牛血清的病毒安全檢測(cè)與病毒滅活工藝課件

1、中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會(huì)質(zhì)量控制專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第三屆動(dòng)物血清生產(chǎn)與管理學(xué)術(shù)研討會(huì)牛血清的病毒安全檢測(cè)與病毒滅活工藝Viral Safety Detection and Viral Removal/Inactivation of Bovine Serum 章金剛軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所國(guó)家生物醫(yī)學(xué)分析中心病毒安全檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室北京 1008502007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所牛血清的重要性與生物藥品的病毒安全性牛的病原與病毒安全性關(guān)注的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛血清病毒檢測(cè)的要求病毒分類(lèi)與牛的某些病毒牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)血清的病毒清除/滅活工藝病毒安全實(shí)驗(yàn)室的部分研究工作2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院

2、輸血醫(yī)學(xué)研究所在人用和動(dòng)物用疫苗的制備過(guò)程中，牛血清是最為重要的細(xì)胞培養(yǎng)添加物。鑒于世界衛(wèi)生組織（WHO）提倡疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)從動(dòng)物的使用轉(zhuǎn)換為細(xì)胞培養(yǎng)，牛血清的應(yīng)用會(huì)得到進(jìn)一步的擴(kuò)大?？梢哉J(rèn)為，如果沒(méi)有充足牛血清的供應(yīng)，許多醫(yī)藥產(chǎn)品的生產(chǎn)和供應(yīng)均將受到極大的影響。牛血清的重要性與生物藥品的病毒安全性2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所WHO和各國(guó)管理當(dāng)局、行業(yè)協(xié)會(huì)等高度關(guān)注醫(yī)藥產(chǎn)品生產(chǎn)使用細(xì)胞基質(zhì)的安全問(wèn)題，尤其是潛在病毒污染的問(wèn)題。疫苗病毒安全性的可能污染途徑：活疫苗種毒的污染，制備工藝中原、敷料的污染和其他需要考慮的問(wèn)題。其中，牛血清的質(zhì)量控制與病毒安全檢測(cè)最受關(guān)注。 牛血清的

3、重要性與生物藥品的病毒安全性2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所牛血清的重要性與生物藥品的病毒安全性牛的病原與病毒安全性關(guān)注的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛血清病毒檢測(cè)的要求病毒分類(lèi)與牛的某些病毒牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)血清的病毒清除/滅活工藝病毒安全實(shí)驗(yàn)室的部分研究工作2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所消除牛源病原體技術(shù)2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所DNA病毒牛乳頭狀瘤病毒（bovine papillomaviruses, BPV）牛多型瘤病毒（bovine polyomaviruses, BPyV）腺病毒（Adenoviruses）皰疹病毒（Herpesviruses）牛痘病

4、毒（Poxviruses）細(xì)小病毒（Parvovirus）等牛可以感染的病毒2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所值得關(guān)注的對(duì)象潛在性感染的病毒：（1）隱性感染而不引起任何疾病的病毒；（2）某些持續(xù)性感染的病毒；（3）處于潛伏狀態(tài)的病毒。由于機(jī)體生理狀態(tài)（如懷孕）、外界環(huán)境的變化，機(jī)體抵抗力下降等因素，這類(lèi)病毒可能大量增殖或引起疾病的發(fā)生。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所關(guān)注的對(duì)象內(nèi)源性病毒：內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒（ERV）是指以前病毒DNA形式整合進(jìn)宿主細(xì)胞基因組中，并隨細(xì)胞染色體復(fù)制而復(fù)制的反轉(zhuǎn)錄病毒。朊病毒：朊病毒是亞病毒中的重要感染因子，侵害動(dòng)物與人類(lèi)。因其主要由蛋白質(zhì)構(gòu)成

5、，迄今尚無(wú)含有核酸的確切證據(jù)，故暫定名為朊病毒(Virino)或蛋白侵染子(Prion)。由于對(duì)各種朊病毒的本質(zhì)的了解不夠，采用“因子”命名，例如癢疫因子和牛海綿狀腦病因子等，似乎較為恰當(dāng)。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所重點(diǎn)關(guān)注兩大類(lèi)病毒應(yīng)該考慮生物安全性的病毒集中在兩個(gè)方面：人獸共患病病毒與致癌、免疫抑制或嚴(yán)重退行疾病有關(guān)的病毒 2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸

6、血醫(yī)學(xué)研究所牛血清的重要性與生物藥品的病毒安全性牛的病原與病毒安全性關(guān)注的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛血清病毒檢測(cè)的要求病毒分類(lèi)與牛的某些病毒牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)血清的病毒清除/滅活工藝病毒安全實(shí)驗(yàn)室的部分研究工作2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所三 牛源制品的病毒安全性脊椎動(dòng)物病毒的形態(tài)DNA病毒2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所脊椎動(dòng)物病毒的形態(tài)RNA病毒2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所DNA病毒牛乳頭狀瘤病毒根據(jù)交叉雜交試驗(yàn)，可以感染牛的乳瘤病毒分為6個(gè)主要亞群，每一種病毒在牛的皮膚產(chǎn)生特定的病變。某些亞群可以轉(zhuǎn)化人細(xì)胞，這些病毒與牛的消化道、生殖道和眼部腫瘤等的發(fā)展

7、有關(guān)。不能用細(xì)胞感染檢測(cè)，可用PCR檢測(cè)。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所DNA病毒牛多型瘤病毒牛多型瘤病毒（bovine polyomaviruses,BPyV）分類(lèi)地位：乳多空病毒科，多型瘤病毒屬形態(tài)特征：無(wú)囊膜，45nm理化特性：對(duì)酸、堿、有機(jī)溶劑有抵抗PCR檢測(cè)，BPyV在胎牛血清中的污染批次達(dá)70，可從某些批次的血清中分離到病毒。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所DNA病毒牛腺病毒牛腺病毒（Adenoviruses）分類(lèi)地位：腺病毒科，哺乳動(dòng)物腺病毒屬形態(tài)特征：無(wú)囊膜，90nm理化特性：對(duì)酸、堿、有機(jī)溶劑有抵抗分2個(gè)主要亞群，10個(gè)血清型。2007年09月軍事醫(yī)

8、學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所DNA病毒牛腺病毒尚不清楚是否人獸共患，但可以轉(zhuǎn)化人細(xì)胞。能用細(xì)胞感染檢測(cè)，1群感染牛胚腎細(xì)胞并迅速產(chǎn)生細(xì)胞病變，2群感染牛睪丸細(xì)胞，有時(shí)需要盲傳。也可用PCR檢測(cè)。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所DNA病毒牛皰疹病毒牛皰疹病毒（Herpesviruses）：有囊膜，150nm，有4個(gè)種。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所DNA病毒牛皰疹病毒BHV-1:引起牛鼻氣管炎，牛源制品應(yīng)該檢測(cè)病毒。能用細(xì)胞感染檢測(cè)，也可用PCR檢測(cè)。BHV-2:引起牛潰瘍性乳頭炎，奶制品的污染。BHV-3:引起牛惡性卡他熱，具有異源宿主感染性。BHV-5:引起牛腦炎。200

9、7年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所DNA病毒牛痘病毒牛痘病毒（Poxviruses）：有囊膜，300nm，有2個(gè)種病毒必須考慮。假牛痘病毒牛丘疹性口炎病毒Orf virus2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所DNA病毒牛痘病毒假牛痘病毒:引起牛乳房和乳頭增生性病變、擠奶工皮膚丘疹。牛丘疹性口炎病毒引起?？谇徽衬?、鼻鏡、鼻孔上皮潰瘍，人的手、臂丘疹。牛源制品應(yīng)該檢測(cè)病毒。能用細(xì)胞感染檢測(cè)，也可用PCR檢測(cè)。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所RNA病毒口蹄疫病毒口蹄疫病毒（FMDV）：無(wú)囊膜，20nm，人獸共患，最重要。能用細(xì)胞感染檢測(cè)，也可用PCR檢測(cè)。2007年09月軍事

10、醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所RNA病毒牛病毒性腹瀉病毒牛腹瀉病毒（BVDV）：有囊膜，70nm，牛群中普遍存在，倍受關(guān)注。能用細(xì)胞感染檢測(cè)，也可用PCR檢測(cè)。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所RNA病毒牛輪狀病毒牛輪狀病毒：無(wú)囊膜，80nm，牛群中普遍存在，對(duì)人和牛的危害不大。能用細(xì)胞感染、ELISA等檢測(cè)，也可用PCR檢測(cè)。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所RNA病毒牛呼腸孤病毒呼腸孤病毒：無(wú)囊膜，80nm，牛群中普遍存在，對(duì)人和牛的危害不大。能用細(xì)胞感染、ELISA等檢測(cè)，也可用PCR檢測(cè)。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所RNA病毒牛反轉(zhuǎn)錄病毒與生物安全性相關(guān)的

11、牛反轉(zhuǎn)錄病毒有兩種牛白血病病毒（BLV）牛免疫缺陷病病毒（BIV）2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所RNA病毒牛白血病病毒牛白血病病毒（BLV）：有囊膜，100nm，牛群中普遍存在。未發(fā)現(xiàn)對(duì)人的感染性，可用PCR檢測(cè)。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所RNA病毒牛免疫缺陷病病毒牛免疫缺陷病病毒（BIV）：有囊膜，120nm，國(guó)內(nèi)牛群陽(yáng)性率2.32，對(duì)人和牛的危害不大。用蛋白印跡法檢測(cè)，也可用PCR檢測(cè)。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所朊病毒朊病毒引起的人和動(dòng)物的疾病多種動(dòng)物和人的亞急性海綿樣腦病與羊癢疫因子有關(guān)人的庫(kù)魯病(Kuru)、克-雅氏病(Creutzfe

12、ldt-Jakob disease)、 阿耳茨海默病(Alzheimer disease)、格-史氏綜合征(Gerstmann-Straussler syndrome)羊的癢疫(Scrapie)，水貂傳染性腦病(Transmissible mink encephalopathy)，黑尾鹿和糜鹿的慢性消耗病(Chronic wasting disease of mule deer and elk)，牛海綿狀腦病(Bovine spongiform encephalpopathy)以及某些公園動(dòng)物的相關(guān)感染癥。 2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所朊病毒Prusiner 1982: the

13、 plaque protein is the infectious agent (prion)The normal, non-infectious Protein (PrPC) is encoded by the host and is mainly expressed on lymphocytes and neuronsThe infectious prion protein (PrPSc) has the same amino acid composition, but is resistant to proteases and tends to polymerize2007年09月軍事醫(yī)

14、學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所朊病毒2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所朊病毒2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所veryslowrapidrapidPrPCPrPScPrPCPrPScSeeding model (nucleated crystallization)Refolding model (template directed)朊病毒2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所牛血清的重要性與生物藥品的病毒安全性牛的病原與病毒安全性關(guān)注的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛血清病毒檢測(cè)的要求病毒分類(lèi)與牛的某些病毒牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)血清的病毒清除/滅活工藝病毒安全實(shí)驗(yàn)室的部分研究工作2007年09

15、月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞培養(yǎng)抗體檢測(cè)抗原檢測(cè)核酸檢測(cè)牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞培養(yǎng)主要檢測(cè)血清中是否存在可致敏感細(xì)胞病變的病毒，一般要求至少使用2種細(xì)胞，其中1種細(xì)胞為牛源細(xì)胞。牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所抗體檢測(cè)主要檢測(cè)血清中某些病毒的抗體，預(yù)示牛群曾經(jīng)感染病毒或接種過(guò)疫苗，普遍要求BVDV抗體為必檢項(xiàng)目牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所抗原檢測(cè)主要檢測(cè)血清中某些病毒蛋白的存在，預(yù)示血清來(lái)源的牛群近期感染或潛在感染了某種病毒，如BVDV、BTV、腺病毒、狂犬病病毒

16、等，常用的方法是ELISA、免疫熒光技術(shù)等牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所核酸檢測(cè)主要檢測(cè)血清中某些病毒核酸的存在，預(yù)示血清來(lái)源的牛群近期感染或潛在感染了某種病毒，如BVDV、FMDV、BTV、細(xì)小病毒等，常用的方法是PCR、RT-PCR、熒光定量PCR等。 牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所朊病毒的構(gòu)象依賴(lài)性免疫測(cè)定構(gòu)象依賴(lài)性免疫測(cè)定方法（conformation-dependent immunoassay, CDI）能檢出微量的prion蛋白，5 h即可出結(jié)果?？蓹z測(cè)出8株prion，其中包括分別導(dǎo)致綿羊癢病、鹿的慢性消

17、耗性疾病和瘋牛病的各株prion?？捎糜跈z測(cè)活動(dòng)物。對(duì)西班牙、德國(guó)和英國(guó)的11000頭屠宰牛檢測(cè)結(jié)果完全與現(xiàn)在應(yīng)用的方法相符，而且在實(shí)驗(yàn)室和田間試驗(yàn)中，還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。該方法的另一突出優(yōu)點(diǎn)是自動(dòng)化，因此可以用于大量動(dòng)物的篩選。 牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所Positive Control Dilution to End-Point朊病毒2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所牛血清的重要性與生物藥品的病毒安全性牛的病原與病毒安全性關(guān)注的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛血清病毒檢測(cè)的要求病毒分類(lèi)與牛的某些病毒牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)血清的病毒清除/滅活工藝病

18、毒安全實(shí)驗(yàn)室的部分研究工作2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所血清的病毒清除/滅活工藝鑒于牛血清中病毒污染的危險(xiǎn)性，在進(jìn)行病毒直接檢測(cè)的同時(shí)，對(duì)血清進(jìn)行病毒清除與滅活很有必要。醫(yī)藥管理當(dāng)局也強(qiáng)烈推薦對(duì)牛血清進(jìn)行病毒滅活和驗(yàn)證。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所血清的病毒清除/滅活工藝生物技術(shù)產(chǎn)品病毒清除與滅活的技術(shù)方法巴斯德消毒法（巴氏消毒法）干熱法（凍干制品）有機(jī)溶劑/去污劑（S/D）處理法膜過(guò)濾法低pH孵放法-射線法2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所血清的病毒清除/滅活工藝適于牛血清病毒清除與滅活的技術(shù)方法對(duì)于牛血清，病毒滅活多選用-射線法。選取原則均需驗(yàn)證病毒

19、去除/滅活工藝的有效性，不影響血清的質(zhì)量。 2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所常用的射線放射源有兩種: 60鈷和137銫射線的產(chǎn)生 射線來(lái)自核的轉(zhuǎn)變,由光子組成。在放射性衰變過(guò)程中所形成的子核處于激發(fā)和不穩(wěn)定狀態(tài),當(dāng)由高激發(fā)態(tài)躍遷回到低激發(fā)態(tài)時(shí)即釋放出 射線。射線滅活病原體的種類(lèi)與產(chǎn)生2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所 射線滅活病原體的機(jī)理直接作用：指射線直接破壞病原體的核酸、蛋白質(zhì)和酶等生命有關(guān)的物質(zhì)。 當(dāng)病原體受到射線照射時(shí)，接受光子能量的電子由低能級(jí)殼層躍到高能級(jí)殼層，使原子呈激發(fā)狀態(tài)，而當(dāng)激發(fā)能高于分子電離電位時(shí)，則分子發(fā)生電離，破壞了共價(jià)鍵，從而破壞了病原體的分子

20、結(jié)構(gòu)。間接作用：指射線作用于病原體時(shí)，其中的水分子等輻解產(chǎn)生自由基，自由基再作用于生命物質(zhì)而使病原體死亡。自由基攻擊DNA分子中的堿基、核糖和磷酸二酯鍵,造成堿基與核糖氧化、鏈斷裂、與蛋白質(zhì)交聯(lián)等多種類(lèi)型的損傷。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所射線消毒殺菌的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：不使物品升溫；穿透力強(qiáng)；被照物品不會(huì)產(chǎn)生放射性，輻照后無(wú)殘留毒性；方法簡(jiǎn)便；節(jié)省人力、節(jié)約能源。缺點(diǎn)：安全性（人的吸收劑量達(dá)12Gy即可引起輕度急性放射病，若靠近放射源，則數(shù)秒鐘即可致死；30cm鉛板、150cm混凝土或5cm深的水可以阻擋放射源對(duì)人的危害）； 對(duì)物品的影響（可使血液溶血，有些藥品如蛋白酶水溶液、胰島

21、素溶液等，照射后幾乎90以上被破壞；可使普通玻璃變黃，也可使棉纖維解聚而降低其抗張強(qiáng)度；亦可使食物變色變味，有的蔬菜、水果香味喪失，某些營(yíng)養(yǎng)成分喪失）。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所纖維蛋白原病毒滅活前后效果比較病毒滅活前的纖維蛋白原 病毒滅活后的纖維蛋白原2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所射線輻照在血漿病毒滅活中的應(yīng)用馬平,周錫鵬,張艷宇,等.60Co-射線對(duì)凍干血漿中病毒滅活效果的研究J.中國(guó)消毒學(xué)雜志,2005,22(4):424-426凍干血漿中病毒滅活效果60Co-射線輻照處理結(jié)果顯示,60Co-射線滅活凍干血漿中病毒的效果隨輻照劑量增加而增強(qiáng)。30kGy以上

22、的輻照劑量能完全滅活血漿中滴度在5.5 lgTCID50以上的各指示病毒。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所牛血清的重要性與生物藥品的病毒安全性牛的病原與病毒安全性關(guān)注的重點(diǎn)歐盟對(duì)牛血清病毒檢測(cè)的要求病毒分類(lèi)與牛的某些病毒牛血清的病毒安全檢測(cè)技術(shù)血清的病毒清除/滅活工藝病毒安全實(shí)驗(yàn)室的部分研究工作2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所病毒安全檢測(cè)的有關(guān)工作血液生物制品與病毒安全檢測(cè)研究室：應(yīng)用發(fā)展研究為主，應(yīng)用基礎(chǔ)研究為輔；以血液制品及病毒安全性為主線，適當(dāng)拓展研究領(lǐng)域；積極尋求合作，發(fā)揮集成優(yōu)勢(shì)。下設(shè)課題組/方向：血漿蛋白的分離純化工藝、特性鑒定、藥理藥效等重組蛋白的研究：原

23、核、酵母、哺乳細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等抗體制備與應(yīng)用：?jiǎn)慰?、基因重組單抗等配套研究病毒安全檢測(cè)：國(guó)家生物醫(yī)學(xué)分析中心分支血型抗原的相關(guān)研究2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所病毒安全檢測(cè)的有關(guān)工作病毒安全檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室掛靠在國(guó)家生物醫(yī)學(xué)分析中心。主要工作包括以下幾個(gè)方面：病毒滅活工藝與檢測(cè)技術(shù)：血漿衍生物、生化制品、相關(guān)原材料等異種移植的病毒安全性研究：國(guó)家項(xiàng)目為主抗病毒藥物的篩選：自選與合作項(xiàng)目為主單克隆抗體的制備與應(yīng)用：自選與合作項(xiàng)目為主2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所病毒安全檢測(cè)的有關(guān)工作生物活性材料的病毒安全性檢測(cè)：牛血清、血漿衍生物、生化制品、相關(guān)原材料等符合規(guī)范的二級(jí)上午

24、安全實(shí)驗(yàn)室2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所牛血清病毒安全檢測(cè)的相關(guān)工作細(xì)胞基質(zhì)與指示病毒細(xì)胞基質(zhì)體系完善：擁有30種以上動(dòng)物的傳代細(xì)胞系；自行制備的牛、人原代與繼代細(xì)胞指示病毒體系完善：DNA病毒與RNA病毒；有囊膜病毒與無(wú)囊膜病毒完全可以滿(mǎn)足牛血清病毒安全檢測(cè)與病毒清除/滅活工藝研究與驗(yàn)證的要求。2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所牛血清病毒安全檢測(cè)的相關(guān)工作BVDV方面抗體檢測(cè)：目前直接使用IDEXX的ELISA試劑盒，正在組建全病毒抗原和基因重組抗原的ELISA試劑盒。1 陽(yáng)性對(duì)照平均值22 陰性對(duì)照平均值2-21 樣品1-20 s/p值按試劑盒要求，陰性平均值應(yīng)小于

25、0.20，本次測(cè)定陰性平均值小于0.05，測(cè)定結(jié)果有效。樣品S/P值大于0.5判為陽(yáng)性，本次實(shí)驗(yàn)20份原料血樣品的抗體檢測(cè)S/P值均小于此值，故全部判為陰性。原料血漿BVDV抗體檢測(cè)結(jié)果 2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所牛血清病毒安全檢測(cè)的相關(guān)工作BVDV方面核酸檢測(cè)：自行建立了RT-PCR檢測(cè)技術(shù)?？乖瓩z測(cè)：正在制備BVDV的單克隆抗體和表達(dá)了相關(guān)基因2007年09月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血醫(yī)學(xué)研究所牛血清病毒安全檢測(cè)的相關(guān)工作BTV方面抗體檢測(cè)：自行建立了c-ELISA試劑盒?？乖瓩z測(cè)：正在進(jìn)行中，主要是標(biāo)記的熒光抗體。純化VP7蛋白和3E2-HRP單抗的競(jìng)爭(zhēng)ELISA反應(yīng)特異性柱狀圖 與VMRD公司c-ELISA試劑盒比較樣品1:2和1:4倍稀釋時(shí)，組裝試劑盒檢測(cè)與美國(guó)c-ELISA試劑盒符合率為100%；樣品1:8倍稀釋?zhuān)珺TV-18和BTV-22組裝試劑盒為陽(yáng)性，進(jìn)口試劑盒為陰性；1:16倍稀釋時(shí)，BTV-6組裝試劑盒為陽(yáng)性，進(jìn)口試劑盒為陰性，其余相同；1:32和1:64倍稀釋時(shí)；BTV-19組裝試劑盒為陽(yáng)性