面積比較定量（ 4）計算 :.精品文檔Xi ：i 組分有機磷農(nóng)藥的含量(mg kg)Ai;試樣中 i 組分的峰面積，積分單位Asi:混合標(biāo)準(zhǔn)液

24、中i 組分的峰面積，積分單位V1:試樣提取液的總體積(ml)V2: 凈化用提取液的總體積(ml)V3:濃縮后的定容體積(ml)V4: 進(jìn)樣體積( l)Msi:進(jìn)入色譜儀中的i 標(biāo)準(zhǔn)組分的質(zhì)量(ng)M:樣品的質(zhì)量(g)速測卡法原理，結(jié)果判斷方法1）原理： 如果蔬菜中含可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性的有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，這種酶就不能被水解，從而無顯色反應(yīng)。在溶液中加入乙酰膽堿酯酶和顯色劑，用此判斷有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否存在。2）結(jié)果判斷方法 ：結(jié)果以酶被有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制 ( 為陽性 ) 、未抑制（為陰性）表示。與空白對照卡比較，白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色均為陽性結(jié)果。白色

25、藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空白對照卡相同，為陰性結(jié)果。對陽性結(jié)果的樣品，可用其它分析方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。3、氨基甲酸酯類農(nóng)藥HPLC同時測定蔬菜中三種氨基甲酸酯類農(nóng)藥測定原理，提取與凈化測定原理 ：樣品經(jīng)提取、凈化、濃縮、定容，微孔濾膜過濾后進(jìn)樣，用反相高效液相色譜分離，紫外檢測器檢測，根據(jù)色譜峰的保留時間定性，外標(biāo)法定量。(2) 提取與凈化： 取市場銷售的新鮮蔬菜切碎混勻， 準(zhǔn)確稱取樣品 25.0g 于碘量瓶中， 加入 50.0mL 丙酮，振蕩 30min ，加入 8.0g 氯化鈉，搖勻后，加入 50.0mL 二氯甲烷，振蕩 30min 后，取出，加入 10g 無水硫酸鈉搖勻，靜置分層

26、后，取上清液 50.0mL，于蒸發(fā)皿中， 40氮吹至 2.0mL。將活性炭 - 氨基固相萃取柱用甲醇活化后，加入樣品，用甲醇沖洗，收集洗脫液約10mL， 40氮吹至約1.0mL，加入 1.0mL 甲醇，吹至余0.5mL，重復(fù) 2 次后，將殘留物用甲醇溶解定容至2.0mL甲酸酯 - 氣相色譜（附有 FTD火焰熱離子檢測器）測定原理，提取與凈化(1 ）測定原理 ：含氮有機化合物被色譜柱分離后在加熱的堿金屬片的表面產(chǎn)生熱分解，形成氰自由基（CN*），并且從被加熱的堿金屬表面放出的原子狀態(tài)的堿金屬（Rb）接受電子變成 CN-，再與氫原子結(jié)合。放出電子的堿金屬變成正離子，由收集極收集，并作為信號電流而被

27、測定。電流信號的大小與含氮化合物的含量成正比。以峰面積或峰高比較定量。(2 ）提取： 糧食樣品：稱取約40g 糧食試樣，精確至0.001g ，置于 250mL具塞誰形瓶中，加入 2040g 無水硫酸鈉（視試樣的水分而定） 、100mL無水甲醇。塞緊，搖勻，于電動振蕩器上振蕩30min 。然后經(jīng)快速濾紙過濾于量筒中，收集 50mL濾液，轉(zhuǎn)入 250mL分液漏斗中，用50mL 5%氯化鈉溶液洗滌量筒，并入分液漏斗中。蔬菜樣品：稱取 20g 蔬菜試樣，精確至 0.001g ，置于 250mL具塞錐形瓶中，加入80mL無水甲醇，塞緊，于電動振蕩器上振蕩 30min。然后經(jīng)鋪有快速濾紙的布氏漏斗抽濾于2

28、50mL抽濾瓶中， 用 50mL無水甲醇分次洗滌提取瓶及濾器。將濾液轉(zhuǎn)入 500mL分液漏斗中，用 100mL 5%氯化鈉水溶液分次洗滌濾器，并入分液漏斗中。(3 ）凈化：糧食樣品：于盛有樣品提取液的250mL分液漏斗中加入50mL石油醚，振蕩 1min ，靜置分層后將下層（甲醇氯化鈉溶液）放入第二個 250mL 分液漏斗中，加 25mL甲醇氯化鈉溶液于石油醚層中，振搖30s ，靜置分層后，將下層并入甲醇氯化鈉溶液中。蔬菜樣品：于盛有樣品提取液的500mL分液漏斗中加入50mL石油醚，振搖 1min、靜置分層后將下層放入第二個500mL分液漏斗中，并加入 50mL石油醚，振搖 1min，靜置分

29、層后將下層放入第三個500mL分液漏斗中。然后用25mL甲醇氯化鈉溶液依次反洗第一、二分液漏斗中的石油醚層， 每次振搖 30s ，最后把甲醇氯化鈉溶液并入第三分液漏斗.精品文檔中。4、LC-MS/MS分析條件的選擇和優(yōu)化，重點：緩沖溶液和流動相；樣品預(yù)處理LC-MS/MS分析條件的選擇和優(yōu)化(1 ）接口的選擇：ESI 適合于中等極性到強極性的化合物分子， 特別是那些在溶液中能預(yù)先形成離子的化合物和可以獲得多個質(zhì)子的大分子（如蛋白質(zhì)） 。 APCI 不適合可帶多個電荷的大分子，其優(yōu)勢在于弱極性或中等極性的小分子的分析。(2 ）正、負(fù)離子模式的選擇：選擇的一般原則為：正離子模式：適合于堿性樣品，可

30、用乙酸或甲酸對樣品加以酸化。樣品中含有仲氨或叔氨時可優(yōu)先考慮使用正離子模式。負(fù)離子模式：適合于酸性樣品，可用氨水或三乙胺對樣品進(jìn)行堿化。樣品中含有較多的強負(fù)電性基團(tuán)，如含氯、含溴和多個羥基時可嘗試使用負(fù)離子模式(3 ）流動相的選擇A）常用的流動相為甲醇、乙腈、水和它們不同比例的混合物以及一些易揮發(fā)鹽的緩沖液，如甲酸銨、乙酸銨等，還可以加入易揮發(fā)酸堿如甲酸、乙酸和氨水等調(diào)節(jié)pH 值。B） LC-MS接口避免進(jìn)入不揮發(fā)的緩沖液，避免含磷和氯的緩沖液，含鈉和鉀的成分必須l mmol/L （鹽分太高會抑制離子源的信號和堵塞噴霧針及污染儀器），含甲酸（或乙酸）2，含三氟乙酸0.5 ，含三乙胺l ，含醋酸

31、銨 1050 mmol/L 。C）送樣前摸好LC 條件，可基本分離，緩沖體系符合MS要求。(4 ）注意事項：A）硫酸鹽、磷酸鹽和硼酸鹽等非揮發(fā)性緩沖劑，需用揮發(fā)性緩沖劑，如乙酸銨、甲酸銨、甲酸、乙酸、氨水等代替。B） pH 值，當(dāng)用揮發(fā)性酸、堿，如甲酸、乙酸和氨水等代替非揮發(fā)性酸、堿時， pH 值通常應(yīng)保持不變。C）有機溶劑，大多數(shù) HPLC用的溶劑，尤其是 RPLC， HILIC 流動相與 MS相匹配(5 ）流量和色譜柱的選擇：A）不加熱ESI 的最佳流速是1 50 L/min ，應(yīng)用 4.6 mm 內(nèi)徑 LC 柱時要求柱后分流，目前大多采用l 2.1 mm內(nèi)徑的微柱， ESI 源最高允許l

32、 mL/min ，建議使用200 400 L/min 。B） APCI 的最佳流速是l mL/min ，常規(guī)直徑4.6mm柱最合適。C）為了提高分析效率，常采用100 mm的短柱（此時UV圖上并不能獲得完全分離，由于質(zhì)譜定量分析時使用MRM的功能，所以不要求各組分沒有完全分離），這對于大批量定量分析可以節(jié)省大量的時間(6 ）輔助氣體流量和溫度的選擇：A）霧化氣對流出液形成噴霧有影響，干燥氣影響噴霧去溶劑效果，碰撞氣影響二級質(zhì)譜的產(chǎn)生。B）操作中溫度的選擇和優(yōu)化主要是指接口的干燥氣體而言，一般情況下選擇干燥氣溫度高于分析物的沸點20 左右即可。對熱不穩(wěn)定性化合物，要選用更低的溫度以避免顯著的分解

33、。C）選用干燥氣溫度和流量大小時還要考慮流動相的組成， 有機溶劑比例高時可采用適當(dāng)?shù)偷臏囟群土髁啃∫稽c的。LC-MS/MS分析樣品的預(yù)處理(1 ）進(jìn)行樣品預(yù)處理的必要性：A）從保護(hù)儀器角度出發(fā)，防止固體小顆粒堵塞進(jìn)樣管道和噴嘴，防止污染儀器，降低分析背景，排除對分析結(jié)果的干擾。B）要求獲得最佳的分析結(jié)果，從ESI 電離的過程分析：ESI 電荷是在液滴的表面，樣品與雜質(zhì)在液滴表面存在競爭，不揮發(fā)物（如磷酸鹽等）防礙帶電液滴表面揮發(fā)，大量雜質(zhì)防礙帶電樣品離子進(jìn)入氣相狀態(tài)，增加電荷中和的可能。(2 ）LC-MS/MS分析樣品預(yù)處理的方法：A）超濾 B）溶劑萃取 / 去鹽 C）固相萃取D）灌注（ Pe

34、rfusion）凈化 / 去鹽 E）色譜分離：反相色譜分離；親和技術(shù).精品文檔分離 F）甲醇或乙腈沉淀蛋白G）酸水解，酶解牛奶中氯霉素類多殘留的GC測定方法中，衍生化的作用；以間硝基氯霉素作內(nèi)標(biāo)物。牛奶樣品用乙腈提取 , 離心 , 上清液濃縮至干 , 用水溶解殘余物 , 過 C18 固相萃取柱 , 用甲醇 - 水 (60+40) 溶液洗脫 , 洗脫液揮發(fā)至干 , 用 N,O- 雙 ( 三甲基硅 ) 三氟乙酰胺 (BSTFA)- 三甲基氯硅烷 (TMCS)(99+1) 試劑衍生化 , 加人甲苯和水 , 終止衍生反應(yīng) , 離心 , 有機相進(jìn)樣分析 , 色譜柱為 OV-1石英毛細(xì)管柱 (30m 0.

35、25mm), 載氣為氦氣 , 電子捕獲檢測器檢測 ,可檢測到牛奶中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅?g/kg豬組織中鹽酸克倫特羅的檢驗ELISA 法，原理、操作及關(guān)鍵步驟基本原理： 微孔板包被有針對克倫特羅IgG 的抗抗體；加入克倫特羅抗體，經(jīng)過溫育和洗滌后；加入酶標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)或樣品溶液，克倫特羅與酶標(biāo)記物競爭與抗體結(jié)合；沒有連接的克倫特羅酶標(biāo)記物在被洗滌除去；加入酶底物和發(fā)色劑并且溫育，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的發(fā)色劑為藍(lán)色的產(chǎn)物，加入反應(yīng)終止液使顏色有藍(lán)轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在 450nm處比色測定。操作及關(guān)鍵步驟：(1 ）試劑盒的選擇和準(zhǔn)備固相載體：吸附性能，孔底透明度，板、孔性能差異；包被物：純度；

36、儲存條件： 2-8 ；室溫平衡：試驗用試劑應(yīng)提前1-2h 從冰箱中取出，待溫度與室溫平衡后使用；及時保存：試劑完畢后不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。(2 ）試樣的處理盡可能使用新鮮樣本；進(jìn)行必要的前處理。加樣加樣前樣本必須混合均勻； 加在板孔底部， 避免加在孔壁上部；不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡；每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染；加酶結(jié)合物和底物時可用定量多道加液器。(4 ）溫育溫育前必須震動混勻，但不可濺出；溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確；溫育必須避光。(5 ）洗滌清洗必須徹底；避免出現(xiàn)板孔干燥；反轉(zhuǎn)傾空微孔板要迅速，避免清洗液混合。第四章食品中有害金屬檢測1、微波消解原理、方法及優(yōu)點（1

37、）原理： 當(dāng)微波通過試樣時，極性分子隨微波頻率快速變換取向，2450MHz的微波，分子每秒鐘變換方向2.45109 次，分子來回轉(zhuǎn)動，與周圍分子相互碰撞摩擦，分子的總能量增加，使試樣溫度急劇上升。同時，試液中的帶電粒子（離子、水合離子等）在交變的電磁場中，受電場力的作用而來回遷移運動，也會與臨近分子撞擊，使得試樣溫度升高。（2) 方法： 食品樣品的微波消解一般為取0.1 0.5g 樣品，加入 58mL HNO3和 0 2mLH2O2選取適當(dāng)?shù)臏囟群蛪毫?shù)，一般消化時間為10-40min 。（3）優(yōu)點 :密閉微波消解可通過提高溫度壓力協(xié)助反應(yīng)，使反應(yīng)物在需要的特定溫度下發(fā)生快速分解，減少分解所

38、需的.精品文檔時間，提高工作效率，對傳統(tǒng)方法這是不可能的。揮發(fā)元素如： As， Hg 等可以被保留在溶液中，防止揮發(fā)造成結(jié)果的偏差和對環(huán)境的污染。同時也使操作人員避免接觸酸霧和有害的氣體。由于微波消解試劑用量少，且無環(huán)境對樣品的污染，因此有較低的空白樣品的分解可以進(jìn)行的更精確、徹底。能夠?qū)崿F(xiàn)從功率選擇到消解反應(yīng)的自動控制，避免了人為操作產(chǎn)生的錯誤和誤差。通過溫度、壓力參數(shù)的控制可以保證消解的質(zhì)量，保證反應(yīng)完全一致的平行性和重復(fù)性2、原子熒光的類型，原子熒光光譜（AFS）原理、氫化物反應(yīng)種類；氫化物原子熒光的干擾及消除方法；計算1）原子熒光的類型 ：共振熒光： 激發(fā)和去激發(fā)過程中涉及的上下能級相

39、同，即吸收和發(fā)射波長相同。直躍線熒光 ：激發(fā)和去激發(fā)過程中涉及的上能級相同。階躍線熒光：激發(fā)和去激發(fā)過程中涉及的上能級不同。敏化熒光： 受激發(fā)的原子與另一種原子碰撞時，把激發(fā)能傳遞給另一個原子使其激發(fā)，后者再從輻射形式去激發(fā)而發(fā)射熒光即為敏化熒光。多光子熒光： 兩個或以上的光子共同使原子到達(dá)激發(fā)態(tài)，然后發(fā)射一個光子再返回到基態(tài)所發(fā)射的熒光（ 2）原子熒光光譜（ AFS）原理：利用硼氫化鉀或硼氫化鈉作為還原劑，將樣品溶液中的待分析元素還原為揮發(fā)性共價氣態(tài)氫化物( 或原子蒸汽 ) ，然后借助載氣將其導(dǎo)入原子化器, 在氬氫火焰中原子化而形成基態(tài)原子。基態(tài)原子吸收光源的能量而變成激發(fā)態(tài)；激發(fā)態(tài)原子在去

40、活化過程中將吸收的能量以熒光的形式釋放出來,此熒光信號的強弱與樣品中待測元素的含量成線性關(guān)系 , 因此通過測量熒光強度就可以確定樣品中被測元素的含量。（ 3）氫化物反應(yīng)種類金屬酸還原體系（Marsh 反應(yīng)）Zn+2HCL- ZnCl2+2HnH +Mm+-MHn+H2 缺點：能發(fā)生氫化物的元素較少；反應(yīng)速度慢大約需要10 分鐘；干擾較為嚴(yán)重。硼氫化鈉酸還原體系酸化過的樣品溶液中的砷、鉛、銻、硒等元素與還原劑（一般為硼氫化鉀或鈉）反應(yīng)在氫化物發(fā)生系統(tǒng)中生成氫化物。NaBH4+3H2O+H+=H3BO3+Na+8H*+Em+=EHn+H2(氣體）式中 Em+代表待測元素，EHn為氣態(tài)氫化物該體系克

41、服或大大減少了金屬- 酸還原體系的缺點，在還原能力、反應(yīng)速度、自動化操作、抗干擾程度以及適用的元素數(shù)目等諸多方面表現(xiàn)出極大的優(yōu)越性堿性體系：在堿性試樣底液中引入NaBH4和酸進(jìn)行氫化反應(yīng). 在 NaOH強堿性介質(zhì)中氫化元素形成可溶性含氧酸鹽，可消除鐵、鉑、銅族元素的化學(xué)干擾。電化學(xué)方法在 5%KOH堿性介質(zhì)中，用電解法在鉑電極上還原砷和錫，優(yōu)點是空白低，選擇性好4）氫化物原子熒光的干擾及消除方法氫化物原子熒光的干擾(a ）液相發(fā)生在氫化物產(chǎn)生過程中，樣品溶液中干擾元素優(yōu)先反應(yīng)，或形成絡(luò)合物以及金屬吸附被測元素的氫化物，消耗還原劑。氣相 - 氫化物傳輸過程或原子化過程中的干擾，消耗氫基，降低被測

42、元素的原子化效率，因為在氫化物的解離過程中需要大量氫基參與反應(yīng)。元素價態(tài)、共存的離子、樣品介質(zhì)和酸度、還原劑類型及用量等都可能帶來干擾。主要有介質(zhì)酸度干擾、氧化還原體系干擾、重金屬干擾和易形成氫化物元素的干擾。.精品文檔干擾消除選擇合適介質(zhì)和酸度，防止產(chǎn)生氧化性氣體和固態(tài)氫化物或難溶的化合物，有些元素對酸度要求很苛刻，例如錫和鉛、鍺，過高過低都影響氫化物的產(chǎn)生；選擇還原劑用量，減少金屬離子被還原；加入掩蔽劑，例如硫脲、碘化鉀、草酸等，對共存的干擾離子進(jìn)行掩蔽，防止生成難溶化合物；(d) 預(yù)還原或氧化，氫化物的發(fā)生效率與價態(tài)有關(guān)，加入抗壞血酸，可使5 價砷還原成3 價，測量Pb 時加入鐵氰化鉀則

43、是先把2 價氧化成4 價，提高氫化物的產(chǎn)生效率；還有一些其它方法，應(yīng)根據(jù)樣品基體來選擇合適的辦法。(5) 計算：測定原子熒光的強度即可求得待測樣品中該元素的含量。If = Ia If= k C式中： If 熒光強度 為熒光量子效率Ia吸收光的強度上述公式僅僅適用于低濃度的原子熒光分析。隨著原子濃度的增加，由于譜線展寬效應(yīng)、自吸、散射等因素的影響會使得曲線出現(xiàn)彎曲。3、砷的測定 - 銀鹽法原理，要求化學(xué)反應(yīng)式表示含砷的樣品經(jīng)濕法消化后，其余砷全部轉(zhuǎn)化成五價砷（ 1）消化2 As + 3 H2SO4 As2O3 +3 SO2 +3H2O3 As + 5 HNO3 + 2H2O 3H3AsO4 +5

44、NO3 As2O3 +4 HNO3 +7H2O 6H3AsO4 +4NO標(biāo)準(zhǔn)砷溶液： 1 g /mL(2) 還原 ( 15min )H3AsO4 +2KI +2HCl H3AsO3 +I2 +2KClH3AsO4 +SnCl2 +2HCl H3AsO3+ SnCl4+H2O(3) 顯色（ 40min)H3AsO3 +3Zn +6HCl AsH3 +3ZnCl2 +3 H2OAsH3 + Ag(DDTC ) Ag ( 膠體，黃棕色）+ As (DDTC) +3HDDTC為使平衡向右進(jìn)行，在Ag(DDTC ）中加入有機堿HDDTCNR3 (NR3H)(DDTC)4、F-730 測汞儀測定原理汞的空

45、心陰極等產(chǎn)生的特征譜線，當(dāng)循環(huán)泵將汞蒸汽帶入氣路時，汞蒸汽對汞的特征譜線發(fā)生吸收作用，吸收程度與汞蒸汽濃度有關(guān)，濃度越大，吸收越多?；鶓B(tài)汞原子吸收汞的特征譜線激發(fā)態(tài)（不穩(wěn)定）釋放 2537A譜線熒光粉屏 6000A的紅光 CdS 光敏電阻轉(zhuǎn)化成電信號電氣指示系統(tǒng)指示其吸光度。這樣吸光度可測且在一定濃度范圍內(nèi)與濃度成線性關(guān)系。第五章 食品添加劑及非法添加物檢測1、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸、山梨酸鉀結(jié)構(gòu)式，化學(xué)名稱及溶解特性；比較高效液相色譜法和氣相色譜法測定，樣品前處理方法不同之處，為什么？苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸、山梨酸鉀結(jié)構(gòu)式，化學(xué)名稱及溶解特性；（ ppt 上沒有，搜索維基百科）苯甲酸 ：

46、又稱安息香酸，結(jié)構(gòu)式6 5oCH COOH，無色透明固體，可溶于25C 熱水 3.4g/L, 可溶于甲醇、乙醚苯甲酸鈉 ：又稱苯酸鈉、安息香酸鈉、苯甲酸鈉鹽，分子結(jié)構(gòu)C H COONa，是無色或帶苯甲酸氣味，易燃，低毒，味65甜澀而有收斂性?？扇苡谒?，水溶液呈堿性，也溶于甘油、甲醇、乙醇。山梨酸 ：IUPAC名（ 2E，4E）-2,4- 己二烯酸，結(jié)構(gòu)式 CH2CH=CHCH=CHCOOH，為無色針狀結(jié)晶粉末，無臭或微帶刺激性臭味，耐光、耐熱性好，在140Co 下加熱 3h 無變化，長期暴露在空氣中則被氧化而變色。山梨酸難溶于水，溶于乙.精品文檔醇、乙醚、丙二醇、無水乙醇、花生油、丙酮和甘油山

47、梨酸鉀 ：又稱 2,4- 己二烯酸鉀， BB粉，無色或白色至淺黃色鱗片狀結(jié)晶、結(jié)晶狀粉末或顆粒。無臭或稍有臭味。在空氣中不穩(wěn)定，長時間放置時吸濕并氧化分析而著色。常溫下密封保存不會分解。易溶于水，基本無毒。比較高效液相色譜法和氣相色譜法測定，樣品前處理方法，為什么？高效液相色譜：原理： (ppt4)試樣加溫除去二氧化碳和乙醇，調(diào) pH 至近中性，過濾后進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根據(jù)保留時間和峰面積進(jìn)行定性和定量。試樣處理 ： (ppt7)汽水：稱取5.00-10.00g試樣，放入小燒杯中, 微溫攪拌除去二氧化碳，用氨水(1 十 1) 調(diào) pH約 7。加水定容至10mL-20mL，經(jīng)濾

48、膜 (0.45um) 過濾。果汁類： 稱取 5.00-10.00g 試樣，用氨水 (1 十 1) 調(diào) pH 約 7，加水定容至適當(dāng)體積， 離心沉淀， 上清液經(jīng) 0.45um 濾膜過濾。配制酒類：稱取10.00g 試樣，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水(1 十 1) 調(diào) pH 約 7，加水定容至適當(dāng)體積，經(jīng)0.45um 濾膜過濾。氣相色譜法 ：原理： (ppt10)試樣酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，用附氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進(jìn)行分離測定，標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。試樣提取 ：（ ppt12 ）稱取 2.50g 事先混合均勻的試樣，置于25mL帶塞量筒中，加0.5mL 鹽酸 (1+1)

49、酸化，用15、 10 mL 乙醚提取兩次，每次振搖1min，將上層乙醚提取波吸入另一個25mL帶塞量筒中， 合并乙醚提取液。用 3mL氯化鈉酸性溶液(40 g L) 洗滌兩次，靜止15min，用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混勻。準(zhǔn)確吸取5mL乙醚提取液于5mL帶塞刻度試管中，置40水浴上揮干，加入2mL石油醚 - 乙醚 (3+1) 混合溶劑溶解殘渣，備用。苯甲酸和山梨酸測定- 薄層層析法，樣品提取酸化的目的是什么？樣品中如含有二氧化碳、酒精時應(yīng)如何處理？薄層層析法 ：步驟 ：樣品處理點樣展開顯色定性或半定量（ppt17 ）操作流程圖 ： 2.5g 樣品于25m

50、L具塞量筒加0.5mL 鹽酸用15mL乙醚萃取，振搖1min用 10mL乙醚萃取合并兩次萃取液于另一25ml 具塞量筒 NaCl 洗滌兩次靜止10min 通過無水NaSO4層過濾于25mL容量瓶加乙醚定容至25mL。吸取10.0mL 乙醚提取液分現(xiàn)將置于10mL 具塞離心管中40水浴上揮干加0.1mL 乙醇溶解殘渣備用。（ ppt19 、 20）酸化的目的：樣品酸化處理的目的是使苯甲酸鈉、山梨酸鉀轉(zhuǎn)化為苯甲酸或山梨酸，再用乙醚提取。（書 P153）樣品中如含有二氧化碳、酒精時應(yīng)先加熱除去。（書 P153）PPT19補充問題： 富含脂肪和蛋白質(zhì)的樣品應(yīng)如何處理？富含脂肪和蛋白質(zhì)的樣品應(yīng)除去脂肪和

51、蛋白質(zhì)，以防用乙醚萃取時發(fā)生乳化。（ P153）加入酸性氯化鈉溶液和無水硫酸鈉使其鹽析后再離心分離。（ P152）2、 食品中蘇丹紅染料的檢測方法高效液相色譜法（GB/T19681 2005）樣品的提取方法；柱層析的作用；流動相；定量計算超聲波提取優(yōu)點；超聲波提取原理；樣品提取方法：將液體、漿狀樣品混合均勻，固體樣品磨細(xì)后用正己烷提取、過濾，必要時加入無水硫酸鈉脫水后稍加溫溶解，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮，然后慢慢加入氧化鋁層析柱中萃取凈化后用丙酮轉(zhuǎn)移定容待測。（ ppt47 ）柱層析的作用：根據(jù)混合樣品中不同成分在層析液中的溶解擴散速度之間的差異，將蘇丹紅從物質(zhì)中分離出來，以方便對目標(biāo)物質(zhì)下一步驟

52、的測定。 （書、 ppt 都無，自己理解的）流動相：溶劑A 0.1% 甲酸的水溶液- 乙腈（ 85:15 ）；溶劑 B 0.1% 甲酸的乙腈溶液- 丙酮（ 80:20 ）.精品文檔超聲波提取原理：超聲波提取，是基于超聲波的特殊物理性質(zhì)。主要是主要通過壓電換能器產(chǎn)生的快速機械振動波來減少目標(biāo)萃取物與樣品基體之間的作用力從而實現(xiàn)固- 液萃取分離。（ ppt53 、54）（ 1）加速介質(zhì)質(zhì)點運動。高于 20 KHz 聲波頻率的超聲波的連續(xù)介質(zhì)（例如水）中傳播時，根據(jù)惠更斯波動原理，在其傳播的波陣面上將引起介質(zhì)質(zhì)點（包括藥材重要有效成分的質(zhì)點）的運動，使介質(zhì)質(zhì)點運動獲得巨大的加速度和動能。質(zhì)點的加速度

53、經(jīng)計算一般可達(dá)重力加速度的二千倍以上。由于介質(zhì)質(zhì)點將超聲波能量作用于藥材中藥效成分質(zhì)點上而使之獲得巨大的加速度和動能，迅速逸出藥材基體而游離于水中。（ 2）空化作用 。超聲波在液體介質(zhì)中傳播產(chǎn)生特殊的“空化效應(yīng)”，“空化效應(yīng)”不斷產(chǎn)生無數(shù)內(nèi)部壓力達(dá)到上千個大氣壓的微氣穴并不斷“爆破”產(chǎn)生微觀上的強大沖擊波作用在中藥 材上，使其中藥材成分物質(zhì)被“轟擊”逸出，并使得藥材基體被不斷剝蝕，其中不屬于植物結(jié)構(gòu)的藥效成分不斷被分離出來。加速植物有效成份的浸出提取。（ 3）超聲波的振動勻化（ Sonication）使樣品介質(zhì)內(nèi)各點受到的作用一致，使整個樣品萃取更均勻。綜上所述，中藥材中的藥效物質(zhì)在超聲波場作

54、用下不但作為介質(zhì)質(zhì)點獲得自身的巨大加速度和動能，而且通過“空化效應(yīng)”獲得強大的外力沖擊，所以能高效率并充分分離出來。超聲波提取優(yōu)點： （ ppt55 、 56）1）提取效率高 ：超聲波獨具的物理特性能促使植物細(xì)胞組織破壁或變形，使中藥有效成分提取更充分，提取率比傳統(tǒng)工藝顯著提高達(dá) 50 500%；（ 2）提取時間短 ：超聲波強化中藥提取通常在24-40 分鐘即可獲得最佳提取率，提取時間較傳統(tǒng)方法大大縮短2/3以上， 藥材原材料處理量大；3）提取溫度低 ：超聲提取中藥材的最佳溫度在 40 60，對遇熱不穩(wěn)定、 易水解或氧化的藥材中有效成分具有保護(hù)作用，同時大大節(jié)能能耗；4）適應(yīng)性廣 ：超聲提取中

55、藥材不受成分極性、 分子量大小的限制， 適用于絕大多數(shù)種類中藥材和各類成分的提取；5）提取藥液雜質(zhì)少，有效成分易于分離、純化；6）提取工藝運行成本低，綜合經(jīng)濟效益顯著；7）操作簡單易行，設(shè)備維護(hù)、保養(yǎng)方便。提取率提高 50%500%，提取時間（分鐘）縮短 2/3 以上，提取溫度為4060，保護(hù)有效成份。3、吊白塊 - “甲醛次硫酸氫鈉”分光光度法測定原理、方法及計算原理 ：吊白塊在酸性條件下可分解出甲醛，甲醛沸點很低，樣品進(jìn)行水蒸氣蒸餾，是甲醛餾出后在與乙酰丙酮作用，生成黃色的二乙酰基二氫吡啶，根據(jù)顏色深淺比色定量。（書 P177）方法： 取粉碎均勻的樣品5g, 加水 50 mL,在超聲波中提

56、取15 min, 并隨時攪拌， 取出后， 加入 10硫酸鋅溶液5ml及 4氫氧化鈉溶液3 mL，混勻，靜置10min，以 3000r min，離心10min，取上清液9ml 于 25ml 容量瓶中 . 加入1.0mL 乙酰丙酮溶液, 混勻，于沸水浴加熱3min 取出，用自來水冷卻至室溫，立即在415nm波長進(jìn)行比色測定，以蒸餾水調(diào)零，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品溶液中甲醛的濃度，并技公式計算出樣品中吊白塊的含量。（ ppt62 ）4、艾杰爾三聚氰胺HPLC-MS，樣品的提取，PCX 小柱凈化，氮吹儀作用樣品制備： 準(zhǔn)確稱取粉碎后的樣品2.0 至 50mL塑料離心管中，加入1%三氯乙酸溶液15mL，超聲提

57、取30min 后，以 5000r/min離心 10min，將上清液經(jīng)濾紙過濾后轉(zhuǎn)入另一50mL離心管中。分別用10mL甲醇、 10mL水活化 SPE柱，將樣品溶液上柱，在用10ml 水、 10ml 甲醇洗滌 SPE柱，棄去洗脫液。抽干SPE柱后用 5%氨水 - 甲醇溶液（ 5： 95）15ml 洗脫，收集洗脫液， 將洗脫液與40oC 水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，氮氣吹干。 用甲醇 - 水（ 2:8 ）定容至 1.0ml ，過 0.2m濾膜，待測。（書 P180）凈化（ ppt68 ）： PCX小柱， 60mg 3mL：（ 1）活化及平衡：3mL甲醇， 3mL水（ 2）上樣：加入提取液3mL（ 3）淋洗

58、： 3mL水； 3mL甲醇；棄去淋洗液并將小柱抽干（ 4）洗脫： 5mL 5氨化甲醇 (v v) 洗脫。 (5 氨化甲醇的配制：5mL氨水 5mL+95mL甲醇。（ 5）濃縮： 50，氮氣吹干，20甲醇水定容至2mL。.精品文檔氮吹儀的作用：用于吹干SPE 柱上的洗脫液，并且防止柱上的成分被氧化使得測量結(jié)果有偏差。（ ppt 、書都無，自己理解的）第六章食品中天然毒素檢測技術(shù)免疫親和凈化的原理、特點（ppt8 ）原理 ：免疫親和凈化法結(jié)合了單克隆抗體技術(shù)和親和柱技術(shù)，利用抗原- 抗體免疫反應(yīng)的原理，選擇性吸附提取液中的毒素，以達(dá)到分離凈化的目的特點優(yōu)點 ：特異性強、凈化效果好缺點 ： 1）耗時

59、、 2）用于單一毒素的測定、3）價格比較貴、保存需冷藏黃曲霉毒素測定（高壓液相色譜、酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫層析法），重點：膠體金免疫層析法原理及結(jié)果判斷方法高效液相色譜： （書 P196）基本原理：樣品通過免疫親和柱時，黃曲霉毒素M1被提取。親和柱內(nèi)含有的黃曲霉毒素M1 特異性單克隆抗體交聯(lián)在固體支持物上，當(dāng)樣品通過親和柱時，抗體選擇性地與黃曲霉毒素M1（抗原）鍵合，形成抗體- 抗原復(fù)合體。用水洗柱出去主內(nèi)雜質(zhì)，然后用洗脫劑洗脫吸附在柱上的黃曲霉毒素M1，收集洗脫液，用帶有熒光檢測器的高效液相色譜儀測定洗脫液中黃曲霉毒素M1含量。酶聯(lián)免疫法定量檢測（ppt19 ）（ 1）檢測原理：檢測的基礎(chǔ)是

60、抗原抗體反應(yīng)。微孔板包被有特殊的黃曲霉毒素M1 抗體。加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液和在洗滌步驟后加入的酶標(biāo)記黃曲霉毒素M1 （酶連接物） 。游離的黃曲霉毒素M1 和酶連接物競爭抗體結(jié)合位點（競爭性酶聯(lián)免疫分析） 。沒有結(jié)合的酶連接物在洗滌步驟中被除去。在孔中加入底物/ 發(fā)色劑，結(jié)合的酶連接物將發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色。 加入反應(yīng)終止液后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在 450 nm處測量，吸光度值與樣品中的黃曲霉毒素M1 濃度成反比。2） ELISA 試劑盒特點（ ppt25 ）優(yōu)點 : 簡單，靈敏 , 可定量，價格低廉，使用安全缺點 : 極個別的假陽性（假陰性）結(jié)果，蛋白，脂肪，酶，pH，操作等影響抗原抗體反應(yīng)3）