百令菌種鑒定

1、杭州中美華東制藥百令膠囊菌種鑒定目前世界上已發(fā)現(xiàn)同屬“蟲草屬”的蟲草已有三百五十種之多，其中在中國已發(fā)現(xiàn)過六十余種，包含：冬蟲夏草和蟲草冬蟲夏草（C.sinensis） 北冬蟲夏草(C.militaris)大團(tuán)蟲草（C.ophioglossoides） 亞香棒蟲草(C.hawkesii) 古尼蟲草(C.gunnii) 珊瑚蟲草(C.martialis)鐮刀狀蟲草(C.falcata ) 泰山蟲草(C.taishanensis）山西蟲草(C.shanxiensis) 涼山蟲草(C.liangshanensis)新疆蟲草(C.gracilis ) 香棒蟲草(C.barnesii)等雖然已發(fā)現(xiàn)的品種

2、繁多，但其中具有藥用價(jià)值的品種卻并不多；有些還具有毒性，錯(cuò)誤服用后可能會直接破壞人體的肌體功能。冬蟲夏草和蟲草最具有價(jià)值的是： 冬蟲夏草 （Cordyceps sinensis（Berks.）Sacc.）冬蟲夏草的藥用價(jià)值公元780年，西藏的藏本草首次記載了冬蟲夏草的藥學(xué)功效。作為治病、防病、強(qiáng)身的藥物已有一千二百年的歷史。與人參、鹿茸一起被譽(yù)為國藥三大寶。天然冬蟲夏草性溫、味甘，歸經(jīng)入肺、腎二經(jīng)。歷部 中華人民共和國藥典記載其功用為：補(bǔ)肺益腎，化痰、平喘，主治久咳虛喘，勞嗽咯血，陽痿遺精，腰膝酸軟，食欲不振，老人畏寒，病后久虛不復(fù)，及治諸虛百損等病癥。 冬蟲夏草的藥用價(jià)值冬蟲夏草什么是冬蟲夏

3、草？冬蟲夏草是一種昆蟲和真菌的復(fù)合體。被寄生的蟲體是蟲草蝙蝠蛾的幼蟲。寄生的真菌是冬蟲夏草菌（cordyceps sinensis (BerK.)Sacc.），它屬于真菌門，子囊菌綱，肉座菌目，麥角菌科，蟲草菌屬，蟲草種。 8月左右雪線以下，陰坡半陰坡5月5-15日8-9月間3-10攝氏度子囊孢子感染蝙蝠蛾幼蟲菌核（10月到次年五月,菌絲束）子座7月下旬子囊成熟分生孢子 長出牙管僵蟲冬蟲夏草生活史形成僵蟲過程23天內(nèi) 長出牙管冬蟲夏草主要通過露出地面的子座識別。采摘時(shí)通常在子座的周圍挖一個(gè)坑，將蟲體包含在內(nèi)，連土一起取出，破壞大量的植被，掠奪式采挖生態(tài)環(huán)境破壞極其嚴(yán)重。國家制定實(shí)施了有關(guān)蟲草資

4、源采集管理的相關(guān)法規(guī)。冬蟲夏草的采集冬蟲夏草保護(hù)和開發(fā)的難題人工培育尚有許多課題亟待解決。全國先后有60多個(gè)科研單位參加冬蟲夏草研究，但在人工培育的菌種接種、重復(fù)批量培育出子座上還有一定困難，要完全實(shí)現(xiàn)人工培育還有相當(dāng)距離。野外大面積半人工培植冬蟲夏草雖在幾個(gè)地區(qū)展開，也還有許多技術(shù)問題需要解決。Hirsutella hepiali chen et shen,sp.nov 中國被毛孢（百令）Paecelonvyces hepiali 蝙蝠蛾擬青霉（金水寶）Mortierella hapialia 蝙蝠蛾被孢霉（至靈）Cephalosporium dongchongxiacao 蟲草頭孢菌（寧心

5、寶）等等。市場上冬蟲夏草菌種很多，也很混亂人工蟲草制劑劉錫琎，真菌學(xué)報(bào)8（1）確定哪些菌種是真正的冬蟲夏草菌種，關(guān)鍵是能將分離出的菌株在產(chǎn)地接種在蝙蝠蛾幼蟲體上，或人工離體培養(yǎng)使之能長出含子囊孢子的子座來，才能肯定該菌種是真正的冬蟲夏草菌種。目前能達(dá)到這個(gè)水平的菌種只有一個(gè)，是中國被毛孢。 (Hirsutella hepiali chen et shen,sp.nov） 百令菌種是真正冬蟲夏草菌種誰是真正的冬蟲夏草菌種？專利號: 851019714天然冬蟲夏草子座與人工冬蟲夏草子座的形態(tài)完全一樣生活史一致在培養(yǎng)基中長出的人工子座生活史一致百令膠囊所使用的生產(chǎn)菌種是目前能在人工培養(yǎng)基上完成與天然

6、冬蟲夏草一致生活史的唯一菌種。結(jié)論 中科院微生物研究所開展了冬蟲夏草及其相關(guān)類群的分子系統(tǒng)學(xué)分析的課題（創(chuàng)新經(jīng)費(fèi)贊助(編號0110)）。由魏鑫麗博士、印象初院士、郭英蘭研究員、沈南英研究員、魏江春院士進(jìn)行了該課題。分子水平一致研究目標(biāo)中華束絲孢與冬蟲夏草之間的親緣關(guān)系？冬蟲夏草菌Cordyceps sinensis中國被毛孢Hirsutella sinensis中華束絲孢Synnematium sinense蝙蝠蛾擬青霉Paecilomyces hepiali親緣關(guān)系？供試材料編號、名稱、產(chǎn)地及提供者編號菌株號名 稱產(chǎn)地（供者）有性型S4=Cs-Q無冬蟲夏草（Cordyceps sinensi

7、s (Berk.) Sac.） 青海（沈南英） G3=Cs-S無冬蟲夏草（Cordyceps sinensis (Berk.) Sac.) 四川（郭英蘭） 無性型G2=Hs-SGuo-2中國被毛孢（Hirsutella sinensis Liu et al.） 四川（郭英蘭） S1=Ss-Q0207中華束絲孢（Synnematium sinenseYin & Shen） 青海（沈南英） S2=Ss-Q上020中華束絲孢 (Synnematium sinense Yin & Shen) 青海（沈南英） S3=SsKD0205 F9中華束絲孢 (Synnematium sinense Yin &

8、Shen) 青海（沈滄） S5=PhCs-4蝙蝠蛾擬青霉（Paecilomyces hepiali Chen et Dai）青海（沈南英）外群G4=Pm-Guo無蛹草擬青霉（Paecilomyces militaris Liang） 吉林（郭英蘭） 總DNA提?。?采用改良CTAB法（Rogers & Bendich, 1988）。DNA隨機(jī)擴(kuò)增多型性(RAPD)分析擴(kuò)增反應(yīng)：955分鐘，1個(gè)循環(huán)，94，1分鐘，361分鐘，72 2分鐘，40個(gè)循環(huán)；最后722分鐘。擴(kuò)增產(chǎn)物在1.5%瓊脂糖凝膠中電泳，80V，2小時(shí)。隨機(jī)引物的選用： 從華美公司試劑盒中選擇了6個(gè)隨機(jī)引物： S23（AGTCAG

9、CCAC）， S33（CAGAACCCAC）， S61（TTCGAGCCAG）， S146（AAGACCCCTC）， OPW-06（AGGCCCGATG）， OPV-14（AGATCCCGCC）。RAPD反應(yīng)體系（25l）含有：25mM MgCl2 1.5l，2.5mM dNTP 1.5l，10M 引物2l，10Buffer 2.5l，3U/l Taq酶0.5l，模板（稀釋50倍）0.5l，無菌去離子水16.5l。6個(gè)隨機(jī)引物的圖譜分子水平一致利用PAUP分析6條引物的RAPD圖譜所得的樹型圖（Distance method；bootstrap=1000；UPGMA），節(jié)間數(shù)字代表bootst

10、rap值。PCR擴(kuò)增、測序及分析：通過PCR從供試菌株總DNA中進(jìn)行核rDNA ITS區(qū) (ITS1-5.8S-ITS2)堿基序列的擴(kuò)增；引物選用ITS4和ITS5 (White et al., 1990)；PCR產(chǎn)物由上海博亞和基康公司測序。測序結(jié)果利用軟件DNAMAN 4.0進(jìn)行比對；利用Mega 2進(jìn)行系統(tǒng)學(xué)分析（Kumar et al., 2001）；采用Kimura 2-parameter模式，存在缺失時(shí)成對刪除；構(gòu)建系統(tǒng)關(guān)系樹采用NJ 法，重復(fù)運(yùn)算1000次（bootstrap=1000）。nrDNA間隔區(qū)(ITS)序列分析中間省略分子水平一致分子水平一致節(jié)間數(shù)字代表bootstr

11、ap值（低于50因不是同一類群而未標(biāo)識）。分子水平一致內(nèi)群1冬蟲夏草 Cordyceps sinensis中國被毛孢 Hirsutella sinens 中華束絲孢外群2蝙蝠蛾擬青霉 Paecilomyces hepiali外群3蛹草擬青霉 Paecilomyces militaris2010年版國家藥典刊登書籍:記述內(nèi)容:關(guān)鍵內(nèi)容:中華人民共和國藥典2010年版百令膠囊藥典標(biāo)準(zhǔn)百令膠囊成份的更改2010年版國家藥典關(guān)鍵內(nèi)容:詳細(xì)陳述:具體影響:百令膠囊成份的更改百令膠囊為發(fā)酵冬蟲夏草菌粉目前市場上，百令膠囊為唯一的發(fā)酵冬蟲夏草菌粉，區(qū)別于其他蟲草制劑百令膠囊應(yīng)用于多個(gè)科室藥理研究【性味】 甘、溫【歸經(jīng)】 入肺、腎二經(jīng)【功效】 補(bǔ)肺益腎，化痰、平喘