蛋白質(zhì)研究技術(shù)

1、蛋白質(zhì)研究相關(guān)技術(shù)？蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者。 western blot 雙向電泳+ 質(zhì)譜 免疫共沉淀研究已確定蛋白研究未確定蛋白研究蛋白質(zhì)間的相互關(guān)系SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳western blot基本原理 在電場(chǎng)的作用下將電泳分離的多肽從凝膠轉(zhuǎn)移至一種固相支持體，然后用這種多肽的特異性抗體來(lái)檢測(cè)。western blot基本步驟提取總蛋白蛋白濃度測(cè)定（ Bradford法）SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳轉(zhuǎn)膜封閉雜一抗雜二抗顯色、曝光western blot結(jié)果分析雙向電泳+質(zhì)譜等電聚焦電泳（根據(jù)等電點(diǎn)大小） 利用特殊的一種緩沖液（兩性電解質(zhì)）在凝膠（常用聚丙烯酰胺凝膠

2、）內(nèi)制造一個(gè)pH梯度，電泳時(shí)每種蛋白質(zhì)就將遷移到等于其等電點(diǎn)（pI）的pH處（此時(shí)此蛋白質(zhì)不再帶有凈的正或負(fù)電荷），形成一個(gè)很窄的區(qū)帶?；驹鞸DS聚丙烯酰胺凝膠電泳 （根據(jù)分子大小）雙向電泳+質(zhì)譜基本原理雙向電泳+質(zhì)譜結(jié)果分析 質(zhì)譜分析是一種測(cè)量離子質(zhì)荷比（質(zhì)量-電荷比）的分析方法，其基本原理是使試樣中各組分在離子源中發(fā)生電離，生成不同荷質(zhì)比的帶電荷的離子，經(jīng)加速電場(chǎng)的作用，形成離子束，進(jìn)入質(zhì)量分析器。在質(zhì)量分析器中，再利用電場(chǎng)和磁場(chǎng)使發(fā)生相反的速度色散，將它們分別聚焦而得到質(zhì)譜圖，從而確定其相對(duì)分子質(zhì)量。雙向電泳+質(zhì)譜免疫共沉淀 免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法?；驹恚好庖吖渤恋斫Y(jié)果分析 證明RAD18與FANCD2蛋白具有相關(guān)性。免疫共沉淀結(jié)果分析 證明： VEGFR與P85存在相互作用，但是相互作用的位點(diǎn)不在其SH2上。 免疫共沉淀結(jié)果分析 證明HMGB4與2，3，4，5箭頭所指的蛋白具有相關(guān)性。做實(shí)驗(yàn)心得：一，知道為什么要做這個(gè)？二，一定要知道實(shí)驗(yàn)原理，掌握每一個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟的目的 是什么。三，準(zhǔn)備越充分，實(shí)驗(yàn)越順利。四，獨(dú)立而不孤立