無菌檢查法驗證要點

1、浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司無菌檢驗方法驗證方案及報告 TOC o 1-5 h z 驗證方案申請人：日期：年月日驗證方案審核人：日期：年月日驗證方案審批人：日期：年月日浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司1概述無菌檢查法是為了檢查藥典要求無菌的醫(yī)療器械產品是否無菌而建立的檢查法，是作為批準無菌產品放行的檢驗或監(jiān)督部門對無菌產品質量監(jiān)督中的一個重要項目。它是根據用于實驗的培養(yǎng)基中是否有微生物生長來判定樣品的無菌性，液體培養(yǎng)基變渾濁一般表明樣品受微生物的污染。基于微生物污染的不均勻性，使無菌檢查法結果的可信度受許多因素制 約，如抑菌因素、檢查法、檢驗量、檢查用的培養(yǎng)基質量、操作環(huán)境、無菌技術等。檢驗 方法的驗證是

2、現代質量保證體系中關系到質控技術、方法、手段的科學性、準確性的重要組成部分，是保證檢驗結果的公正、科學、準確的基礎 。2驗證目的對本公司所采用的直接接種無菌檢查法進行分析驗證，以證明所采用的方法適合于本 公司產品的無菌檢查。3實驗原理直接接種法是通過加入一定的抑菌中和劑，以方便而快捷地中和抑菌劑，消除抑菌作 用，從而消除抑菌作用對無菌檢查的影響。本實驗通過設計對照試驗對直接接種法所加入的抑菌劑的中和效果進行驗證，從而得 出直接接種法無菌檢驗的有效性。4驗證范圍實用于本公司所采用的直接接種法進行的無菌檢驗過程驗證。5執(zhí)行程序文件編碼文件名稱存放部門HY-QC-012尢菌檢驗操作規(guī)程品管部6職責姓

3、名職務職責劉傳杰經理負責驗證方案的批準實施、驗證報告的批準周德標QC驗證方案、驗證報告的起草并負責驗證過程中現場的監(jiān)控及取樣張思東QC負責按制訂無菌檢驗規(guī)程實施檢驗和驗證實驗7驗證內容建立樣品組、對照組及菌種活性檢查組，接種菌株到指定培養(yǎng)基，培養(yǎng)2472小時，比較觀察菌落的生長狀況，得出結論。8驗證指示物本實驗所用菌種為購于 浙江省食品藥品檢驗研究所標準菌株：金黃色葡萄球菌、白色念球菌、大腸埃希菌及生胞梭菌。浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司9實驗過程(1)培養(yǎng)基的配制用于大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于白色念球菌的改良馬丁培養(yǎng)基用于生抱梭菌的流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(2)供試品的制備創(chuàng)可貼供

4、試品：將包裝好的創(chuàng)可貼打開，用剪刀將創(chuàng)可貼剪碎，放入100ml pH7.0氯化鈉一蛋白月東緩沖液中浸泡1小時，取水層作為供試品。無菌敷貼供試品：將包裝好的無菌敷貼打開，用剪刀將無菌敷貼剪碎，放入100mlpH7.0氯化鈉一蛋白月東緩沖液中浸泡1小時，取水層作為供試品。(3)供試菌液的制備大腸埃希菌菌液：取經 35c培養(yǎng)19小時的大腸埃希菌培養(yǎng)物 1ml,加9ml生理鹽水， 10倍稀釋至約10-510-8之間，混勻備用。金黃色葡萄球菌菌液：取經35c培養(yǎng)19h小時的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物1ml,加9ml生理鹽水，10倍稀釋至約0-510-8之間，混勻備用。白色念球菌菌液：取經 25.5C培養(yǎng)72小

5、時的白色念珠菌真菌斜面培養(yǎng)物，加入生理鹽 水4ml洗下抱子，吸出轉移至空試管作為原液，取 1ml力口 9ml生理鹽水，10倍稀釋至10-6, 取1.2ml加生理鹽水9ml,混勻備用。生抱梭菌菌液：取經 35 c培養(yǎng)18h的生抱梭菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)物1ml,加9ml生理鹽水，10倍稀釋至10-6,混勻備用。(3)實驗設計實驗樣品組：按照本公司常規(guī)微生物檢驗方法進行，加入抑菌中和劑，最后接入已知 量的菌株(& 100cfu),培養(yǎng)觀察。陽性對照組：以0.1%的蛋白月東代替供試品，加入抑菌中和劑，最后接入同樣量的菌株， 培養(yǎng)觀察。陰性對照組：取與實驗樣品組等量的供試品，加入與中和劑等量的生理

6、鹽水，最后接 入已知量的菌株(w 100cfu),培養(yǎng)觀察菌種活性檢查組：直接將菌種接種到培養(yǎng)基上，培養(yǎng)觀察。10標準與判斷.如果實驗樣品組與陽性對照組的微生物計數相似，表明所用中和劑(中和劑類別及用 量)具有足夠的中和效力；.如果陽性對照組與菌種活性檢查組的微生物生長數量相似，表明所用的中和劑不影響微生物的生長。.陰性對照組微生物生長量應低于實驗組，才能證明供試劑有抑菌性，否則該實驗無意 義。.樣品組的平均菌檢計數結果不得低于對照組的70%,否則直接否定無菌檢驗方法。浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司11檢驗與記錄無菌檢查驗證實驗數據表（菌落數/皿）NO:供試品：實驗時間:試驗組名檢驗菌而一-實驗樣品

7、組陽性對照組陰性對照組活性檢查組大腸埃希 菌12345平均金黃色葡 萄球菌12345平均白色念球 菌12345平均生抱梭菌12345平均結論：實驗人:日期：年 月 日復核人：日期： 年 月 日浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司12編寫驗證報告(1)根據驗證方案設計實驗；(2)統(tǒng)計實驗數據編寫驗證報告。13再驗證周期及日常監(jiān)測(1)無菌檢查按所生產的每批次進行日常監(jiān)測；(2)當無菌檢查日常監(jiān)測出現不符合標準時，必須進行再驗證；(3)當無菌檢查方法發(fā)生改變和生產工藝發(fā)生改變時，必須重新驗證；(4)本驗證方案有效期為 1年。14驗證結果與評價實驗人對驗證實驗結果做好相關記錄并進行科學性評價；15驗證方案的批準

8、驗證小組審閱所有結果及評價分析意見，同意驗證結果，簽字并按此結論實施。浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司直接接種無菌檢查法驗證報告一實驗目的對本公司所采用的直接接種無菌檢查法進行分析驗證，以證明所采用的方法適合于本 公司產品的無菌檢查。二實驗原理直接接種法是通過加入一定的抑菌中和劑，以方便而快捷地中和抑菌劑，消除抑菌作 用，從而消除抑菌作用對無菌檢查的影響。本實驗通過設計對照試驗對直接接種法所加入的抑菌劑的中和效果進行驗證，從而得 出直接接種法無菌檢驗的有效性。三實驗步驟1、.培養(yǎng)基的配制大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌用的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：準確稱取營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基16.5g,加入500ml純化水，緩慢加熱使其完

9、全溶解。白色念球菌用的改良馬丁培養(yǎng)基：準確稱取改良馬丁培養(yǎng)基14.5g,加入500ml純化水，在加入6g瓊脂粉，加熱使其溶解。生抱梭菌用的流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基：準確稱取流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基14.5g,加入500ml純化水，在加入6g瓊脂粉，加熱使其溶解。將上述配制好的培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌鍋中115 C , 30min。2、供試品的制備創(chuàng)可貼供試品：將包裝好的創(chuàng)可貼打開，用剪刀將創(chuàng)可貼剪碎，放入 100ml pH7.0氯 化鈉一蛋白臍緩沖液中浸泡1小時，取水層作為供試品。無菌敷貼供試品：將包裝好的無菌敷貼打開，用剪刀將無菌敷貼剪碎，放入100mlpH7.0氯化鈉一蛋白月東緩沖液中浸泡1小時，取

10、水層作為供試品。3、供試菌液的制備：大腸埃希菌菌液：取經 35c培養(yǎng)19小時的大腸埃希菌培養(yǎng)物1ml,加9ml生理鹽水，10倍稀釋至約10-510-8之間，混勻備用。金黃色葡萄球菌菌液：取經35c培養(yǎng)19h小時的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物1ml,加9ml生理鹽水，10倍稀釋至約10-510-8之間，混勻備用。白色念球菌菌液：取經 255c培養(yǎng)72小時的白色念珠菌真菌斜面培養(yǎng)物，加入生理鹽 水4ml洗下抱子，吸出轉移至空試管作為原液，取 1ml力口 9ml生理鹽水，10倍稀釋至10-6, 混勻備用。生抱梭菌菌液：取經 35 c培養(yǎng)18h的生抱梭菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)物1ml,加9ml生理鹽水，10

11、倍稀釋至10-6,混勻備用。4、分別取上述兩種供試品100ml,加入抑菌中和劑，接入w100cfu菌株（大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念球菌及生抱梭菌分別進行實驗），再接種到每種菌株所需的上述培養(yǎng)基中，作為實驗樣品組。5、用0.1%的蛋白月東溶液代替供試品進行同上步驟操作，作為實驗陽性對照組。6、取與實驗樣品組等量的供試品，加入與中和劑等量的生理鹽水，再同第4步操作，作為陰性對照組。7、取100ml 0.1%蛋白月東溶液，不加中和劑直接接種等量菌株，再接種到培養(yǎng)基上，作為 菌種活性檢查組。浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司8、將接種好的培養(yǎng)皿放入恒溫培養(yǎng)箱中，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌及生抱梭菌培養(yǎng)溫

12、度為35 C,白色念球菌培養(yǎng)溫度為25.5 C,培養(yǎng)數天后，觀察并記錄菌落數。四實驗結果記錄無菌檢查驗證實驗數據表（菌落數 /皿）NO:1供試品：創(chuàng)可貼實驗時間:2驗組名 檢驗菌而實驗樣品組陽性對照組陰性對照組活性檢查組大腸埃希 菌12345平均金黃色葡 萄球菌12345平均白色念球 菌12345平均生抱梭菌12345平均結論：實驗人:日期：年 月 日復核人：日期： 年 月 日浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司無菌檢查驗證實驗數據表（菌落數/皿）NO:2供試品：創(chuàng)可貼實驗時間：一試驗組名菌種 實驗樣品組陽性對照組陰性對照組活性檢查組大腸埃希 菌12345平均金黃色葡 萄球菌12345平均白色念球國123

13、45平均生抱梭菌12345平均結論：實驗人：日期：年 月 日復核人：日期： 年 月 日浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司無菌檢查驗證實驗數據表（菌落數/皿）NO:3供試品：創(chuàng)可貼實驗時間:一試驗組名菌種 實驗樣品組陽性對照組陰性對照組活性檢查組大腸埃希 菌12345平均金黃色葡 萄球菌12345平均白色念球國12345平均生抱梭菌12345平均結論：實驗人：日期：年 月 日復核人：日期： 年 月 日浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司無菌檢查驗證實驗數據表（菌落數/皿）NO:4供試品：無菌敷貼實驗時間:一試驗組名菌種 實驗樣品組陽性對照組陰性對照組活性檢查組大腸埃希 菌12345平均金黃色葡 萄球菌12345平均白色念球國12345平均生抱梭菌12345平均結論：實驗人：日期：年 月 日復核人：日期： 年 月 日浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司無菌檢查驗證實驗數據表（菌落數/皿）NO:5供試品：無菌敷貼實驗時間:一試驗組名菌種 實驗樣品組陽性對照組陰性對照組活性檢查組大腸埃希 菌12345平均金黃色葡 萄球菌12345平均白色念球國12345平均生抱梭菌12345平均結論：實驗人：日期：年 月 日復核人：日期： 年 月 日10浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司無菌檢查驗證實驗數據表（菌落數/皿