實驗一普通生物顯微鏡的使用市公開課獲獎課件

1、試驗一、普通生物顯微鏡使用(一)動、植物細胞、真菌觀測及生物繪圖法第1頁第1頁一、實驗目：1.理解普通光學顯微鏡和體視顯微鏡基本構 造及功用，并正確掌握使用和維護辦法。 2. 觀測一些真核細胞結構，學習基本生物繪 圖辦法。3. 學習暫時裝片制作辦法。第2頁第2頁二、試驗原理：（一）、顯微鏡概述： 顯微鏡是觀測細胞主要工具。依據(jù)光源不同，可分為光學顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。第3頁第3頁（二）、顯微鏡創(chuàng)造：1. 最早由荷蘭眼鏡商在16前后制造，它 結構簡樸，放大倍數(shù)只有1030倍，能夠 觀測一些小昆蟲，如跳蚤等，因而有些人稱它 為“

2、跳蚤鏡”。這種顯微鏡是用光線照明，屬于光學顯微鏡。第4頁第4頁2. 英國物理學家羅伯特虎克（Robert Hooke， 1635 1703）研制出能夠放大140倍光學顯微 鏡，并用它來觀測軟木薄片，發(fā)覺了細胞。第5頁第5頁3. 1673年有個名叫列文.虎克（Antoni van Leeuwenhoek）荷蘭人用自己制造顯微鏡觀測到了被他稱為“小動物”微生物世界。他也被稱為微生物開山祖。第6頁第6頁4. 1938年，德國工程師魯斯卡（ Ernest Ruska, 1906-1988) 制造出世界第一臺透射電子顯微鏡 （TEM）。1952年，英國工程師Charles Oatley 制造出第一臺掃描

3、電子顯微鏡（SEM）第7頁第7頁（三）、顯微鏡分辨率: 分辨率：也稱為分辨力，它是指能把兩個物點分 辨清楚最小距離。 分辨率數(shù)值越高，分辨距離越大，則分辨率越低。反之亦然。因此，分辨率是以分辨距離來表示。 其計算公式為: D=0.61入/NA NA=n sina/2 式中D為分辨率，A為光波波長，NA為物鏡數(shù)值孔徑(鏡口率)。 第8頁第8頁 在物鏡上，有鏡口率(N.A.)標志，它反應當鏡頭 分辨力大小，其數(shù)字越大，表示分辨率越高。各物鏡鏡口率下列表： 物鏡 鏡口率(N.A.) 工作距離(mm) 10 0.25 5.40 40 0.65 0.39 100 1.30 0.11顯微鏡總放大倍數(shù)=目鏡

4、放大倍數(shù)物鏡放大倍數(shù) 公式為: M = K1 K2 第9頁第9頁焦點深度: 顯微鏡調(diào)焦到看清標本某一點時，不 僅是這一物點，并且它上下兩側也 能看清楚厚度叫做焦點深度。 要看到標本全厚度，必須調(diào)整螺旋 仔細地從上到下進行觀測。第10頁第10頁三、材料和儀器：儀器：普通光學顯微鏡、體視鏡（附顯微用具： 擦鏡紙、香柏油、二甲苯、載玻片、蓋玻片）材料與器材：新鮮酵母液、滴管、鑷子、培養(yǎng) 皿、標本盒（內(nèi)有各種裝片）第11頁第11頁四、試驗環(huán)節(jié)：（一）普通顯微鏡使用及維護：I .光學顯微鏡結構普通生物顯微鏡由2部分構成：光學部分：包括物鏡、目鏡、光源、聚光器，是顯 微鏡主體。：機械部分：包括鏡筒、鏡臂、

5、鏡座、鏡臺(載物臺）、 調(diào)整旋鈕、物鏡轉換器等，用于固定材 料和觀測以便。第12頁第12頁II .顯微鏡使用1. 觀測前準備工作 .顯微鏡在使用之前應檢查一下它各個部件是否 完整和正常，并對載物臺、目鏡、物鏡以及聚光 器上端透鏡進行必要清潔工作。然后進行調(diào)整。 .觀測時要雙眼同時睜開，一邊觀測一邊進行統(tǒng)計 或描繪。 .觀測時所用材料、藥物和各種器具要預先備好第13頁第13頁2. 使用辦法： （1）低倍鏡使用：觀測任何標本，均需從低倍鏡 開始。 檢查：檢查顯微鏡是否完好。 準備：將顯微鏡放于前策略偏左，轉動粗調(diào)旋鈕 將載物臺下降，旋轉物鏡轉換器使低倍鏡正對通 光孔。 對光： 放標本片： 調(diào)整焦距

6、 計算放大倍數(shù)：第14頁第14頁錯誤原因：如按上述操作，仍然看不到圖象， 也許有下列原因：A. 轉動調(diào)整太快，超出焦點，需重新調(diào)整。B. 物鏡未對準通光孔。C. 標本沒放在視野內(nèi)，需移動標本片尋找觀測 對象。D. 光線太強或太弱。尤其觀測透明或未染色標 本時，應將光線調(diào)稍暗些，有利觀測。第15頁第15頁（2）高倍鏡使用： 依照上述操作環(huán)節(jié)，先用低倍鏡找到清楚物象， 將需要觀測部分移到視野中央， 眼睛從側面注視物鏡，移動轉換器，換高倍鏡， 看目鏡，微調(diào)細調(diào)旋鈕，至看到清楚物象。 第16頁第16頁錯誤原因：如按上述操作，仍然看不到圖象， 也許有下列原因：A. 觀測標本不在視野內(nèi)。應在低倍鏡下找到

7、后，移到視野中央，再換高倍鏡觀測。B. 標本放反了。C. 焦距未調(diào)好。第17頁第17頁（3）油鏡使用： 先用低倍鏡觀測標本情況。 換高倍鏡，把需觀測部分移至視野中央。 將聚光器升至最高位置，光圈開至最大。 在蓋玻片所要觀測位置滴一小滴香柏油， 放于載物臺。 把油鏡移至工作位置。 第18頁第18頁 慢慢調(diào)整粗細調(diào)整旋鈕，使載物臺緩慢上升，同 時細心從側面觀測物鏡前端與標本之間距離。 先使物鏡前端與油滴接觸，再慢慢上升載物臺， 至物鏡前端靠近而沒有碰觸到蓋玻片為止。（小 心損傷油鏡或裝片） 眼睛從目鏡觀測，緩慢調(diào)整細調(diào)旋鈕至看清標本（注意只能下降載物臺）第19頁第19頁 觀測完畢，下降載物臺，使油

8、鏡離開光軸，及時做好油鏡清潔工作（先用潔凈擦鏡紙擦去大部分香柏油，再用二甲苯滴濕擦鏡紙擦拭兩次，最后用干擦鏡紙擦拭一次）。 玻片上油可用“拉紙法”擦去：把一小張擦鏡紙蓋在載玻片油滴上，其上滴一兩滴二甲苯，趁濕把紙往外拉，連續(xù)幾次，即可擦凈（注意不要使用過多二甲苯，并及時擦潔凈上面香柏油，以免使裝片受損）。第20頁第20頁注意：假如不出現(xiàn)物象或者目的不抱負要重找，A. 在加油區(qū)之外重找時應按：低倍高倍 油鏡程序。 B. 在加油區(qū)內(nèi)重找應按：低倍油鏡程序， 不得經(jīng)高倍鏡，以免油沾污鏡頭。 第21頁第21頁3. 顯微鏡使用后復原：（1）下降聚光器約1cm，（2）使物鏡離開光軸，使通光孔正隊兩個物鏡中

9、 間，提升載物臺至本來位置，（3）把載物臺上標本移動器移至適當位置，（4）關閉電源。第22頁第22頁4、顯微鏡使用注意事項（1）持鏡時必須是右手握臂、左手托座姿勢，不 可單手提取，以免零件脫落或碰撞到其它地方。（2）輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在試驗臺邊 緣，以免碰翻落地。（3）保持顯微鏡清潔，光學和照明部分只能用擦 鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機械部分 用布擦拭。（4）水滴、酒精或其它藥物切勿接觸鏡頭和載物臺 假如沾污應馬上擦凈。第23頁第23頁（5）放置玻片標本時要對準通光孔中央，且不能 反放玻片，預防壓壞玻片或碰壞物鏡。（6）要養(yǎng)成兩眼同時睜開習慣，以左眼觀測視 野右眼用以繪圖。（7）

10、不要隨意取下目鏡，以預防塵土落入物鏡， 也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。（8）使用完畢后，必須復原才干放回鏡箱內(nèi)。第24頁第24頁（二）、體視鏡使用 體視顯微鏡又稱實體顯微鏡，它在觀測物體時能產(chǎn)生正立三維空間影像。立體感強，成像清楚和寬敞，又含有長工作距離，并可依據(jù)觀測物特點選取不同反射和透射光照明，是合用范圍非常廣泛常規(guī)顯微鏡。第25頁第25頁（三）、標本觀測“5 ”字片：低倍人血涂片：低倍 高倍 油鏡兔精蟲涂片：低倍 高倍單層扁平上皮：低倍 高倍動、植物細胞有絲分裂切片：低倍 高倍日本血吸蟲雌雄合抱裝片：肉眼 低倍第26頁第26頁（四）、酵母暫時裝片制作1. 滴一滴鮮酵母液于潔凈載玻片上

11、，2. 輕輕蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)氣憤泡，3. 低倍、高倍鏡下觀測。注意：觀測時注意光線不要太強，以免影響觀測 效果。第27頁第27頁（五）生物學繪圖辦法：1. 用2H鉛筆繪輪廓，用HB鉛筆描深，線條要光滑，2. 圖及文字部分全部用鉛筆，文字用漢字楷書，3. 繪圖紙上端寫清試驗名稱，中部畫圖，下部寫清所繪圖名稱、放大倍數(shù)，4. 標明圖中各部分名稱，用直線引線并標在圖右側，名稱較多時，可先標在右側，再標在左側，5. 可用光滑黑點表示明暗不同，不可大面積涂黑。第28頁第28頁五、作業(yè)：1. 繪圖：繪出你用油鏡所觀測到人紅細胞視野圖。2. 思考題： （1）總結使用顯微鏡應尤其注意幾種問題。 （2）從低倍物鏡轉高倍物鏡時應注意哪幾點？ （3）接物鏡上各銘文有何意義？ （4）用油鏡觀測和嗣后操作環(huán)節(jié)。為何要 用香柏油作介質？尚有哪些