實驗七(植保)土壤微生物分離測數(shù)

1、實驗七土壤微生物分離測數(shù)一 實驗?zāi)康囊蠖?實驗原理三 實驗步驟四 實驗報告及思考題一 實驗?zāi)康囊? 了解土壤微生物的分離測數(shù)的基本原理。2 學(xué)習(xí)并掌握微生物平板菌落計數(shù)的技術(shù)方法。 二 基本原理 土壤是微生物生活的大本營，其中含有大量不同類型的微生物，可按照一定的方法對特定類群進(jìn)行數(shù)量測定。基本原理是通過稀釋使菌體細(xì)胞充分分散，單細(xì)胞得以生長發(fā)育形成菌落，可使用稀釋法或平板劃線法進(jìn)一步純化，還可通過平板菌落計數(shù)，推算單位重量土壤樣品含有微生物的數(shù)量。三 實驗步驟（一） 土壤樣品采集 （二） 好氣性細(xì)菌的分離測數(shù) （一） 土壤樣品采集 在待測田塊上，若田塊面積小于50平方米則按對角線三點采樣

2、，若田塊面積大于50平方米按對角線五點采樣。采樣一般定點于耕作層0-20cm，先除去表土1-2cm，以無菌鏟采土足量充分混勻后用無菌塑料袋分裝。 （二） 好氣性細(xì)菌的分離純化及測數(shù) 制備土樣稀釋液 培養(yǎng)基的準(zhǔn)備 傾注法接種 保溫培養(yǎng) 計數(shù)菌落數(shù) 1 制備土樣稀釋液99ml無菌水10-21克1ml10-310-410-510-6另留一管不稀釋留作對照（CK）吹吸三次混勻無菌操作 2 培養(yǎng)基的準(zhǔn)備 融化牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，融化后保溫在48。并取6個無菌培養(yǎng)皿，分別在皿底貼好標(biāo)簽，注明10-5、10-6、CK（每個稀釋度要兩個平行皿，對照要兩個平行皿）。 標(biāo)簽班級：組號：濃度： 先按10-6，10-

3、5的順序?qū)⒉煌♂尪染鷳乙航尤雽?yīng)平皿中（每個平皿接入1ml），再向每個平皿傾注約15 ml的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（48）待冷凝，混合均勻。3 傾注法接種1ml1ml1ml1ml99ml無菌水9毫升無菌水1ml1ml1mlCK對照10-210-3土樣1克10-410-510-61ml1ml1ml4 保溫培養(yǎng)將已經(jīng)接種的平皿靜置10min后，放入溫箱倒置培養(yǎng)3-5日（30），觀察結(jié)果。 30培養(yǎng)1ml1ml1ml1mlCK對照10-510-61ml1ml1ml1ml5 計數(shù)稀釋度10-510-6CK對照平板121212菌落數(shù)各濃度平均菌落數(shù)各濃度平均菌落數(shù)減CK平均菌落數(shù)每克濕土樣細(xì)菌數(shù)量 平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)土壤樣品水分系數(shù)1（1樣品水分百分?jǐn)?shù)） 土壤樣品細(xì)菌數(shù)量（個克干土）每克濕土樣細(xì)菌數(shù)量樣品水分系數(shù)四 實驗報告1 實驗?zāi)康? 實驗原理3 實驗數(shù)據(jù)及計算結(jié)果記錄4 思考題思考題下次實驗內(nèi)容：實驗八微生物生理生化特性檢測 1牛肉膏蛋白胨平板