急性毒性毒理

1、8/8考察一個藥物的急性毒性應(yīng)該是全面的，它的 YPLINK 實(shí)驗(yàn)方法有半數(shù)致死量、最大耐受量、固定劑量法、近似致死量法、近似半數(shù)致死量法 ;動物選擇也可用不同的動物，通常選用2種以上動物；動物數(shù)量也可根據(jù)試驗(yàn) YPERLN ” t ” 設(shè)計不同而異。實(shí)驗(yàn)一、 L50的測定目的 通過實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)測定藥物50的方法、步驟和計算過程，了解急性毒性 試驗(yàn)的常規(guī)。 材料 小鼠5只(體重25g，雌雄各半) 注射器及針頭 鼠籠 普魯卡因 溶液（本實(shí)驗(yàn)以普魯卡因?yàn)樵囼?yàn)藥物)苦味酸溶液方法 根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計要求不同，下列步驟要求略有不同。探索劑量范圍 取小鼠8-10只,以2只為一組分成45組,選擇組距較大的一系列劑量

2、,分別按組腹腔注射和灌胃普魯卡因溶液,觀察出現(xiàn)的癥狀并記錄死亡數(shù)，找出引起及10%死亡率（至少應(yīng)找出引起2%8死亡率）劑量的所在范圍. 2. 進(jìn)行正式試驗(yàn)在預(yù)初試驗(yàn)所獲得的0%和1致死量范圍內(nèi)，選用幾個劑量(一般用5個劑量按等比級數(shù)增減)；盡可能使半數(shù)組的死亡率都在50以上，另半數(shù)組的死亡率都在50以下。各組動物的只數(shù)應(yīng)相等或相差無幾，每組10只左右,動物的體重和性別要均勻分配。完成動物分組和劑量計算后按組腹腔注射給藥。最好先從中劑量組開始，以使能從最初幾組動物接受藥物后的反應(yīng)來判斷兩端的劑量是否合適，否則可隨時進(jìn)行調(diào)整。L50測定中應(yīng)觀察記錄的項(xiàng)目：實(shí)驗(yàn)各要素:實(shí)驗(yàn)題目，實(shí)驗(yàn)日期，室溫，檢品

3、的批號、規(guī)格、來源、理化性狀、配制方法及所用濃度等；動物品系、來源、性別、體重、給藥方式及劑量（藥物的絕對量與溶液的容量）和給藥時間等。給藥后各種反應(yīng)；潛伏期(從給藥到開始出現(xiàn)毒性反應(yīng)的時間）；中毒現(xiàn)象及出現(xiàn)的先后順序，開始出現(xiàn)死亡的時間;死亡集中時間；末只死亡時間；死前現(xiàn)象。逐日記錄各組死亡只數(shù)。尸解及病理切片:從給藥時開始記時，凡兩小時以后死亡的動物,均及時尸解以觀察內(nèi)臟的病變，記錄病交情況。若有肉限可見變化的則需進(jìn)行病理檢查.整個實(shí)驗(yàn)一般要觀察1天,觀察結(jié)束時，對全部存活動物稱重，尸解,同樣觀察內(nèi)臟病變并與中毒死亡鼠尸解情況相比較。當(dāng)發(fā)現(xiàn)有病變時,也同樣作病理檢查，以比較中毒后病理改變及

4、恢復(fù)情況?！緢蟾嬉c(diǎn)】結(jié)果處理受試劑量 （mgkg）對數(shù)劑量（X)動物數(shù)(只）死亡動物數(shù)(只）死亡率（%)概率單位 (Y）LD50及置信限(95）2、 結(jié)果計算（1) 根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計,采用相應(yīng)的方法計算D50,一般采用簡化概率法或寇氏改進(jìn)法,如有計算器程序或計算機(jī)軟件可使用lisss計算法。(2) 計算lg D50的標(biāo)準(zhǔn)誤。（3）計算95%可信限（必要時另計算99可信限）.(4） 兩個L50值的比較 當(dāng)欲比較同一藥物前后兩次LD0測定值或兩個不同藥物的LD50值時,可用兩組t檢驗(yàn)法進(jìn)行比較，但計算中不能直接計算5的差值,而應(yīng)用lgLD50的差值,因在LD0計算中是采用對數(shù)劑量進(jìn)行的。注：從不同性

5、別動物或以不同途徑給藥獲得的結(jié)果應(yīng)分別列表.若發(fā)現(xiàn)中毒反應(yīng)和死亡率對不同動物性別有明顯差別，則應(yīng)選用比較敏感的性別進(jìn)行復(fù)試。急性毒性試驗(yàn)是指一次或4小時內(nèi)多次染毒的試驗(yàn),是毒性研究的第一步。要求采用嚙齒類或非嚙齒類兩種動物.通常為小鼠或大鼠采用經(jīng)口、吸入或經(jīng)皮染毒途徑。急性毒性試驗(yàn)主要測定半數(shù)致死量（濃度），觀察急性中毒表現(xiàn)，經(jīng)皮膚吸收能力以及對皮膚、粘膜和眼有無局部刺激作用等,以提供受試物質(zhì)的急性毒性資料,確定毒作用方式、中毒反應(yīng),并為亞急性和慢性毒性試驗(yàn)的觀察指標(biāo)及劑量分組提供參考.概述及染毒方法YPELINK o 編輯本段 編輯一、概念和試驗(yàn)?zāi)康?一)急性毒性概念急性毒性是指機(jī)體(人或?qū)?/p>

6、驗(yàn)動物）一次（或24小時內(nèi)多次)接觸 HYPRLINK ” t ”外來化合物之后所引起的中毒效應(yīng)，甚至引起死亡。但須指出化合物使實(shí)驗(yàn)動物發(fā)生中毒效應(yīng)的快慢和劇烈的程度，可因所接觸的化合物的質(zhì)與量不同而異。有的化合物在實(shí)驗(yàn)動物接觸致死劑量的幾分鐘之內(nèi)，就可發(fā)生中毒癥狀,甚至死亡。而有的化合物則在幾天后才顯現(xiàn)中毒癥狀和死亡，即遲發(fā)死亡。此外，實(shí)驗(yàn)動物接觸化合物的方式或途徑不同,“一次”的含義也有所不同.凡經(jīng)口接觸和各種方式的注射接觸,“一次是指在瞬間將受試化合物輸入實(shí)驗(yàn)動物的體內(nèi)。而經(jīng)呼吸道吸入與經(jīng)皮膚接觸,“一次”是指在一個特定的期間內(nèi)實(shí)驗(yàn)動物持續(xù)地接觸受試化合物的過程，所以“一次”含有時間因素

7、。（二) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.求出受試化合物對一種或幾種實(shí)驗(yàn)動物的致死劑量(通常以LD50為主要參數(shù)）,以初步估計該化合物對人類毒害的危險性。2。闡明受試化合物急性毒性的劑量反應(yīng)關(guān)系與中毒特征。3利用急性毒性試驗(yàn)方法研究化合物在機(jī)體內(nèi)的 HYERLIK ” ”生物轉(zhuǎn)運(yùn)和 HYPELIN t ”生物轉(zhuǎn)化過程及其動力學(xué)變化。也可用于研究急救治療措施。二、實(shí)驗(yàn)動物和染毒方法(一) 實(shí)驗(yàn)動物選擇在衛(wèi)生毒理學(xué)領(lǐng)域中，體內(nèi)試驗(yàn)以實(shí)驗(yàn)動物為研究對象,最終是為了闡明受試 HYPRINK t 外來化合物對人的急性危害性質(zhì)和危害強(qiáng)度.所以選擇實(shí)驗(yàn)動物時,要求在其接觸化合物之后的 YERLIK t ”毒性反應(yīng)，應(yīng)當(dāng)與人接觸

8、該化合物的毒性反應(yīng)基本一致，雖然利用任何一種或幾種實(shí)驗(yàn)動物的急性毒性結(jié)果向人外推都必須十分慎重,但這一選擇實(shí)驗(yàn)動物的原則仍非常重要。1。 HYERLIN ” t 物種選擇以選擇哺乳動物為主.目前實(shí)際應(yīng)用中以大鼠和小鼠為主，尤以大鼠使用很多.需指出大鼠并非對外來化合物都最敏丅感.家兔常用于研究化合物的皮膚毒性，包括對粘膜的刺激.貓、狗也用于急性毒性試驗(yàn),但因價貴不易于大量使用。豬為雜食動物，對一些化合物的生物效應(yīng)表現(xiàn)與人有相似之處,尤其是皮膚結(jié)構(gòu)與人較近似。但因體大、價貴,不便大量使用。歸納起來，在進(jìn)行化合物急性毒性研究中,選擇實(shí)驗(yàn)動物的原則是：盡量選擇對化合物 YPERINK t ” 毒性反應(yīng)

9、與人近似的動物；易于飼養(yǎng)管理,試驗(yàn)操作方便;易于獲得、品系純化，且價格較低的動物。為了有利于預(yù)測化合物對人的危害，要求選擇兩種以上的實(shí)驗(yàn)動物，最好一種為嚙齒類，一種為非嚙齒類，分別求出其急性毒性參數(shù)。一般研究 HYPELINK” ” 外來化合物急性毒性，需雌雄兩性動物同時分別進(jìn)行,每個劑量組兩性動物數(shù)相等。急性毒性使用小鼠體重以1825、大鼠1040g、豚鼠2020g、家兔22。kg、貓52.kg左右為宜。(二) 實(shí)驗(yàn)動物喂養(yǎng)環(huán)境實(shí)驗(yàn)動物喂養(yǎng)室室溫應(yīng)控制在22，家兔可控制在203，相對濕度303，無對流風(fēng)。每籠動物數(shù)以不干擾動物個體活動及不影響試驗(yàn)觀察為度，必要時需單籠飼養(yǎng).飼養(yǎng)室采用人工晝夜

10、為好，早6點(diǎn)至晚6點(diǎn)進(jìn)行12小時光照，其余2小時黑暗，一般食用常規(guī)試驗(yàn)室飼料，自由飲水.(三) 實(shí)驗(yàn)動物染毒方法1。經(jīng)口(胃腸道）接觸目的是研究外來化合物能否經(jīng)胃腸道吸收及求出經(jīng)口接觸的HYPRLINK ” 致死劑量(D50）等。由于外來化合物可以污染飲水及食物，因此，此種染毒方式在衛(wèi)生毒理學(xué)中占有重要地位。（） 灌胃是將 HYPERINK ” t ” 液態(tài)受試化合物或固態(tài)、氣態(tài)化合物溶于某種 ERLINK ” 溶劑中，配制成一定濃度，裝入注射器等定量容器，經(jīng)過導(dǎo)管注入胃內(nèi)。在每一試驗(yàn)系列中，同物種實(shí)驗(yàn)動物灌胃體積最好一致，即以單位體重計算所給予的毫升數(shù)應(yīng)一致，即ml/kg或l/g計。這是因?yàn)?/p>

11、成年實(shí)驗(yàn)動物的胃容量與體重之間有一定的比例。按單位體重計算灌胃液的體積，受試化合物的吸收速度相對較為穩(wěn)定。小鼠一次灌胃體積在。21.0m/只或010。5l/10g體重較合適，大鼠一次灌胃體積不超過5m/只(通常用51.0ml100體重），家兔不超過1l2g體重，狗不超過50ml/10kg體重試驗(yàn)?zāi)康模?HYPELNK ” ” 急性毒性試驗(yàn)是在24小時內(nèi)給藥1次或2次（間隔6-8小時），觀察動物接受過量的受試藥物所產(chǎn)生的急性中毒反應(yīng),為多次反復(fù)給藥的毒性 HPEIK t” 試驗(yàn)設(shè)計劑量、分析毒性作用的主要HYEI t靶器官、分析人體過量時可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)、期臨床的劑量選擇和觀察指標(biāo)的設(shè)計提供參

12、考信息等.一、嚙齒類動物單次給藥的毒性試驗(yàn)（一）試驗(yàn)條件1動物品系:常用健康的小鼠、大鼠。選用其他動物應(yīng)說明原因。年齡一般為7-周齡。同批試驗(yàn)中,小鼠或大鼠的初始體重不應(yīng)超過或低于所用動物平均體重的0%。實(shí)驗(yàn)前至少馴養(yǎng)觀察1周，記錄 HYERLINK t ” 動物的行為活動、飲食、體重及精神狀況。2.飼養(yǎng)管理: HPERLNKt 動物飼料應(yīng)符合動物的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。若用自己配制的飼料,應(yīng)提供配方及營養(yǎng)成分含量的檢測報告；若是購買的飼料，應(yīng)注明生產(chǎn)單位。應(yīng)寫明動物飼養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境因素的控制情況。3受試藥物：應(yīng)注明受試藥物的名稱、批號、來源、純度、保存條件及配制方法.（二）試驗(yàn)方法：由于受試藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、

13、活性成分的含量、藥理、毒理學(xué)特點(diǎn)各異,毒性也不同，有的很難觀察到毒性反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)者可根據(jù)受試藥物的特點(diǎn),由下列幾種 HYPRINK ” t ”實(shí)驗(yàn)方法中選擇一種進(jìn)行YERLINK t 急性毒性試驗(yàn)。伴隨測定 HYRLINK ” ” 半數(shù)致死量(YPERLIK ” ” LD50）的急性毒性試驗(yàn)方法.2. HRLINK” t ” 最大耐受劑量（HYPRINK ”t MT)試驗(yàn)方法:最大耐受劑量，是引起動物出現(xiàn)明顯的中毒反應(yīng)而不產(chǎn)生死亡的劑量.最大受試藥物量試驗(yàn)方法:在合理的濃度及合理的容量條件下,用最大的劑量給予實(shí)驗(yàn)動物，觀察動物的反應(yīng)。單次口服固定劑量方法（Fixed-dsprocedur)。選擇

14、5、50、500和200g/kg四個固定劑量.實(shí)驗(yàn)動物首選大鼠，給藥前禁食61小時,給受試藥物后再禁食3-4小時。如無資料證明雄性動物對受藥試物更敏感，首先用雌性動物進(jìn)行預(yù)試。根據(jù)受試藥物的有關(guān)資料，由上述四個劑量中選擇一個作初始劑量，若無有關(guān)資料作參考,可用500gg作初始劑量進(jìn)行預(yù)試，如無毒性反應(yīng),則用000mg/kg進(jìn)行預(yù)試，此劑量如無死亡發(fā)生即可結(jié)束預(yù)試.如初始劑量出現(xiàn)嚴(yán)重的毒性反應(yīng),那就用HPERLIN ” t ” 下一個擋次的劑量進(jìn)行預(yù)試,如該動物存活,就在此兩個固定劑量之間選擇一個中間劑量試驗(yàn).每個劑量給一只動物,預(yù)試一般不超過5只動物。每個劑量試驗(yàn)之間至少應(yīng)間隔24小時。給受試

15、藥物后的觀察期至少天,如動物的毒性反應(yīng)到第7天仍然存在，尚應(yīng)繼續(xù)再觀察7天。在上述預(yù)試的基礎(chǔ)上進(jìn)行正式試驗(yàn)。每個劑量最少用10只動物,雌雄各半。根據(jù)預(yù)試的結(jié)果，由前面所述的四種劑量中選擇出可能產(chǎn)生明顯毒性但又不引起死亡的劑量；如預(yù)試結(jié)果表明，50mg/引起死亡，則降低一個劑量檔次試驗(yàn)。試驗(yàn)觀察:給受試藥物后至少應(yīng)觀察2周，根據(jù)毒性反應(yīng)的具體特點(diǎn)可適當(dāng)延長。對每只動物均應(yīng)仔細(xì)觀察和詳細(xì)記錄各種毒性反應(yīng)出現(xiàn)和消失的時間。給受試藥物當(dāng)天至少應(yīng)觀察記錄兩次,以后可每天一次.觀察記錄的內(nèi)容包括皮膚、粘膜、毛色、眼睛、呼吸、循環(huán)、自主及 HPELK ” 中樞神經(jīng)系統(tǒng)行為表現(xiàn)等.動物死亡時間的記錄要準(zhǔn)確.給

16、受試藥物前、給受試藥物后1周、動物死亡及試驗(yàn)結(jié)束時應(yīng)稱取動物的體重。所有動物包括死亡或處死的動物均應(yīng)進(jìn)行 YPERLI t 尸檢,尸檢異常的器官應(yīng)作病理組織學(xué)檢查.固定劑量試驗(yàn)法所獲得的結(jié)果,參考下表標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價。單次口服固定劑量試驗(yàn)法結(jié)果的評價劑量(mg/kg）試驗(yàn)結(jié)果存活數(shù)10%10%存活毒性表現(xiàn)明顯00%存活無明顯中毒表現(xiàn)50高毒(Very xc)(D502mgg）有毒（ HYERINK t ” oxic）（LD525200mg/kg）用mgk試驗(yàn)50。有毒或高毒用5mg/g進(jìn)行試驗(yàn)有害（Harmful）(LD50200-2000mg/k)用500mg/g試驗(yàn)500.0有毒或有害用mg/

17、kg試驗(yàn)LD2000g/kg用200mg/kg試驗(yàn)2000用500mg/kg試驗(yàn)該化合物無嚴(yán)重急性中毒的危險性反復(fù)給藥的毒性試驗(yàn)（長期毒性試驗(yàn))一、目的觀察動物反復(fù)給予受試藥物后，對機(jī)體產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度,主要的毒性靶器官及其損害的 HYPERLIN ” t 可逆性，提供無毒性反應(yīng)劑量及臨床上主要的監(jiān)測指標(biāo)，為制定人用劑量提供參考。二、試驗(yàn)條件（一)動物1。動物品系：一般用兩種動物,一種嚙齒類動物，另一種為非嚙齒類動物.常用S或ister大鼠和Begl狗或者猴。選用其他動物,應(yīng)說明原因。2.年齡:根據(jù)試驗(yàn)期限的長短而定。大鼠一般69周齡。Beleg狗一般2月齡.試驗(yàn)開始時體重差異不應(yīng)超

18、過或者低于該次試驗(yàn)動物平均體重的20。3。實(shí)驗(yàn)前至少馴養(yǎng)觀察2周。觀察記錄動物的行為活動、飲食、體重、精神狀況、心電圖、有關(guān)血液學(xué)及血液生化學(xué)等功能指標(biāo)。選擇正常、健康、雌性無孕動物作為受試動物。（二)飼養(yǎng)管理1飼料:所用飼料應(yīng)符合動物的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。若用自己配制的飼料，應(yīng)提供配方及營養(yǎng)成分含量的檢測報告；若是購買的飼料，應(yīng)提供生產(chǎn)單位.實(shí)驗(yàn)的環(huán)境條件:應(yīng)寫明動物飼養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境因素的控制情況。（三)受試藥物：應(yīng)寫明受試物的名稱、批號、來源、純度、保存條件及配制方法。三、試驗(yàn)方法 （一）試驗(yàn)分組：一般設(shè)三個劑量組和一個對照組。必要時尚需設(shè)溶媒對照組。低劑量組原則上應(yīng)高于同種動物藥效 HYPLINK ”

19、 t” 有效劑量,在此劑量下,動物不出現(xiàn)毒性反應(yīng);高劑量組原則上應(yīng)使動物產(chǎn)生明顯的或嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，甚至引起少數(shù)動物死亡；為觀察毒性反應(yīng)的劑量關(guān)系,在高、低劑量組之間應(yīng)再設(shè)1個中劑量組. （二）動物數(shù)：每組動物的數(shù)量應(yīng)根據(jù)給藥周期的長短決定.大鼠一般為雌、雄各1030只;ele狗或者猴,一般雌、雄各34只。 （三）給藥途徑：原則上應(yīng)與臨床用藥途徑相同.若用其他途徑應(yīng)說明原因?？诜o藥一般采用灌胃給予受試藥物。如采用將受試藥物混入飼料中服用，應(yīng)提供受試藥物與飼料混合的均勻性、受試物的穩(wěn)定性、有關(guān)受試物質(zhì)量檢查及說明動物食入規(guī)定受試藥物的量等方面的資料,以確保獲得準(zhǔn)確可靠的試驗(yàn)結(jié)果。臨床用藥途徑為

20、靜脈注射時，由于給藥周期長,大鼠靜注有困難時,可用其它適宜的途徑代替。原則上應(yīng)每天給藥。試驗(yàn)周期長的試驗(yàn)，也可采取每周給藥6天。每天給藥時間應(yīng)相同.應(yīng)根據(jù)體重增長情況適時調(diào)整給藥量.(四）觀測項(xiàng)目：原則上應(yīng)根據(jù)受試物的特點(diǎn)選擇其相應(yīng)的觀測指標(biāo)。一般共性的觀測指標(biāo)最少應(yīng)包括以下內(nèi)容： 1.一般觀察：外觀體征、行為活動、腺體分泌、呼吸、糞便性狀、食量、體重、給藥局部反應(yīng)、狗的心電圖變化等。大鼠群養(yǎng)時,應(yīng)將出現(xiàn)中毒反應(yīng)的動物取出單籠飼養(yǎng).發(fā)現(xiàn)死亡或?yàn)l死動物,應(yīng)及時尸檢.試驗(yàn)期間如動物發(fā)生非藥物性的疾病反應(yīng)時,應(yīng)及時進(jìn)行隔離處理。血液學(xué)指標(biāo)：紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白、白細(xì)胞總數(shù)及其分類、血小板。 3血液生化指標(biāo)：天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（LT）、堿性磷酸酶(ALP）、尿素氮（BUN)、總蛋白(TP）、白蛋白(l）、血糖(GLU)、總膽紅素（TBIL）、肌酐（Crea