赤靈芝提取物對小鼠免疫功能系統(tǒng)的影響

1、赤靈芝提取物對小鼠免疫功能系統(tǒng)的影響【摘要】目的旨在赤靈芝提取物對細胞、體液及非特異性免疫功能的影響。方法以520、260g/kg赤靈芝提取物給昆明種雄性小鼠灌胃15d，分別進展nA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗、足跖增厚法測定小鼠遲發(fā)型變態(tài)反響、半數(shù)溶血值(H50)測定、抗體形成細胞(AF)檢測、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞才能和網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬碳廓清功能測定。結(jié)果赤靈芝提取物可明顯增強小鼠脾淋巴細胞的轉(zhuǎn)化才能(P0.001，P0.01,P0.05)及體液免疫才能(P0.01,P0.05);明顯抑制由SRB引起的小鼠DTH反響(P0.01,P0.05);增強腹腔巨噬細胞吞噬功能(P0.001)

2、;對碳廓清無明顯影響。結(jié)論赤靈芝提取物具有免疫調(diào)節(jié)作用，可明顯增強小鼠脾淋巴細胞的轉(zhuǎn)化才能及體液免疫才能。【關(guān)鍵詞】赤靈芝水提取物;赤靈芝醇提取物;體液免疫;細胞免疫靈芝多糖是靈芝中的主要免疫藥另學(xué)活性成分，其作用主要表如今：對正常小鼠的免疫功能具有增強作用;增強人臍血LAK細胞活性，且呈劑量依賴關(guān)系;對免疫抑制藥物(如氫化可的松、環(huán)孢霉素A、環(huán)磷酰胺等)和抗腫瘤藥物(如氟尿嘧啶、絲裂霉素和阿糖胞苷等)及應(yīng)激、衰老等因素所致小鼠免疫功能低下具有明顯的恢復(fù)作用13。本試驗擬赤靈芝提取物對小鼠免疫系統(tǒng)的影響，為開發(fā)和利用赤靈芝的藥用和保健價值提供科學(xué)根據(jù)。1材料與方法1.2試劑赤靈芝水提取物和醇提

3、取物均為25g生藥/g粉。RPI1640完全培養(yǎng)液(GIB產(chǎn)品)，小牛血清，刀豆蛋白(nA)液均為Siga產(chǎn)品，綿羊紅細胞(SRB)，豚鼠血清。1.3nA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗(TT法)4末次給藥后1h在超凈臺內(nèi)，無菌取小鼠脾于無菌Hanks液培養(yǎng)皿內(nèi)，用毛玻璃片磨碎，過濾細胞懸液，洗滌一遍，1000r/in，離心5in，用2lRPI1640培養(yǎng)液懸浮細胞，取10l細胞懸液，調(diào)細胞濃度至2106/l，參加24孔培養(yǎng)板，每孔1l/孔。實驗孔參加nA20l，終濃度5g/l。37，5%2孵箱內(nèi)培養(yǎng)68h，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。每孔吸去培養(yǎng)上清液0.7l，再加不含血清的RPI1640培養(yǎng)液，

4、參加TT溶液50l/孔(5g/1)，繼續(xù)孵育4h，參加酸性異丙醇溶液1l/孔，吹打混合均勻，待顆粒結(jié)晶完全溶解。將溶解液分加到96孔板中，200l/孔，每個樣本作3復(fù)孔，酶標(biāo)儀上讀出D570n值。1.4足跖增厚法測定小鼠遲發(fā)型變態(tài)反響(DTH)4于給藥后11d對小鼠進展致敏，每只小鼠腹腔注射2%綿羊SRB0.2l/只進展免疫，免疫4d后，測量左后足跖部厚度，然后，在測量部位皮下注射20%(V/V)SPR20l/只，注射后于24、48h分別測量左右足跖部厚度，同一部位測量3次取平均值。1.5半數(shù)溶血值(H50)測定于給藥11d對小鼠進展腹腔注2%(V/V)SRB0.2l/只進展免疫，免疫4d后處

5、死小鼠取血離心(2000r/in，10in)，搜集血清并用SA液稀釋500倍，取1l稀釋血清參加10%(V/V)SRB05l，補體10l進展血清溶血素測定，記錄羊紅血球的半數(shù)溶血值(H50)。1.6抗體形成細胞(AF)檢測免疫方法同1.5，細胞懸液獲得方法同1.3，調(diào)細胞濃度至5106細胞/l?？瞻邷y定：將1%瓊脂糖融化后，45水浴保溫，與等量的2倍濃度的Hanks液混合，分裝小試管，1l/管。再向管內(nèi)加100l10%的SRB和40l脾細胞懸液，迅速混勻，傾注于底層凝膠外表，制成頂層凝膠。待瓊脂凝固后，置37放置11.5h;再加10倍稀釋的補體溶液1l，37放置11.5h后，計數(shù)空斑形成數(shù)，用

6、空斑數(shù)/106脾細胞來表示，受試組顯著高于對照組的空斑數(shù)，即可判斷該項實驗結(jié)果陽性。1.7小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞才能測定末次給藥后30in，每鼠ip20%雞紅細胞溶液1l/只，注射后30in脫頸椎處死小鼠，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2l，輕輕揉動每鼠腹部1in，然后用吸管汲取腹腔液體ll，均勻涂于2片載玻片上，放入墊有溫紗布的搪瓷盆內(nèi)，37水溫，30in后，生理鹽水漂洗，11丙酮甲醛液固定4%(V/V)Giesa一磷酸緩沖液染色3in，鏡下計數(shù)吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)和計算吞噬百分率及吞噬指數(shù);吞噬指數(shù)=(被吞噬雞紅細胞數(shù)/200個巨噬細胞)/2，吞噬百分率=(吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)/200個

7、巨噬細胞)100。1.8小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬碳廓清功能測定末次給藥后30in后，尾靜脈注射印度墨汁+生理鹽水(21)0.1l/10g，注射后2、15in與眼靜脈竇取血20l，置于2l0.1%Na23溶液中，7230分光光度計640n處比色，實驗取血后處死動，剖取肝臟及脾臟稱重，按以下公式計算吞噬指數(shù)K和校正廓清指數(shù)A。K=lgD1-lgD2/t2-t1，A=動物體重/(肝重+脾重)3k。1.9統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)用xs表示，采用SPSS11.0進展t檢驗。2結(jié)果2.1各組小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化才能比擬倒置顯微鏡下可見淋巴細胞存在，表現(xiàn)為體積增大，核膜明晰，核染色體疏松，核內(nèi)見明顯核仁24個，胞漿豐富

8、，有偽足樣突出。與正常對照組(0.4130.062)比擬，赤靈芝水提取物低和高劑量組及赤靈芝醇提取物低和高劑量組D值分別為1.2760.133、1.5130.129、0.7720.085和1.0701.044(均P0.001)，說明赤靈芝提取物明顯增強nA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化才能。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2各組小鼠SRB誘導(dǎo)24和48h的小鼠DTH程度比擬表1可見，與正常對照組比擬，赤靈芝提取物各組明顯抑制由SRB引起的DTH反響(P0.05及P0.01)。表1各組小鼠足跖部厚度比擬與正常對照組比擬：1)P0.05，2)P0.012.3各組小鼠H50測定結(jié)果比擬與正常對照組H50(163

9、.125.25)比擬，赤靈芝水提取物低(215.039.32)和高劑量組(188.9719.23)、赤靈芝醇提取物低(200.4115.11)和高劑量組(202.7573.12)H50值均明顯進步(P0.05及P0.01)。2.4各組小鼠空斑形成數(shù)比擬與正常對照組空斑形成數(shù)(15.07.56)比擬，赤靈芝水提取物低(70.021.51)和高劑量組(70.019.15)、赤靈芝醇提取物低(58.524.32)和高劑量組(40.014.14)均明顯進步(P0.001)。2.5各組小鼠腹腔巨噬細胞功能的測定比擬由表2可見，御惠牌赤靈芝精華各組均非常明顯增加腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的才能(P0.001)。表2各組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬指數(shù)和吞噬百分率比與正常對照組比擬：1)P0.0012.6各組小鼠單核巨噬細胞吞噬功能的程度比擬由表3可見，赤靈芝提取物各組與正常對照組比擬小鼠單核巨噬細胞吞噬功能均無明顯差異(P0.05)。表3各組小鼠單核巨噬細胞吞噬功能的影響3討論本實驗證明，赤靈芝提取物可直接刺激淋巴細胞轉(zhuǎn)化才能，增加抗體形成，表現(xiàn)為進步H50及增加抗體形成的細胞數(shù)目，