創(chuàng)新類中期進(jìn)度報(bào)告

1、華技大學(xué)中期進(jìn)項(xiàng)目名稱：MMP-1 癌放射性肺損傷的分析項(xiàng)目華技大學(xué)中期進(jìn)項(xiàng)目名稱：MMP-1 癌放射性肺損傷的分析項(xiàng)目性 男2010教授性 男2010教授醫(yī) 分 否否是過對(duì)非小細(xì)胞癌 放射性治療后肺損傷情況與MMP-1啟動(dòng)子單核苷酸多態(tài)點(diǎn)，以及 ，學(xué)術(shù)上 一篇高質(zhì)量SCI應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌肺部放療后肺損傷的預(yù)后分析，通過發(fā)現(xiàn)遺傳多態(tài)性靶點(diǎn)和標(biāo)志物為臨床非小細(xì)癌的精治以及放療后提供姓 10 級(jí)八年樣本搜腫瘤學(xué)博技術(shù)指腫瘤學(xué)博數(shù)據(jù)分肺癌是人類最常見的 之一，其 率已位居全部 死因的首位1。放射治療是非小細(xì)胞肺癌重要的局部治療 ，但放射線在殺滅腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，不可量造成極大影響，甚至可導(dǎo)致患者 。

2、既往對(duì)放射性肺損傷的研究主要局限于臨床和放射物理參數(shù)方面,但這些參數(shù)僅占放射性肺損傷 的三分之一5。同樣的照射方法MMP-1是一類依賴金屬鋅離子的蛋白水解酶，對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解、組織重相關(guān)的蛋白水解酶，與許多 的發(fā)生密切相關(guān)。MMP-1 已經(jīng)證實(shí)在一些炎癥反應(yīng)以及 化病理過程中高表達(dá)，發(fā)生機(jī)制與反射性肺損傷類似，其表達(dá)的量與啟動(dòng)子的單核苷酸多態(tài)性相關(guān)，但在非小細(xì)胞肺癌患者的體內(nèi)，MMP-1 (一) 項(xiàng)目背(一) 項(xiàng)目背既往對(duì)放射性肺損傷的研究主要局限于臨床和放射物理參數(shù)方面,如患者 、吸煙狀3,4。但這些參數(shù)僅占放射性肺損傷 的三分之一5。同MMP-1 全稱matrix metall

3、opeptidase 1，基質(zhì)金屬蛋白酶1，位于第11 號(hào)全長8.2kb，mRNA 全長1,973nt，共有10 個(gè)外顯子，編碼由469 個(gè)氨基的發(fā)生密切相關(guān)8-10。MMP-1 已經(jīng)證實(shí)在一些炎癥性位點(diǎn)：-1607（rs1799750，519AG (rs1144393)，422AT (rs475007)， 340 AG(rs514921)320TC (rs494379)MMP-1 的表達(dá)相關(guān)7-9，但在非小細(xì)胞肺癌患者的體內(nèi)，MMP-1 單核苷酸多態(tài)性是否會(huì)影響反射性肺損傷的易感性還鮮為人知，明確單核苷酸的多態(tài)性與放射性肺損傷的靶向位點(diǎn)，對(duì)于肺癌 放療的預(yù)后的 有很大的臨床意向位點(diǎn)，對(duì)于肺癌

4、 放療的預(yù)后的 有很大的臨床意義。本研究通過對(duì)非小細(xì)胞肺癌放療后的 的肺損傷發(fā)生率以及 MMP-1 啟動(dòng)子位點(diǎn)MMP-1MMP-1 啟動(dòng)子單核苷酸多態(tài)性在非小細(xì)胞肺癌放射性肺損傷的 分析的價(jià)值。(二) 立項(xiàng)依1、(二) 立項(xiàng)依1、研究證實(shí)放射性肺損傷的發(fā)生不僅與臨床和放射物理參數(shù)方面,如患者2MMP-1對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)3、MMP-1 已經(jīng)證實(shí)在一些炎癥反應(yīng)以及4MMP-1 表達(dá)的量與其啟動(dòng)子的單核苷酸多態(tài)性相關(guān)，不同人群由于多態(tài)性的差異會(huì)使(三) 項(xiàng)目目的與創(chuàng)新1、探索MMP-1的表達(dá)量在非小細(xì)胞肺2MMP-13、 分析比較不同MMP-1 啟動(dòng)子單核苷酸多態(tài)性分子靶點(diǎn)在不同非小細(xì)胞肺癌

5、后評(píng)(四) 國內(nèi)1、 目前對(duì)放射性肺損傷的研究主要局限于臨床和放射物理參數(shù)方面,如患者 、吸煙狀(四) 國內(nèi)1、 目前對(duì)放射性肺損傷的研究主要局限于臨床和放射物理參數(shù)方面,如患者 、吸煙狀2MMP-1 已經(jīng)證實(shí)在一些炎癥反應(yīng)以及 化病理過程中高表達(dá)，如：風(fēng)濕性動(dòng)脈炎以及肺 化等，發(fā)生機(jī)制與反射性肺損傷類似。3MMP-1 -1607（rs1799750， 519AG (rs1144393)422AT (rs475007)， 340 AG (rs514921)， 320TC (rs494379)MMP-1 的表達(dá)相關(guān)4MMP-1 單核苷酸多態(tài)性是否會(huì)影響反射性肺損傷的易(五) 相關(guān)技術(shù)的未來發(fā)展趨

6、1、 通過發(fā)現(xiàn)遺傳背景差異對(duì)放射性肺損傷的影響在臨床中對(duì)于放療 (六) 市場分1MMP-1 啟動(dòng)子單核苷酸多態(tài)性與放射性肺損傷相關(guān)的分子靶點(diǎn)設(shè)計(jì)的靶點(diǎn)藥物用于預(yù)2(七) 研究基礎(chǔ)及條件（包括已具(七) 研究基礎(chǔ)及條件（包括已具備的研究條件和需要其提或須新添置的研究設(shè)備等3 (八) 研究內(nèi)1、探索MMP-1的表達(dá)量在非小細(xì)胞肺2MMP-13、 分析比較不同MMP-1 啟動(dòng)子單核苷酸多態(tài)性分子靶點(diǎn)在不同非小細(xì)胞肺癌2CT2CTX3CommonTerminologyCriteriaforAdverseEvents4.04HapMapHCBdata 數(shù)據(jù)庫的使用 5theMassArraysystem

7、檢測 型 6PCR 擴(kuò)增技術(shù)7SpectroCHIParray9ELISA10、SPSS統(tǒng)計(jì)的使(十) 預(yù)期成12MMP-134一篇高質(zhì)量(十一) 進(jìn)度(十一) 進(jìn)度 材料準(zhǔn)備與預(yù)實(shí)驗(yàn) 臨床實(shí)驗(yàn)20161月-2016 12 月間接受放射性劑量45Gy 的非小細(xì)胞肺癌的 ，腫瘤科放療室醫(yī)生對(duì)所有 放療后 1 個(gè)月進(jìn)行評(píng)估，第一年，每三個(gè)月進(jìn)行一次隨訪,以后每六 Common Terminology Criteria for Adverse Events 4.0 評(píng)分法進(jìn)行損傷分級(jí)。 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)通過 提取DNAPureLink Genomic DNA Mini Kit MMP-15個(gè)位點(diǎn)（rs

8、1799750,rs1144393,rs475007rs514921rs494379，所有的位點(diǎn)在HapMap HCB data 數(shù)據(jù)庫中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 型通過 MassArray system檢 估，DNAPCRSpectroCHIParray來檢測單核苷酸多的肺癌領(lǐng)近組織，固定后包埋切成4mm厚度，對(duì)觀察部分脫蠟后進(jìn)行一級(jí)抗體孵化，使用抗 MMP-1 抗體進(jìn)行靶區(qū)免疫組化染色，在 Nikon Eclipse TE2000-S 顯微鏡下觀察染況，并使用Image-Pro Plus 6.0C.ELISA 分析：放療 3-6 個(gè)月后同一相對(duì)時(shí)間選取隊(duì)列研究中滿足條進(jìn)行 MMP-1 蛋白ELI

9、SA定量分析，收集數(shù)據(jù)后使用SPSS統(tǒng)計(jì)進(jìn)行分析 撰寫(十二)已完(十二)已完成的進(jìn)度計(jì)1、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備（已完成 材料準(zhǔn)備與預(yù)實(shí)驗(yàn) 臨床實(shí)驗(yàn)（已完成20161月-20166月間接受放射性劑量45Gy的非小細(xì)胞肺癌的 （n=84，腫瘤科放療室醫(yī)生對(duì)所有 放療后 1 個(gè)月進(jìn)行評(píng)估，第一年，每三個(gè)月進(jìn)行一次隨訪,以for Adverse Events 4.0 評(píng)分法進(jìn)行損傷分級(jí)。 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（通過 提取DNAPureLink Genomic DNA Mini Kit MMP-12個(gè)位點(diǎn)（rs1799750,rs1144393,rs475007rs514921rs494379，所有的位點(diǎn)在HapMap HCB data 數(shù)據(jù)庫中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 型通過 MassArray system檢 估，DNAPCRSpectroCHIParray來檢測單核苷酸多陽性位點(diǎn) 免疫組化分析（部分完成14 位 的肺癌領(lǐng)近組織，固定后包埋切成 4mm 厚度，對(duì)觀察部分脫蠟后進(jìn)行一級(jí)抗體孵化，使用抗 MMP-1 抗體進(jìn)行靶區(qū)免疫組化染色，在 Nikon Eclipse TE2000-S 顯微鏡下觀察染 況