乳酸脫氫酶試劑盒說明書

1、貨號：MS1001規(guī)格：100管/48樣乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase LDH ）試劑盒說明書 微量法 正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：LDH （EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是糖酵解途徑的末端 酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應，伴隨著NAD+/NADH之間互變。測定原理：LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與2, 4 -二硝基苯肼作用生成丙酮酸 二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。自備實驗用品及儀器：可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微

2、量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制：提取液：60mLx 1瓶，4C保存；試劑一：液體5mLx 1瓶，4C保存；試劑二：粉劑X1支，-20C保存，用時加入1.3 mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑 分裝后-20C保存，禁止反復凍融；試劑三：液體5 mLx1瓶，4避光保存；試劑四：液體20mLx 1瓶,4保存;樣品測定的準備：1、細菌、細胞或組織樣品的制備：細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為10005000: 1的比例（建議2000萬細菌或細胞加入1 mL提取液）， 超聲波破碎細菌或細胞（冰浴

3、,功率20%或 200W,超聲3s，間隔10s,重復30 次）; 8000g 4 離心10min,取上清，置冰上待測。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1： 510的比例（建議稱取約0.1g組織， 加入1 mL提取液），進行冰浴勻漿 8000g 4離心10min,取上清，置冰上待測。2、血清（漿）樣品：直接檢測。測定步驟：1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm，蒸餾水調(diào)零。2、樣本測定（在EP管中加入下列試劑）試劑名稱（M L）測定管對照管樣本1010試齊H5050試劑二10蒸餾水10充分混勻，37（哺乳動物）或25（其它物種）準確水浴15min試劑三505

4、0充分混勻，37C(哺乳動物)或25C(其它物種)準確水浴15min試劑四150150充分混勻，室溫靜置15min, 450 nm下測定吸光度，計算AA=A測定管-A對照管。每個測定 管需要設一個對照管。LDH活力單位的計算：用微量石英比色皿測定的計算公式如下1、標準條件下測定的回歸曲線，y = 0.725x(x為標準品濃度，“mol/mL; y為對吸光度)。2、血清(漿)LDH活力的計算單位的定義：每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生lnmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。 LDH (nmol/min/mL)二AA + 0.725 +Tx 103=92 xAA3、細胞、細菌和組織中LDH活力的計算按

5、樣本蛋白濃度計算：單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。 LDH (nmol/min/mg prot)二AA + 0.725xV1 + (V1xCpr)+Tx 103 =92 xAACpr 需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。按樣本鮮重計算：單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。LDH (nmol/min/g 鮮重)二AA + 0.725xV1 + (WxV1+V2)+Tx 103 =92 xAA + W按細菌或細胞密度計算：單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活

6、力單位。 LDH (nmol/min/104 cell) = AA + 0.725xV1 + (2000 xV1+V2)+Tx 103 =0.046xAA V1:加入反應體系中樣本體積，0.01mL; V2 :加入提取液體積，1mL; T:反應時間，15 min; Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/mL; W:樣本質(zhì)量，g; 2000：細胞或細菌總數(shù)，2000萬；103： 1umol/mL=103 nmol/mL。使用96孔板測定的計算公式如下：1、標準條件下測定的回歸曲線，y = 0.3625x (x為標準品濃度，“mol/mL; y為對吸光度)。2、血清(漿)LDH活力的計算單位的定義：每mL血清

7、(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。LDH (nmol/min/mL)二AA + 0.3625 +Tx 103=184xAA3、細胞、細菌和組織中LDH活力的計算按樣本蛋白濃度計算：單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。 LDH (nmol/min/mg prot)二AA + 0.3625xV1 + (V1xCpr)+Tx 103 =184xAACpr 需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。按樣本鮮重計算：單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。LDH (nmol/min/g 鮮重)二AA + 0.3625xV1 + (WxV1+V2)+Tx 103 =184x AA-W按細菌或細胞密度計算：單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。LDH (nmol/min/104 cell) = AA + 0.3625xVl + (2000 xVl+V2)+Txl03 =0.092xAA VI:加入反應