DB11-T1806-2020實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲檢測(cè)

1、ICS 65.020.30CCS B 44DB11北京市地方標(biāo)準(zhǔn)DB11/ T 18062020DB11/T1460.32017，DB 11/T 1460.42018，DB 11/T1460.52018實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 寄Th蟲檢測(cè)Laboratory animalParasitological testing2020-12-24發(fā)布2021-04-01實(shí)施北京市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB11/T 18062020目次前言II1范引文件1語(yǔ)定義1級(jí)2測(cè)2測(cè)7測(cè)8測(cè)11果12論報(bào)告12附錄A（范）實(shí)雞的織蟲13附錄B（范）實(shí)鵝的滴檢測(cè)14附錄C（范）實(shí)鴿的原檢測(cè)15附錄D（范）實(shí)魚的生檢測(cè)16參考17IDB

2、11/T 18062020前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。DB11/T2DB11/T1053.22DB11/T1460.12017級(jí)及監(jiān)測(cè) 第DB11/T2DB11/T3DB1460.42018DB 11/T 1460.520185見6.2.5、6.2.6、6.2.7、6.2.8）。本文件由北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件由北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)組織實(shí)施。本文件起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、中國(guó)食品藥品檢定研究院、國(guó)家衛(wèi)生健康委科學(xué)技術(shù)研究所、中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所、中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、首都醫(yī)科大學(xué)、浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院、

3、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所、北京康藍(lán)生物技術(shù)有限公司、北京市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理辦公室、北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行業(yè)協(xié)會(huì)、北京市標(biāo)準(zhǔn)化研究院、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所、北京華阜康生物科技股份有限公司、吉林大學(xué)。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：DB11/T828.22011DB11/T1053.22013DB11/T1460.12017DB11/T 1460.22017DB11/T 1460.32017、DB 11/T 1460.42018、DB 11/T 1460.52018；本次為第一次修訂。IIDB11/T 18062020實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 寄Th蟲檢測(cè)范圍本文件規(guī)定了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的寄生蟲學(xué)等級(jí)分類

4、、檢測(cè)要求、檢測(cè)程序、檢測(cè)方法、檢測(cè)規(guī)則、結(jié)果判定、結(jié)論與報(bào)告。本文件適用于實(shí)驗(yàn)小型豬、實(shí)驗(yàn)豬、實(shí)驗(yàn)牛、實(shí)驗(yàn)羊、實(shí)驗(yàn)狨猴、實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪沙鼠、實(shí)驗(yàn)雪貂、實(shí)驗(yàn)貓、實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝、實(shí)驗(yàn)鴿、實(shí)驗(yàn)魚（斑馬魚和劍尾魚）的寄生蟲檢測(cè)。下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 18448.1實(shí)動(dòng)物體寄蟲測(cè)GB/T 18448.2實(shí)動(dòng)物弓蟲測(cè)GB/T 18448.3實(shí)動(dòng)物兔原檢方法GB/T 18448.4實(shí)動(dòng)物卡肺子檢方法GB/T 18448.6實(shí)動(dòng)物蠕檢方

5、法GB/T 18448.7實(shí)動(dòng)物瘧蟲測(cè)GB/T 18448.9 18448.10GB/T 18642 豬旋毛蟲病診斷技術(shù)GB/T 18644GB/T 18647GB/T 23239NY/T 541NY/T 1466NY/T 1949孢蟲檢測(cè)術(shù)改抗染SN/T 1225白胞診斷法顯鏡查法SN/T 2975華睪囊蚴定SN/T 3485SN/T 3499下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1實(shí)驗(yàn)物laboratoryanimal經(jīng)人工飼育，對(duì)其攜帶的微生物和寄生蟲實(shí)行控制，遺傳背景明確或者來(lái)源清楚，用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)和檢定以及其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物。1DB11/T 18062020來(lái)源: GB 1492

6、52010, 3.13.2普通實(shí)動(dòng)物conventional (CV) laboratoryanimal不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原、動(dòng)物烈性傳染病病原和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)有重大干擾的病原的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。3.2.1無(wú)特定抗原抗體普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 specific antigen & antibody-free conventional (CV) laboratory animal普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中未免疫特定的疫苗，且經(jīng)檢測(cè)不攜帶實(shí)驗(yàn)要求排除的特定病原微生物抗原抗體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，稱為無(wú)特定抗原抗體普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。3.3無(wú)特病體實(shí)動(dòng)物specific pathogen free (SPF) laboratoryan

7、imal除普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原3.4無(wú)菌實(shí)動(dòng)物germ free (GF) laboratoryanimal無(wú)可檢出的一切生命體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。根據(jù)對(duì)微生物和寄生蟲控制的程度，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、無(wú)特定病原體級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和無(wú)菌級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物三個(gè)等級(jí)。對(duì)待檢實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的精神狀態(tài)、行為、被毛、天然孔分泌物進(jìn)行外觀檢查。寄Th12DB11/T 18062020表1實(shí)驗(yàn)和驗(yàn)型各級(jí)寄Th蟲測(cè)動(dòng)物等級(jí)寄生蟲檢測(cè)要求普通級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）旋毛蟲（Trichinella）豬囊尾蚴（Cysticerc

8、us）無(wú)特定病原體體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）旋毛蟲（Trichinella）豬囊尾蚴（Cysticercus）球蟲（Coccidia）小袋纖毛蟲（Balantidium）賈第蟲（Giardia）阿米巴原蟲（Amoeba）隱孢子蟲（Cryptosporidium）蠕蟲（Helminths）無(wú)菌級(jí)任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項(xiàng)，要求陰性。2表2實(shí)驗(yàn)和驗(yàn)各級(jí)Th蟲測(cè)動(dòng)物等級(jí)寄生蟲實(shí)驗(yàn)牛檢測(cè)要求實(shí)驗(yàn)羊檢測(cè)要求普通級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）棘球蚴（Echinococcus）弓形蟲（Toxoplasma）無(wú)特定病原體級(jí)體外寄生蟲（Ectop

9、arasites）棘球蚴（Echinococcus）弓形蟲（Toxoplasma）球蟲（Coccidia）新孢子蟲（Neospora）梨形蟲（Piroplasma）賈第蟲（Giardia）錐蟲（Trypanosome）蠕蟲（Helminths）隱孢子蟲（Cryptosporidium）無(wú)菌級(jí)任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項(xiàng)，要求陰性；“”表示需要時(shí)檢測(cè)項(xiàng)目，要求陰性。3DB11/T 180620203表3實(shí)驗(yàn)猴等寄Th蟲測(cè)項(xiàng)目動(dòng)物等級(jí)寄生蟲檢測(cè)要求普通級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）無(wú)特定病原體級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Tox

10、oplasma）鞭毛蟲（Flagellates）蠕蟲（Helminths）球蟲（Coccidia）瘧原蟲（Plasmodium）無(wú)菌級(jí)任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項(xiàng)目，要求陰性。4表4實(shí)驗(yàn)爪鼠等寄Th蟲檢項(xiàng)目動(dòng)物等級(jí)寄生蟲檢測(cè)要求普通級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）無(wú)特定病原體級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）纖毛蟲（Ciliates）鞭毛蟲（Flagellates）蠕蟲（Helminths）卡氏肺孢子蟲（Pneumocystis carinii）兔腦原蟲（Encephalitozoon cuniculi）無(wú)菌

11、級(jí)任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項(xiàng)，要求陰性。54DB11/T 18062020表5實(shí)驗(yàn)貂等寄Th蟲測(cè)項(xiàng)目動(dòng)物等級(jí)寄生蟲檢測(cè)要求普通級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）無(wú)特定病原體級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）蠕蟲（Helminths）球蟲（Coccidia）鞭毛蟲（Flagellates）無(wú)菌級(jí)任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項(xiàng)，要求陰性。6表6實(shí)驗(yàn)各級(jí)Th檢項(xiàng)目動(dòng)物等級(jí)寄生蟲檢測(cè)要求普通級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）華支睪吸蟲（Clonorchis sinensis

12、）無(wú)特定病原體級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）華支睪吸蟲（Clonorchis sinensis）纖毛蟲（Ciliates）鞭毛蟲（Flagellates）蠕蟲（Helminths）兔腦原蟲（Encephalitozoon cuniculi）球蟲（Coccidia）無(wú)菌級(jí)任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項(xiàng)，要求陰性。7表7實(shí)驗(yàn)、驗(yàn)、驗(yàn)和實(shí)鴿等寄Th蟲測(cè)項(xiàng)目動(dòng)物等級(jí)寄生蟲實(shí)驗(yàn)雞檢測(cè)要求實(shí)驗(yàn)鴨檢測(cè)要求實(shí)驗(yàn)鵝檢測(cè)要求實(shí)驗(yàn)鴿?rùn)z測(cè)要求普通級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）蠕蟲（Helminths）弓形蟲（Toxoplasma）7DB11/T 180620

13、20表7實(shí)雞實(shí)鴨實(shí)驗(yàn)和驗(yàn)各級(jí)Th蟲測(cè)目續(xù)）動(dòng)物等級(jí)寄生蟲實(shí)驗(yàn)雞檢測(cè)要求實(shí)驗(yàn)鴨檢測(cè)要求實(shí)驗(yàn)鵝檢測(cè)要求實(shí)驗(yàn)鴿?rùn)z測(cè)要求無(wú)特定病原體級(jí)體外寄生蟲（Ectoparasites）蠕蟲（Helminths）弓形蟲（Toxoplasma）住白細(xì)胞蟲（Leucocytozoon）阿米巴原蟲（Ameba）隱孢子蟲（Cryptosporidium）組織滴蟲（Histomonas）球蟲（Coccidia）毛滴蟲（Trichomonas）瘧原蟲（Plasmodium）無(wú)菌級(jí)任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項(xiàng)，要求陰性；“”表示需要時(shí)檢測(cè)項(xiàng)目，要求陰性。8表8實(shí)驗(yàn)各級(jí)Th檢項(xiàng)目動(dòng)物等級(jí)寄生蟲檢測(cè)要求普通級(jí)微孢子蟲（Ps

14、eudoloma neurophilia）卵圓鞭毛蟲（Piscinoodinium pillulare）多子小瓜蟲（Ichthyophthirius multifiliis）頭槽絳蟲（Bothriocephalidae）無(wú)特定病原體級(jí)微孢子蟲（Pseudoloma neurophilia）卵圓鞭毛蟲（Piscinoodinium pillulare）多子小瓜蟲（Ichthyophthirius multifiliis）頭槽絳蟲（Bothriocephalidae）斜管蟲（Chilodonella）車輪蟲（Trichodina）杯體蟲（Apiosoma）粘孢子蟲（Myxozoan）指環(huán)蟲（Dac

15、tylogyrus）絨毛偽毛細(xì)線蟲（Pseudocapillaria tomentosa）三代蟲（Gyrodactylus）駝形線蟲（Camallanidae）錨頭鳋（Lernaea）無(wú)菌級(jí)任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項(xiàng)，要求陰性。8DB11/T 18062020外觀檢查1外觀檢查編號(hào)編號(hào)麻醉麻醉毛發(fā)、羽毛或皮屑血液新鮮糞便毛發(fā)、羽毛或皮屑血液新鮮糞便檢測(cè)檢測(cè)結(jié)果判定結(jié)果判定判定結(jié)論判定結(jié)論圖1實(shí)驗(yàn)物Th檢程序NY/T 541樣本進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)。7DB11/T 18062020外觀檢查外觀檢查編號(hào)編號(hào)麻醉麻醉體表寄生蟲檢查和取材體表寄生蟲檢查和取材剖檢及體內(nèi)寄生蟲檢查和取材剖檢及體內(nèi)寄生

16、蟲檢查和取材解剖鏡和顯微鏡檢查解剖鏡和顯微鏡檢查結(jié)果判定結(jié)果判定判定結(jié)論判定結(jié)論圖 2 實(shí)驗(yàn)魚寄Th蟲學(xué)檢測(cè)程序98DB11/T 18062020表9驗(yàn)型寄Th蟲學(xué)測(cè)法寄生蟲檢測(cè)方法體外寄生蟲GB/T 18448.1旋毛蟲GB/T 18642弓形蟲GB/T 18448.2豬囊尾蚴GB/T 18644球蟲GB/T 18647小袋纖毛蟲GB/T 18448.10賈第蟲GB/T 18448.10阿米巴原蟲GB/T 18448.9隱孢子蟲NY/T 1949蠕蟲GB/T 18448.610表10實(shí)驗(yàn)和驗(yàn)寄Th蟲檢測(cè)法寄生蟲檢測(cè)方法體外寄生蟲GB/T 18448.1棘球蚴NY/T 1466弓形蟲GB/T

17、18448.2隱孢子蟲NY/T 1949球蟲GB/T 18647梨形蟲SN/T 3485新孢子蟲SN/T 3499賈第蟲GB/T 18448.10錐蟲GB/T 23239蠕蟲GB/T 18448.611表11實(shí)驗(yàn)猴Th學(xué)測(cè)法寄生蟲檢測(cè)方法體外寄生蟲GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2瘧原蟲GB/T 18448.7蠕蟲GB/T 18448.6鞭毛蟲GB/T 18448.10球蟲GB/T 186479DB11/T 1806202012表12實(shí)驗(yàn)爪鼠Th學(xué)測(cè)方法寄生蟲檢測(cè)方法體外寄生蟲GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2兔腦原蟲GB/T 18448.3蠕蟲GB/T

18、 18448.6鞭毛蟲和纖毛蟲GB/T 18448.10卡氏肺孢子蟲GB/T 18448.413表13實(shí)驗(yàn)貂Th學(xué)測(cè)法寄生蟲檢測(cè)方法體外寄生蟲GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2蠕蟲GB/T 18448.6鞭毛蟲GB/T 18448.10球蟲GB/T 1864714表14實(shí)驗(yàn)寄Th蟲檢方法寄生蟲檢測(cè)方法體外寄生蟲GB/T 18448.1華支睪吸蟲SN/T 2975弓形蟲GB/T 18448.2鞭毛蟲和纖毛蟲GB/T 18448.10蠕蟲GB/T 18448.6兔腦原蟲GB/T 18448.3球蟲GB/T 1864715表15實(shí)驗(yàn)、驗(yàn)、驗(yàn)和實(shí)鴿Th檢方法寄生蟲檢測(cè)方法體外寄生蟲

19、GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2球蟲GB/T 1864710DB11/T 18062020表 15驗(yàn)、驗(yàn)實(shí)驗(yàn)和驗(yàn)寄Th蟲測(cè)方（）寄生蟲檢測(cè)方法阿米巴原蟲GB/T 18448.9蠕蟲GB/T 18448.6隱孢子蟲NY/T 1949住白細(xì)胞蟲SN/T 1225組織滴蟲附錄 A毛滴蟲附錄 B瘧原蟲附錄 CD每3個(gè)月應(yīng)至少檢測(cè)1次。抽樣按寄生蟲和微生物采樣要求聯(lián)合抽樣。抽樣月齡符合表16的要求。表16實(shí)驗(yàn)物樣動(dòng)物種類抽樣月齡實(shí)驗(yàn)小型豬6實(shí)驗(yàn)豬2實(shí)驗(yàn)牛6實(shí)驗(yàn)羊2實(shí)驗(yàn)狨猴6實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪沙鼠2實(shí)驗(yàn)貓6實(shí)驗(yàn)雪貂6實(shí)驗(yàn)雞1實(shí)驗(yàn)鴨1實(shí)驗(yàn)鵝1實(shí)驗(yàn)鴿1實(shí)驗(yàn)魚應(yīng)選擇 3 月齡以上的成魚，必要時(shí)同時(shí)取

20、飼養(yǎng)環(huán)境水樣用于檢測(cè)；應(yīng)在不同的水環(huán)境內(nèi)隨機(jī)抽樣。抽樣方法按照NY/T 541的規(guī)定執(zhí)行。11DB11/T 1806202010010053017表17實(shí)驗(yàn)物樣群體大?。ㄖ?頭/羽）抽樣數(shù)量（只/頭/羽）10051005001050015樣品和送檢單一同送達(dá)具備檢測(cè)能力的實(shí)驗(yàn)室，送檢單應(yīng)寫明檢品名稱、品系、等級(jí)、數(shù)量及檢測(cè)項(xiàng)目等內(nèi)容。血清樣品經(jīng)間接血凝實(shí)驗(yàn)（Indirect Hemagglutination Assay IHA ）、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）或間接免疫熒光（Indirect Fluorescence Ass

21、ay，IFA） 檢測(cè)，血清抗體陰性判為合格。經(jīng)檢測(cè)，未檢出蟲體、蟲卵，判為合格。（PolymeraseChain Reaction, PCR）檢測(cè)經(jīng)檢測(cè)，未見陽(yáng)性結(jié)果判為合格。結(jié)論按照檢測(cè)規(guī)則，檢測(cè)指標(biāo)均合格，依據(jù)表1表8，判為符合相應(yīng)等級(jí)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。1表報(bào)告根據(jù)檢測(cè)結(jié)果出具檢測(cè)報(bào)告。12DB11/T 18062020附錄A（規(guī)范性）實(shí)驗(yàn)雞的組織滴蟲檢測(cè)DNAdNTPA. 2.1 外觀檢查從精神狀態(tài)、行為、被毛和天然孔分泌物對(duì)實(shí)驗(yàn)雞進(jìn)行外觀檢查。A. 2.2 剖檢和病理檢查剖檢實(shí)驗(yàn)雞，進(jìn)行病理學(xué)大體觀察。觀察肝臟是否腫大，表面是否有黃褐色壞死灶；觀察盲腸是否腫脹，腸腔內(nèi)是否有干酪樣物。A. 2

22、.3 蟲體檢查宜采用以下三種方法：取剖檢的實(shí)驗(yàn)雞盲腸，除去內(nèi)容物后取盲腸粘膜表面的刮取物于載玻片上，滴加40的生理鹽水稀釋，顯微鏡下觀察是否有活動(dòng)的組織滴蟲蟲體存在。取剖檢的實(shí)驗(yàn)雞的肝組織涂片進(jìn)行姬氏染色，顯微鏡下觀察是否有組織滴蟲蟲體存在。取剖檢的實(shí)驗(yàn)雞的肝臟和盲腸組織制作組織切片并進(jìn)行H.E.染色，顯微鏡下觀察是否有組織滴蟲蟲體存在。A2.4 核酸檢測(cè)取剖檢的實(shí)驗(yàn)雞肝臟或盲腸組織樣品，提取基因組DNA，用針對(duì)火雞組織滴蟲18SRGnBnk:G00098.5-GGACCTGG 3;5-CTCGTCGGCATAGTTTAAGGTAGG-3）進(jìn)行PCR檢測(cè)，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳并測(cè)序分析。若有火雞組織滴蟲感染，典型病理變化為肝臟腫大，呈深紫褐色，表面有大小不一的黃褐色壞死灶，壞死灶中央稍有下陷，有的壞死灶周圍有出血帶；盲腸外觀明顯腫大，觸之堅(jiān)硬，呈香腸狀，粗細(xì)不均，