制劑的質(zhì)量控制培訓教材

1、目錄TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc11401 3.2.P.5 制劑的質(zhì)量操縱 PAGEREF _Toc11401 3 HYPERLINK l _Toc28482 3.2.P.5.1 質(zhì)量標準 PAGEREF _Toc28482 3 HYPERLINK l _Toc18506 3.2.P.5.2 分析方法 PAGEREF _Toc18506 4 HYPERLINK l _Toc27982 3.2.P.5.2.1 性狀 PAGEREF _Toc27982 4 HYPERLINK l _Toc29403 3.2.P.5.2.2 鑒不 PAGEREF _Toc2940

2、3 4 HYPERLINK l _Toc13716 3.2.P.5.2.3 檢查 PAGEREF _Toc13716 4 HYPERLINK l _Toc8121 3.2.P.5.2.4 含量測定 PAGEREF _Toc8121 10 HYPERLINK l _Toc1293 3.2.P.5.3 分析方法的驗證 PAGEREF _Toc1293 11 HYPERLINK l _Toc31161 3.2.P.5.3.1 分析方法學驗證用樣品 PAGEREF _Toc31161 11 HYPERLINK l _Toc15858 3.2.P.5.3.2 有關(guān)物質(zhì)方法學驗證 PAGEREF _Toc

3、15858 11 HYPERLINK l _Toc6654 3.2.P.5.3.3 吡啶-3-磺酸方法學驗證 PAGEREF _Toc6654 21 HYPERLINK l _Toc7520 3.2.P.5.3.4 含量測定方法學驗證 PAGEREF _Toc7520 28 HYPERLINK l _Toc22423 3.2.P.5.3.5 溶出度測定方法學驗證 PAGEREF _Toc22423 32 HYPERLINK l _Toc31497 3.2.P.5.3.6 微生物限度檢查方法學驗證 PAGEREF _Toc31497 44 HYPERLINK l _Toc31968 3.2.P.

4、5.4 批檢驗報告 PAGEREF _Toc31968 44 HYPERLINK l _Toc19328 3.2.P.5.5 雜質(zhì) PAGEREF _Toc19328 45 HYPERLINK l _Toc22818 3.2.P.5.5.1 雜質(zhì)情況分析 PAGEREF _Toc22818 45 HYPERLINK l _Toc8679 3.2.P.5.5.2 雜質(zhì)制定依據(jù) PAGEREF _Toc8679 46 HYPERLINK l _Toc6152 3.2.P.5.6 質(zhì)量標準制定依據(jù) PAGEREF _Toc6152 46 HYPERLINK l _Toc5125 3.2.P.5.6.

5、1 質(zhì)量標準 PAGEREF _Toc5125 46 HYPERLINK l _Toc21983 3.2.P.5.6.2質(zhì)量標準制定依據(jù)及產(chǎn)品檢測結(jié)果 PAGEREF _Toc21983 503.2.P.5 制劑的質(zhì)量操縱3.2.P.5.1 質(zhì)量標準檢驗項目方法放行標準限度貨架期標準限度性狀感觀本品為薄膜衣片，除去包衣后顯白色或類白色本品為薄膜衣片，除去包衣后顯白色或類白色鑒不HPLC法（中國藥典2010年版二部附錄 D)供試品溶液中沃諾拉贊峰保留時刻應與對比品溶液中沃諾拉贊峰保留時刻一致供試品溶液中沃諾拉贊峰保留時刻應與對比品溶液中沃諾拉贊峰保留時刻一致有關(guān)物質(zhì)HPLC法（中國藥典2010年

6、版二部附錄 D)雜質(zhì)：不得過0.4%、雜質(zhì)：不得過0.4%、雜質(zhì)：不得過0.4%、雜質(zhì)：不得過0.4%、雜質(zhì)：不得過0.4%、雜質(zhì)：不得過0.4%、其他單雜：不得過0.4%、其他總雜：不得過1.5%雜質(zhì)：不得過0.5%、雜質(zhì)：不得過0.5%、雜質(zhì)：不得過0.5%、雜質(zhì)：不得過0.5%、雜質(zhì)：不得過0.5%、雜質(zhì)：不得過0.5%、其他單雜：不得過0.5%、其他總雜：不得過2.0%吡啶-3-磺酸HPLC法（中國藥典2010年版二部附錄 D)不得過0.4%不得過0.5%含量均勻度含量均勻度檢查法（中國藥典2010年版二部附錄X E）應符合規(guī)定應符合規(guī)定溶出度溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄

7、 C第二法）90%85%微生物限度微生物限度檢查法（中國藥典2010年版二部附錄 J）細菌數(shù)不得過1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g細菌數(shù)不得過1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g含量HPLC法（中國藥典2010年版二部附錄V D)含（C17H16FN3SO2）應為標示量的93.0%107.0%含（C17H16FN3SO2）應為標示量的90.0%110.0%3.2.P.5.2 分析方法 3.2.P.5.2.1 性狀 檢查方法：感觀具體試驗操作：取本品，觀看其外觀性狀。限度：本品應為薄膜衣片，除去包衣后顯白

8、色或類白色。3.2.P.5.2.2 鑒不 檢查方法：高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、電子分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。色譜條件：流淌相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào)pH值至7.2）-甲醇（52:48）流速：1.0ml/min 溶劑：流淌相 檢測器：紫外檢測器 波長：230nm 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）具體試驗操作：在含量測定項下記錄的色譜圖中，比較供試品溶液中沃諾拉贊峰與對比品溶液中沃諾拉贊峰的保留時刻

9、。限度：供試品溶液中沃諾拉贊峰與對比品溶液中沃諾拉贊峰保留時刻應一致。3.2.P.5.2.3 檢查 3.2.P.5.2.3.1 有關(guān)物質(zhì) 檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、電子分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外檢測器（檢測波長為230nm）； 流淌相：0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.2）-甲醇（52：48）為流淌相A，甲醇為流淌相B，按下表梯度進行洗

10、脫； 溶劑：流淌相A； 流速：1.0ml/min。 梯度如下表：時刻（分鐘）流淌相A（%）流淌相B（%）01000231000452080501000601000 具體試驗操作：取本品細粉適量（約相當于沃諾拉贊25mg），周密稱定，置50ml量瓶中，加流淌相A適量，振搖，使充分溶解，加流淌相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；周密量取適量，加流淌相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊2.5g的溶液，作為對比溶液。分不取雜質(zhì)、工作對比品各適量，周密稱定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對比品溶液。取富馬酸沃諾拉贊工作對比品及雜質(zhì)工作對比品各適

11、量，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg及各雜質(zhì)均為2.5g的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄 D）試驗，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.2）-甲醇（52：48）為流淌相A，甲醇為流淌相B，按上表梯度進行洗脫，檢測波長為230nm。取系統(tǒng)適用性溶液20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質(zhì)、沃諾拉贊、依次出峰，理論板數(shù)按沃諾拉贊峰計算應不低于5000，且沃諾拉贊峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應符合要求。周密量取供試品溶液、對比溶液與雜質(zhì)對比品溶液各20l，分不注入液相色譜儀，記錄色譜

12、圖。 計算公式：已知雜質(zhì)、： （Ax為供試品溶液中已知雜質(zhì)的峰面積，AS為對比品溶液中已知雜質(zhì)的峰面積，Wx為已知雜質(zhì)工作對比品的稱樣量，Px為已知雜質(zhì)工作對比品含量，Vx為已知雜質(zhì)對比品溶液的稀釋體積，V為供試品溶液的稀釋體積，W為供試品的稱樣量） （Ai為供試品溶液中其他單個未知雜質(zhì)的峰面積，At為對比溶液主峰面積） （A總為供試品溶液中所有峰的峰面積和，A主為供試品溶液中沃諾拉贊的峰面積，為供試品溶液中已知雜質(zhì)的峰面積之和，At為對比溶液中沃諾拉贊的峰面積）限度：供試品溶液色譜圖中如顯雜質(zhì)峰（溶劑峰及富馬酸峰除外），雜質(zhì)、按外標法以峰面積計算，不得大于標示量的0.5%；其他單個未知雜質(zhì)峰

13、面積不得大于對比溶液的主峰面積（0.5%）；其他雜質(zhì)峰面積的和不得大于對比溶液的主峰面積的4倍（2.0%）。3.2.P.5.2.3.2 吡啶-3-磺酸 檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、電子分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試液與試藥：磷酸二氫鉀、磷酸、甲醇、水。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外檢測器（檢測波長為261nm）； 流淌相：0.01mol/L的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）為流淌相A，甲醇為流淌相B，按下表梯度進行洗脫； 溶劑：

14、流淌相A； 流速：1.0ml/min。梯度如下表：時刻（分鐘）流淌相A（%）流淌相B（%）01000710007.11090910909.11000201000 具體試驗操作：取本品細粉適量（約相當于沃諾拉贊25mg），周密稱定，置50ml量瓶中，加流淌相A適量，振搖，使充分溶解，加流淌相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取雜質(zhì)工作對比品適量，周密稱定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中約含吡啶-3-磺酸2.5g的溶液，作為對比品溶液。照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄 D）試驗，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至

15、3.0）為流淌相A，甲醇為流淌相B，按上表梯度進行洗脫，檢測波長為261nm。取對比品溶液、供試品溶液各20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖， 計算公式： （Ax為供試品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面積，AS為對比品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面積，Wx為雜質(zhì)工作對比品的稱樣量，Px為雜質(zhì)工作對比品含量，Vx為吡啶-3-磺酸對比品溶液的稀釋體積，V為供試品溶液的稀釋體積，W為供試品的稱樣量）限度：供試品溶液色譜圖中如顯與對比品溶液相對應的雜質(zhì)峰，按外標法以峰面積計算不得大于標示量的0.5%。3.2.P.5.2.3.3 溶出度檢查方法：溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄 C第二法） 高效液相色譜法（

16、中國藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：溶出儀、溫度計、高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試液與試藥：鹽酸、磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外檢測器（檢測波長為230nm）； 流淌相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào)pH值至7.2）-甲醇（52:48）； 溶劑：pH1.0鹽酸溶液； 流速：1.0ml/min。具體試驗操作：取本品，照溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄X C第二法），以pH1.0鹽酸溶液900ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘

17、50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時，取溶液適量濾過，周密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質(zhì)定量稀釋成每1ml中約含沃諾拉贊11g的溶液，作為供試品溶液；另取富馬酸沃諾拉贊工作對比品適量，用溶出介質(zhì)溶解并定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊11g的溶液，作為對比品溶液，周密量取供試品溶液與對比品溶液各20l，照含量測定項下的色譜條件測定，計算每片的溶出量。 計算公式：（A供為供試品溶液的主峰面積；A對為對比品溶液主峰面積；M對為對比品的稱樣量，mg；T對為對比品的含量；V對為對比品溶液的稀釋體積；V供為供試品溶液的稀釋體積；X為標示量，10mg或20mg）限度：不得低于標示量的85%。3.2.P.5.2.3.

18、4 含量均勻度檢查方法：含量均勻度檢查法（中國藥典2010年版二部附錄 E） 高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外檢測器（檢測波長為230nm）； 流淌相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào)pH值至7.2）-甲醇（52:48）； 溶劑：流淌相； 流速：1.0ml/min。 具體試驗操作： 供試品溶液：取本品1片，置100ml量瓶（10mg規(guī)格）或

19、200ml量瓶（20mg規(guī)格）中，加流淌相適量，振搖，使充分溶解，用流淌相稀釋至刻度，搖勻，濾過，周密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用流淌相稀釋至刻度，搖勻，即得。 對比品溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對比品適量（約相當于沃諾拉贊10mg），周密稱定，置100ml量瓶中，加流淌相溶解并稀釋至刻度，搖勻，周密量取5ml，置50ml量瓶中，用流淌相稀釋至刻度，搖勻，即得。 周密量取供試品溶液和對比品溶液各20l，分不注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積分不計算每片中沃諾拉贊的含量。依法測定10片中沃諾拉贊的含量。 計算公式：含量（%）=（W對分不為對比品的稱樣量，mg；P對為對比品的含量

20、；A樣、A對分不為供試品、對比品溶液中沃諾拉贊的峰面積；V樣、V對分不為供試品溶液、對比品溶液的稀釋體積） 分不測定每片以標示量為100的相對含量，求其均值和標準差以及標示量與均值之差的絕對值：如，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若，則不符合規(guī)定；若，且，則應另取20支復試，依照初、復試結(jié)果，計算30支的均值、標準差和標示量與均值之差的絕對值：如，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若，則不符合規(guī)定。其中： ，限度：應符合規(guī)定。3.2.P.5.2.3.5 微生物限度1.試液及培養(yǎng)基：營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、MUG培養(yǎng)基、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液、0.9

21、%氯化鈉溶液。2.儀器與用具：智能生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、電動吸引器、薄膜過濾器等。3.具體試驗操作：用平皿法，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄 J）。（1）細菌、霉菌及酵母菌：供試品配制：按中國藥典（2010年版二部）微生物限度檢查法（附錄XI J）的規(guī)定，稱取供試品10g，加pH 7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，靜置10min，取上部澄清液體作為1：10供試液，備用。直接接種法：取1:10供試品每皿1.0ml，分不加入1ml約含50100cfu/m15株試驗菌。立即傾注瓊脂培養(yǎng)基1520ml，每株菌平行制備2個平皿，待凝固后置規(guī)定溫度培養(yǎng)35天觀看結(jié)果，測定其菌數(shù)

22、。菌液組測定試驗所加入試驗菌的菌數(shù)。供試品對比組：取1:10供試液1ml，按試驗組供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。（2）操縱菌的檢查法大腸埃希菌：試驗組取1：10供試液10ml，分不加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，加入10100cfu/ml試驗菌，35-37培養(yǎng)18-24h；取培養(yǎng)液0.2ml，接種至5mlMUG培養(yǎng)管內(nèi)，培養(yǎng)5h與24h時，置紫外燈366nm處觀看，然后沿培養(yǎng)基管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液。陰性菌對比組：取1：10供試液10ml，分不加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，加入10100cfu/ml的金黃色葡萄球菌，同試驗組方法進行試驗。于5、24h在3

23、66nm紫外光下觀看，同時用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對比。在紫外光下若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)藍白色熒光，為MUG陽性；不呈現(xiàn)熒光，為MUG陰性。觀看后，沿培養(yǎng)管的管壁加人數(shù)滴靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽性；呈試劑本色，為靛基質(zhì)陰性。本底對比的MUG和靛基質(zhì)試驗應為陰性。如MUG陽性、靛基質(zhì)陽性，判檢出大腸埃希菌；如MUG陰性、靛基質(zhì)陰性，判未檢出大腸埃希菌。限度：細菌數(shù)不得過1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g3.2.P.5.2.4 含量測定檢查方法：高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄 D)儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八

24、烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm）、容量瓶、移液管、燒杯、PH計。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。色譜條件：流淌相：0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（三乙胺調(diào)pH值至7.2）-甲醇（52:48）流速：1.0ml/min 檢測器：紫外檢測器 波長：230nm 溶劑：流淌相 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5m 250mm4.6mm） 具體試驗操作：取本品20片，周密稱定，研細，周密稱取適量（約相當于沃諾拉贊10mg），置100ml量瓶中，加流淌相適量，振搖，使充分溶解，用流淌相稀釋至刻度，搖勻，濾過，周密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用流淌相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液

25、。周密量取20l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取富馬酸沃諾拉贊工作對比品適量，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。計算公式：含量(%)=（A樣為供試品溶液中主峰的面積；A對為對比品溶液中主峰的面積；M對為對比品的稱樣量，mg；M樣為供試品的稱樣量，mg；T對為對比品的含量；V對為對比品溶液的稀釋體積；V樣為供試品溶液的稀釋體積；為平均片重，mg；X為標示量，10或20mg）限度：應為標示量的90%110%。3.2.P.5.3 分析方法的驗證 按照化學藥物質(zhì)量操縱分析方法驗證技術(shù)指導原則、化學藥物質(zhì)量標準建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導原則、化學藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導原則等以及中國藥典2010年版二部

26、附錄中有關(guān)的指導原則提供以下方法學驗證資料。3.2.P.5.3.1 分析方法學驗證用樣品批號規(guī)格批量（片）試制日期試制地點XA00910mg1552015.1.30山東富創(chuàng)醫(yī)藥科技有限公司XS15030110mg36402015.3.72015030110mg364802015.3.142015.3.152015030210mg361602015.3.162015.3.172015030310mg368402015.3.172015.3.18XB00120mg1452015.2.28XS15030220mg18002015.3.82015.3.92015030420mg184602015.3.

27、182015.3.192015030520mg18520 2015.3.192015.3.202015030620mg185602015.3.202015.3.213.2.P.5.3.2 有關(guān)物質(zhì)方法學驗證3.2.P.5.3.2.1 有關(guān)物質(zhì)檢查方法學驗證總結(jié)試驗項目驗證結(jié)果條件選擇C18柱，以0.05mol/L的磷酸二氫鉀緩沖液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.2）-甲醇（52:48）為流淌相A，甲醇為流淌相B，進行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為230nm。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質(zhì)與相鄰雜質(zhì)分離良好，理論板數(shù)符合要求。專屬性酸、堿、高溫、氧化、光照降解雜質(zhì)均與主峰分離良好，各已知雜質(zhì)與相鄰峰分離

28、良好，主峰及各已知雜質(zhì)峰純度均合格；輔料及其降解產(chǎn)物和梯度峰不干擾本品有關(guān)物質(zhì)的測定。檢測限沃諾拉贊檢測限為0.18ng；雜質(zhì)的檢測限為0.18ng；雜質(zhì)的檢測限為0.18ng；雜質(zhì)的檢測限為0.17ng；雜質(zhì)的檢測限為0.18ng；雜質(zhì)的檢測限為0.17ng；雜質(zhì)的檢測限為60ng。定量限沃諾拉贊定量限為0.60ng；雜質(zhì)的定量限為0.59ng；雜質(zhì)的定量限為0.59ng；雜質(zhì)的定量限為0.57ng；雜質(zhì)的定量限為0.61ng；雜質(zhì)的定量限為0.55ng；雜質(zhì)的定量限為2.00ng。線性富馬酸沃諾拉贊在0.0992.962g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)在0.0992.962

29、g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9995雜質(zhì)在0.0982.943g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)在0.0942.831g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)在0.1023.061g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999雜質(zhì)在0.0922.752g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9994雜質(zhì)在0.13.0g/ml線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9997準確度雜質(zhì)回收率在98.16%100.46%范圍內(nèi)，準確度良好，RSD=0.72%雜質(zhì)回收率在98.46%100.69%范圍內(nèi)，準確度良好，RSD=0.73%雜質(zhì)回收率在98.22%99.62%范圍內(nèi)，準確度良好，

30、RSD=0.44%雜質(zhì)回收率在98.49%100.98%范圍內(nèi)，準確度良好，RSD=0.82%雜質(zhì)回收率在98.26%100.17%范圍內(nèi)，準確度良好，RSD=0.70%雜質(zhì)回收率在98.07%100.24%范圍內(nèi)，準確度良好，RSD=0.79%周密度重復性試驗：測得雜質(zhì)含量RSD=1.74%，雜質(zhì)含量RSD=2.08%，雜質(zhì)含量RSD=1.91%，雜質(zhì)含量RSD=1.86%，測得雜質(zhì)含量RSD=2.19%，雜質(zhì)含量RSD=1.61%，其他單雜含量RSD=5.83%，其他總雜含量RSD=5.19%。中間周密度試驗：測得雜質(zhì)含量RSD=1.42%，雜質(zhì)含量RSD=1.49%，雜質(zhì)含量RSD=2.

31、23%，雜質(zhì)含量RSD=1.40%，測得雜質(zhì)含量RSD=1.63%，雜質(zhì)含量RSD=1.32%，其他單雜含量RSD=5.18%，其他總雜含量RSD=5.40%。溶液穩(wěn)定性供試品溶液、對比溶液、雜質(zhì)對比品溶液室溫放置12小時內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。耐用性采納不同色譜柱，不同的流淌相比例、pH、鹽濃度等檢查本品的有關(guān)物質(zhì)，各已知雜質(zhì)的分離度均符合要求。各已知雜質(zhì)測的含量的RSD均小于10%。3.2.P.5.3.2.2 有關(guān)物質(zhì)檢查方法學驗證內(nèi)容1、儀器設備島津LC-20AT高效液相色譜儀、島津SPD-M20A二極管陣列檢測器島津LC-20AT高效液相色譜儀、島津SPD-M20A紫外檢測器2、色譜條件選擇

32、及溶液配制2.1色譜條件選擇 同原料藥采納十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.2）-甲醇（52:48）為流淌相A，甲醇為流淌相B，進行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為230nm；流速為1.0ml/min。梯度表如下：時刻（分鐘） 流淌相A（%） 流淌相B（%）010002310004520805010006010002.2 溶液配制 供試品溶液：取本品細粉適量（約相當于沃諾拉贊25mg），周密稱定，置50ml量瓶中，加流淌相A適量，振搖，使充分溶解，加流淌相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對比溶液：周密量取供試品溶液適量，加

33、流淌相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊2.5g的溶液，作為對比溶液。分不取雜質(zhì)、工作對比品各適量，周密稱定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對比品溶液。系統(tǒng)適用性溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對比品及雜質(zhì)工作對比品各適量，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg及各雜質(zhì)均為2.5g的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。3、破壞性試驗 破壞試驗溶液的配制與處理：溶液稀釋步驟處理方法溶劑輔料空白輔料101.23mg20ml無降解處理未破壞原料13.43mg+輔料103.61mg20ml無降解處理高溫破壞原料13.51mg+輔料101.77mg20m

34、l水浴100加熱13小時高溫空白輔料101.82mg20ml水浴100加熱13小時光照破壞原料13.44mg+輔料105.01mg20ml光照箱4500LX照耀45小時光照空白輔料103.66mg20ml光照箱4500LX照耀45小時酸破壞原料13.39mg+輔料102.57mg20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時酸空白輔料100.94mg20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時堿破壞原料13.42mg+輔料100.85mg20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時堿空白輔料104.05mg20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時氧化破壞原料1

35、3.25mg+輔料104.44mg20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時氧化空白輔料103.38mg20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時取上述溶液各20l，分不注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見表3.2.P.5.3.2-1。（圖3.2.P.5.3.2-113，制劑的質(zhì)量操縱一第6577頁）表3.2.P.5.3.2-1 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查破壞試驗結(jié)果名稱沃諾拉贊總峰面積主峰面積/%物料平衡/%分離度峰純度未 破 壞4.770合格2246747099.924100高溫破壞1.652合格2234047196.52098.85光照破壞1.678合格2234663197.64699.39酸

36、破 壞2.189合格2161695791.01296.50堿 破 壞2.236合格2119482394.78794.41氧化破壞4.642合格2164593189.30997.65計算公式：物料平衡%=（破壞后總峰面積/濃度）/（破壞前總峰面積/濃度）結(jié)論：溶劑及輔料均不干擾本品的測定，各破壞條件下主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度符合要求，主峰未檢出不純物，樣品破壞前后物料守恒，故該方法測定本品有關(guān)物質(zhì)的專屬性良好。4、定量限試驗 同原料藥，詳見3.2.S.4.3.2。表3.2.P.5.3.2-2 富馬酸沃諾拉贊及已知相關(guān)雜質(zhì)定量限試驗結(jié)果名稱峰面積平均RSD%定量限/ng123456雜質(zhì)159014

37、62154616621653179016176.940.57雜質(zhì)24262707269527072996235926488.660.59沃諾拉贊30593252310030473340320331673.710.60雜質(zhì)4510510851094607468256914951.178.950.59雜質(zhì)2579284424362198258523442497.678.980.61雜質(zhì)4012471144094307407944604329.675.960.55雜質(zhì)6520646367526003668764966486.834.062.00 結(jié)論：此法靈敏度較高，在限度范圍內(nèi)可用于富馬酸沃諾拉贊

38、及已知雜質(zhì)定量檢查。5、檢測限試驗 同原料藥，詳見3.2.S.4.3.2。表3.2.P.5.3.2-3 富馬酸沃諾拉贊及已知相關(guān)雜質(zhì)檢測限試驗結(jié)果名稱雜質(zhì)雜質(zhì)沃諾拉贊雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)C檢測限ng/ml8.498.898.958.839.188.2630.00檢測限/ng0.170.180.180.180.180.170.60結(jié)論：此法靈敏度較高，可有效檢出富馬酸沃諾拉贊及已知雜質(zhì)。6、線性關(guān)系試驗 同原料藥，詳見3.2.S.4.3.2。表3.2.P.5.3.2-4 富馬酸沃諾拉贊及已知相關(guān)雜質(zhì)線性試驗結(jié)果名稱濃度范圍（g/ml）線性方程R2沃諾拉贊0.0992.962A=93720C-842.

39、280.9999雜質(zhì)0.0992.962A=94476C-11530.9995雜質(zhì)0.0982.943A=115542C-2715.90.9999雜質(zhì)0.0942.831A=63504C-14470.9999雜質(zhì)0.1023.061A=90488C-1954.70.9999雜質(zhì)0.0922.752A=70947C-3387.40.9994雜質(zhì)0.13.0A=100700C-5469.80.99977、周密度試驗 7.1 重復性試驗取本品（批號：XS150301，規(guī)格：10mg）100片，周密稱定其重量，求得平均片重為115.23mg。將上述100片樣品置于研缽中研細，混勻，作為供試品粉末。分不

40、取雜質(zhì)、工作對比品各適量，周密稱定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對比品溶液。取供試品粉末約11.5g，取雜質(zhì)、工作對比品各約7.0mg，雜質(zhì)工作對比品約8.0mg，雜質(zhì)工作對比品各約5.0mg，雜質(zhì)工作對比品各約5.3mg，雜質(zhì)工作對比品約6.0mg，混合均勻，作為供試品。取供試品適量，加流淌相A充分溶解，再加流淌相A稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊0.5mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；周密量取供試品溶液適量，加流淌相A稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊2.5g的溶液，作為對比溶液。分不周密量取20l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法計算各已

41、知雜質(zhì)的含量；未知單雜以自身對比法計算其含量。重復測定6次，考察周密度。試驗結(jié)果見表3.2.P.5.3.2-5。（圖3.2.P.5.3.2-1431，制劑的質(zhì)量操縱一第7895頁）表3.2.P.5.3.2-5 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查重復性試驗結(jié)果序號123456平均值RSD%雜質(zhì)（%）0.5010.5060.5070.4960.5110.4870.5011.74雜質(zhì)（%）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5012.08雜質(zhì)（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5081.91雜質(zhì)（%）0.5080.4990.4980.4900.

42、4870.4830.4941.86雜質(zhì)（%）0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5002.19雜質(zhì)（%）0.5030.5060.4900.4850.4970.5000.4971.61其他單雜（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.83其他總雜（%）0.0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.19結(jié)論：試驗結(jié)果表明，此法重復性良好。7.2中間周密度試驗 取重復性項下供試品，由不同試驗人員分不在不同日期、不同儀器檢查其有關(guān)物質(zhì)，試驗結(jié)果見表3.2.P.5.3.2-6。（圖3.2.P.5.3.2-324

43、9，制劑的質(zhì)量操縱一第96113頁）表3.2.P.5.3.2-6 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查中間周密度試驗結(jié)果序號123456平均值RSD%雜質(zhì)（%）0.5010.5060.5070.4960.5110.4870.5011.420.4910.5040.5080.5030.4980.502雜質(zhì)（%）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5031.490.5030.5070.5050.5020.5080.503雜質(zhì)（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5002.230.4840.4940.4930.4890.5060.493雜質(zhì)（%）0.

44、5080.4990.4980.4900.4870.4830.4951.400.4900.4970.4900.4990.5000.498雜質(zhì)（%）0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5001.630.5020.4930.4960.4960.5050.505雜質(zhì)（%）0.5030.5060.4900.4850.4970.5000.4961.320.4880.5020.4960.4910.5010.496其他單雜（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.180.0200.0210.0200.0220.0190.021其他總雜（%）0.

45、0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.400.0260.0290.0280.0310.0270.029結(jié)論：此法檢查本品的有關(guān)物質(zhì)中間周密度良好。溶液穩(wěn)定性試驗供試品溶液：取本品適量（約相當于沃諾拉贊25mg），周密稱定，置50ml量瓶中，加流淌相A適量，振搖，使充分溶解，加流淌相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對比溶液：周密量取供試品溶液適量，加流淌相A定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊2.5g的溶液，作為對比溶液。分不取雜質(zhì)、工作對比品各適量，周密稱定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對比品溶液。將上

46、述各溶液于室溫下放置12小時，分不于0、3、6、9、12小時，周密量取20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積考察溶液穩(wěn)定性，結(jié)果見表3.2.P.5.3.2-79。（圖3.2.P.5.3.2-5064，制劑的質(zhì)量操縱一第114128頁）表3.2.P.5.3.2-7 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果（供試品溶液）名稱/時刻0h3h6h9h12h平均值RSD%未知雜質(zhì)14059370138863998428239855.39雜質(zhì)100409532987895141047598884.03沃諾拉贊43546651435460494347302643443924434341014348

47、87500.13雜質(zhì)2144421347218122210223923221264.74未知雜質(zhì)28351823676549349957886349.34表3.2.P.5.3.2-8 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果（對比溶液）名稱/時刻0h3h6h9h12h平均值RSD%沃諾拉贊2235192245612241462242572242102241390.17表3.2.P.5.3.2-9 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果（雜質(zhì)對比品溶液）峰面積/時刻0h3h6h9h12h平均值RSD%雜質(zhì)2323312324032327992325382300542320250.4

48、8雜質(zhì)2505242507642511062512642501232507560.18雜質(zhì)1546791543441533191536441542831540540.36雜質(zhì)2228152220392240302235972224712229900.37雜質(zhì)1943491906411885701852351807211879032.77雜質(zhì)2448022465392502332468582375312451931.92結(jié)論：供試品溶液、對比溶液、雜質(zhì)對比品溶液12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。準確性試驗雜質(zhì)對比品溶液：分不取雜質(zhì)（含量73.14%）、（含量72.46%）、（含量62.67%）、（含量99.4

49、4%）、（含量94.37%）、（含量84.59%）工作對比品各適量，周密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對比品溶液。供試品溶液：取20140701批原料適量（約相當于沃諾拉贊25mg），周密稱定，置50ml量瓶中，加流淌相A適量，使充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；按外標法計算各已知雜質(zhì)的百分含量。表3.2.P.5.3.2-10 富馬酸沃諾拉贊各已知雜質(zhì)的測定結(jié)果名稱雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)測得含量%0.0150.031未檢出未檢出未檢出未檢出回收率溶液：1）取雜質(zhì)、工作對比品各約11.0mg，雜質(zhì)工作對比品約12.8mg，雜質(zhì)工作對比品各約

50、8.0mg，雜質(zhì)工作對比品各約8.5mg，雜質(zhì)工作對比品約9.5mg，周密稱定，置200ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；周密量取1ml，置20ml量瓶中，取原料約13.36mg，周密稱定，置同一20ml量瓶中，按處方比例加入輔料，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（80%濃度）溶液。同法配制3份。2）取雜質(zhì)、工作對比品各約13.7mg，雜質(zhì)工作對比品約16.0mg，雜質(zhì)工作對比品各約10.0mg，雜質(zhì)工作對比品各約10.6mg，雜質(zhì)工作對比品約11.8mg，周密稱定，置200ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；周密量取1ml，置20ml量瓶中，取原料約13.3

51、6mg，周密稱定，置同一20ml量瓶中，按處方比例加入輔料，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（100%濃度）溶液。同法配制3份。3）取雜質(zhì)、工作對比品各約16.5mg，雜質(zhì)工作對比品約19.1mg，雜質(zhì)工作對比品各約12.0mg，雜質(zhì)工作對比品各約12.7mg，雜質(zhì)工作對比品約14.2mg，周密稱定，置200ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻；周密量取1ml，置20ml量瓶中，取原料約13.36mg，周密稱定，置同一20ml量瓶中，按處方比例加入輔料，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為回收率（120%濃度）溶液。同法配制3份。分不周密量取上述溶液各20l注入液相色譜儀

52、，記錄色譜圖，結(jié)果見表3.2.S.4.3.2-10、11。（圖3.2.P.5.3.2-6575，制劑的質(zhì)量操縱一第129139頁）按外標法以峰面積計算供試品溶液中各雜質(zhì)的量。再按下式計算回收率：回收率（%）=式中：M測得量為回收率溶液中已知雜質(zhì)的測得量； M供試品中的量為回收率溶液中供試品的已知雜質(zhì)的量； M加入量為回收率溶液中已知雜質(zhì)的加入量；表3.2.S.4.3.2-11 富馬酸沃諾拉贊雜質(zhì)測定回收率試驗結(jié)果編號M加入量/gM測得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.298.3313.420.0150.002100.4699.330.7228.22

53、8.1713.390.00299.3738.358.2513.450.00298.78410.1410.1513.370.002100.08510.2010.0913.410.00298.90610.1510.1313.290.00299.78712.0511.9913.270.00299.49812.1011.9813.250.00298.99912.0911.8713.30.00298.16編號M加入量/gM測得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.358.2413.420.0310.00498.6399.320.7328.588.5513.390

54、.00499.6038.578.5213.450.00499.37410.5210.5013.370.00499.77510.9110.8013.410.00498.96610.6810.5213.290.00498.46712.4512.5413.270.004100.69812.2412.2213.250.00499.80912.5112.3413.300.00498.61編號M加入量/gM測得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%17.877.8413.42未檢出099.6298.850.4427.917.8213.39098.8637.917.821

55、3.45098.8649.959.8113.37098.5959.989.9013.41099.2069.969.8213.29098.59711.9711.7913.27098.50811.8211.7313.25099.24911.8211.6113.30098.22編號M加入量/gM測得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.138.1713.42未檢出0100.49100.110.8228.058.0213.39099.6338.148.2213.450100.98410.2410.1813.37099.4159.949.7913.41098.4

56、969.849.9113.290100.71711.9511.9413.27099.92811.6711.7713.250100.86912.0912.1513.300100.50編號M加入量/gM測得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.808.8013.42未檢出0100.0099.100.7028.838.7913.39099.5538.648.5013.45098.38410.6310.5113.37098.8759.709.6413.41099.38610.4210.2813.29098.66710.8910.7013.27098.26811

57、.2511.1013.25098.67911.6511.6713.300100.17編號M加入量/gM測得量/gM供試品/mg雜質(zhì)%M供試品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.057.9513.42未檢出098.7699.320.7928.027.9013.39098.5038.028.0313.450100.12410.4210.3313.37099.14510.3710.3313.41099.61610.0310.0513.290100.20711.8611.7713.27099.24812.2512.2813.250100.24911.9111.6813.30098.07結(jié)論：

58、此方法測定雜質(zhì)準確性良好。 10、耐用性試驗 為考察色譜系統(tǒng)在輕微變化時的耐用性情況，通過改變流淌相比例、流淌相pH值、流淌相鹽濃度、流速等色譜因素進行試驗，計算含雜質(zhì)的量。分不取雜質(zhì)、工作對比品各適量，周密稱定，加流淌相A溶解并稀釋制成每1ml中含各雜質(zhì)均約為2.5g的溶液，作為雜質(zhì)對比品溶液。取重復性項下供試品。取供試品約115.0mg，周密稱定，置20ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。周密量取供試品溶液1ml，置200ml量瓶中，加流淌相A稀釋制成至刻度，搖勻，作為對比溶液。周密量取上述溶液各20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算

59、各雜質(zhì)含量，結(jié)果見表3.2.P.5.3.2-1213。（圖3.2.P.5.3.2-76102，制劑的質(zhì)量操縱一第140166頁）表3.2.P.5.3.2-12 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查耐用性試驗結(jié)果1耐用性研究項目方法及條件耐用范圍沃諾拉贊雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)雜質(zhì)分離度分離度分離度分離度分離度分離度分離度色譜原條件5.5245.5242.2465.931 2.2462.11263.805流速0.955.6605.6602.0456.0462.0451.98761.9881.055.4955.4951.9145.6661.9141.98068.939流淌相比例54-465.4705.4704

60、.2196.0902.8554.37352.25050-505.3585.3581.4395.1141.4391.47979.057pH值7.15.4315.4313.3245.5743.3243.47662.6977.35.9635.9631.3296.5271.3291.36561.412鹽濃度0.0455.3415.3412.6975.4432.6972.93067.9400.0555.5385.5382.5315.7682.5312.57862.714表3.2.P.5.3.2-13 富馬酸沃諾拉贊片有關(guān)物質(zhì)檢查耐用性試驗結(jié)果2耐用性研究項目方法及條件耐用范圍雜質(zhì)%雜質(zhì)%雜質(zhì)%雜質(zhì)%雜質(zhì)