桑枝多糖的提取與含量測(cè)定

1、桑枝多糖的提取與含量測(cè)定【摘要】目的建立一種測(cè)定桑枝中多糖含量的方法。方法采用水提醇沉法對(duì)桑枝中的多糖進(jìn)展提取，用Sevag法等進(jìn)展純化，蒽酮-濃硫酸法測(cè)定多糖的含量。結(jié)果回歸方程：A=0.02494+0.0571，r=0.9995，線性范圍為0.080.4gL-1。桑枝多糖的含量為18.74%RSD=2.1%)，平均回收率為98.6%，RSD=1.4%。結(jié)論該法簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好，為桑枝的質(zhì)量控制提供了方法。Abstrat：bjetiveTestablishakindfdeteriningethdfntentsfplysaharidesinulberryTig.ethdsTheplysah

2、arideinulberryTigasextratedithaterandethanlpreipitatin.Anthrne-sulfniaidasappliedtanalysisfthententsfplysaharides.ResultsThententfplysaharidesinulberryTigas18.74g/g,averagereveryas98.6%,RSD=1.4%.nlusinTheresultsshedthatthisethdissiple,speifiandaurate.ItprvidesaethdfrassntrlfulberryTig.Keyrds：ulberyT

3、ig；Plysaharide；Anthrne-sulfniaidethd桑枝為?？浦参锷usalbaL.的嫩枝，ulberryTig桑枝：又名桑條，桑枝的藥用歷史悠久，?中國(guó)藥典?記載為祛風(fēng)濕，利關(guān)節(jié)的常用藥，用于治療肩臂關(guān)節(jié)酸痛麻木1。臨床應(yīng)用于關(guān)節(jié)腫痛、手足麻木、風(fēng)濕痹痛、癱瘓等多種疾玻多糖是多種中草藥的有效成分之一，多糖有非常廣泛的生物活性，能促進(jìn)人體的免疫功能，具有抗腫瘤、抗病毒、抗突變、抗輻射及降血壓等成效2，3。對(duì)桑枝中多糖的研究具有重要的意義。有關(guān)桑枝多糖的化學(xué)研究，未見報(bào)道。為有效開發(fā)利用桑枝藥材資源，提醒桑枝多糖與藥效的關(guān)系，本文采用超聲提取法提取桑枝中的多糖，蒽酮-濃硫酸

4、法測(cè)定多糖的含量4，5。1儀器與試劑2方法2.1桑枝多糖的提取稱取枯燥至恒重并過40目篩的桑枝粉末100g，加水適量，于95時(shí)超聲提取30in，過濾，濾渣于95超聲再提取30in，一樣條件下提取3次，合并提取液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至100l，在其中加95%乙醇至含醇量為85%，4時(shí)靜置過夜。于40000r/in的條件下離心別離，離心后的沉淀物加少量熱水溶解，再加95%乙醇至含醇量為85%，靜置過夜，離心別離，得粗多糖。2.2多糖的精制植物粗多糖中一般含有蛋白質(zhì)，以游離態(tài)和結(jié)合態(tài)存在，將蛋白酶法和Sevag法結(jié)合起來，不但可脫去游離蛋白，而且可脫去結(jié)合蛋白質(zhì)。將上述得到的粗多糖溶于水，參加2%木

5、瓜蛋白酶，60時(shí)酶解2h，再用Sevag法氯仿正丁醇=41除蛋白15次。加1%活性碳脫色，抽濾，參加95%乙醇使含醇量達(dá)85%，4時(shí)靜置過夜，離心別離。沉淀物冷凍枯燥，即得精制淡黃色的桑枝多糖。將多糖溶液進(jìn)展200400n紫外區(qū)掃描，無特征吸收峰，茚三酮反響為陰性，說明桑枝多糖中的蛋白質(zhì)已除干凈。3結(jié)果與討論3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精細(xì)稱取葡萄糖對(duì)照品0.1000g，用蒸餾水溶解并定容至100l，配成濃度為1.000g/l的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液。3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精細(xì)汲取上述葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5l于100l的容量瓶中，用蒸餾水定溶至刻度。分別取2.0l于25l具塞

6、試管中，加蒽酮-濃硫酸試劑4l，放入沸水浴中加熱8in，迅速冷卻至室溫。于620n處測(cè)定吸光度值，計(jì)算回歸方程：A=0.02494+0.0571，r=0.9995，線性范圍為0.080.4gL-1。3.3換算因子的測(cè)定精細(xì)稱取精制后的桑枝多糖0.0100g，用少量熱蒸餾水溶解后，定溶于100l容量瓶中，搖勻。精細(xì)汲取此溶液2l于25l具塞試管中，加蒽酮-濃硫酸試劑4l，沸水浴中加熱8in，迅速冷卻至室溫，于620n處測(cè)定吸收度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度，再按下式計(jì)算換算因子，得f=9.6189。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.f=D式中為多糖質(zhì)量g，為多糖濃度gL-1，D為稀釋因子。3.4精細(xì)度實(shí)驗(yàn)精細(xì)汲取

7、對(duì)照品溶液1.0l，10份，于25l具塞試管中，加蒽酮-濃硫酸4l，沸水浴中加熱8in，迅速冷卻至室溫。于620n處測(cè)定吸光度值。結(jié)果吸光度的RSD=1.4%。3.5樣品溶液的測(cè)定準(zhǔn)確稱取過40目篩的枯燥桑枝粉末約0.5g4份，置于100l容量瓶中，加水適量，在95水溫中超聲提取30in，過濾于另一100l容量瓶中，洗滌濾渣屢次，用水稀釋至刻度。精細(xì)汲取樣品溶液5.0l，置100l容量瓶中加水稀釋至刻度。將稀釋后的溶液精細(xì)汲取2.0l置25l具塞試管中，參加蒽酮濃硫酸試劑4l，沸水浴中加熱8in，迅速冷卻至室溫，于620n處測(cè)定吸光度值，代入回歸方程求多糖濃度。根據(jù)下式計(jì)算含量。含量=Df式中

8、為樣品質(zhì)量，為糖濃度，f為換算因子，D為稀釋因子。由上式可算出桑枝多糖的含量為18.74%(RSD=1.4%)。3.6回收率實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取桑枝樣品約0.5g6份，分別參加不同量的精制后的桑枝多糖溶液，按3.5項(xiàng)下操作，測(cè)得平均回收率為98.6%，RSD=1.4%。4討論4.1實(shí)驗(yàn)條件的選擇蒽酮-硫酸比色法是測(cè)定多糖含量較為經(jīng)典有效的方法之一。對(duì)于硫酸的用量，經(jīng)實(shí)驗(yàn)比照認(rèn)為硫酸占總體積62.5%以上時(shí)，使實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性及回收率等較好。關(guān)于多糖的枯燥，許多文獻(xiàn)都是采用真空枯燥和冷凍枯燥。在真空枯燥器中放入五氧化二磷或固體氫氧化鈉等枯燥劑，保持高度真空度，可進(jìn)步枯燥速度。也有文獻(xiàn)報(bào)道用60烘干。

9、我們經(jīng)過屢次實(shí)驗(yàn)證實(shí)，枯燥多糖不能加熱，否那么會(huì)使多糖變成黏稠的半固體狀態(tài)；同樣也不能室溫下緩慢枯燥，這樣也會(huì)使多糖變成難溶的角質(zhì)塊狀物。4.2乙醇的濃度對(duì)多糖提取率的影響取5月份的桑枝粉200g，于95時(shí)超聲提取3次30in/次，合并濾液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至450l，將其分為9份，參加乙醇，使含醇量分別為30%，40%，50%，60%，70%，75%，80%，85%，90%，靜置過夜，離心別離，沉淀用95%乙醇、丙酮、乙醚等洗滌屢次，60真空枯燥。依法測(cè)定含量，求提取率，見圖1。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)含醇量達(dá)85%時(shí)，多糖的含量較高，本實(shí)驗(yàn)選含醇85%為醇沉條件。4.3提取溫度的選擇固定提取時(shí)間為30in，分別在60，70，80，90，95，100超聲提取1次。結(jié)果見圖2。從圖2可知，提取溫度為95時(shí)，提取率較高，本實(shí)驗(yàn)選95為超聲提取溫度。4.4提取時(shí)間的選擇確定提取溫度為95，提取1次，比擬超聲提取10，20，30，40，50in時(shí)對(duì)提取率的影響。見圖3。4.5提取次數(shù)的選擇上述實(shí)驗(yàn)說明，提取時(shí)間為30in，提取溫度為95為最正確提取條件，在此條件下，研究了不同提取次數(shù)對(duì)提取率的影響。結(jié)果證明，提取3次，效率最高?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，部S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2022：210.2譚周進(jìn)，謝達(dá)平.多糖的研究進(jìn)展J.食品科