鬼針草總黃酮對HepG2細胞胰島素抵抗的影響

1、PAGE 17 -鬼針草總黃酮對HepG2細胞胰島素抵抗的影響龐曉軍盧琳琳黎東旺趙一宇劉國勇中圖分類號R965文獻標志碼A文章編號1001-0408（2022）08-0968-07DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2022.08.11摘要目的探究鬼針草總黃酮（TFB）對人肝癌HepG2細胞胰島素抵抗（IR）的影響。方法取鬼針草，用80%乙醇回流提取，制得TFB。利用棕櫚酸體外誘導HepG2細胞復制IR模型，考察低、中、高質(zhì)量濃度（20、40、80mg/L）TFB對細胞葡萄糖消耗量的影響;以二甲雙胍為陽性對照，考察低、中、高質(zhì)量濃度（20、40、80mg/L）TFB對細胞中

2、胰島素受體底物1（IRS-1）、c-Jun氨基端激酶（JNK）和蛋白激酶C（PKC）表達的影響。采用分子對接技術探討槲皮素、槲皮苷等8個TFB主要活性成分與IRS-1、JNK、PKC蛋白的相互作用。結(jié)果TFB低、中、高質(zhì)量濃度組細胞的葡萄糖消耗量均較模型組顯著升高（P0.05或P0.01）。與正常組比較，模型組細胞中的IRS-1、JNK蛋白的表達量均顯著降低，PKC蛋白的表達量顯著升高（P0.01）;與模型組比較，TFB低、中、高質(zhì)量濃度組和二甲雙胍陽性對照組能上調(diào)IRS-1、JNK蛋白的表達并下調(diào)PKC蛋白的表達（P0.05或P0.01）。TFB中的海生菊苷與IRS-1蛋白的分子對接能量打分

3、值為-7.9kcal/mol（1kcal=4.816kJ），海生菊苷、蘆丁與JNK蛋白的分子對接能量打分值均為-9.3kcal/mol，槲皮苷與PKC蛋白的分子對接能量打分值為-4.9kcal/mol，成分與蛋白間的相互作用包括形成氫鍵、疏水鍵等。結(jié)論TFB對HepG2細胞IR有顯著的改善作用，其機制可能與調(diào)節(jié)IRS、JNK、PKC蛋白的表達有關;海生菊苷、蘆丁和槲皮苷可能是改善IR的潛在活性成分。關鍵詞鬼針草總黃酮;人肝癌HepG2細胞;胰島素抵抗;胰島素受體底物1、c-Jun氨基端激酶;蛋白激酶C;分子對接EffectsoftotalflavonoidsofBidenspilosaonin

4、sulinresistanceinHepG2cellsPANGXiaojun1，2，LULinlin2，LIDongwang1，2，ZHAOYiyu3，LIUGuoyong4（1.Dept.ofPharmacy，theSecondPeoplesHospitalofQinzhou，GuangxiQinzhou535000，China;2.CollegeofPharmacy，GuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China;3.Dept.ofRehabilitation，theSecondPeoplesHospitalofQinzhou，GuangxiQin

5、zhou535000，China;4.Dept.ofRadiology，theSecondPeoplesHospitalofQinzhou，GuangxiQinzhou535000，China）ABSTRACTOBJECTIVEToexploretheeffectsoftotalflavonoidsofBidenspolisaL.（TFB）oninsulinresistance（IR）ofHepG2cells.METHODSB.polisaL.wasrefluxedandextractedwith80%ethanoltoobtainTFB.Palmiticacidwasusedtoinduce

6、IRmodeofHepG2cellsinvitro.Theeffectsoflow-concentration，medium-concentrationandhigh-concentration（20，40，80mg/L）ofTFBontheconsumptionofglucosewereinvestigated.Usingmetforminaspositivecontrol，theeffectsoflow-concentration，medium-concentrationandhigh-concentration（20，40，80mg/L）ofTFBontheproteinexpressi

7、onofinsulinreceptorsubstrate-1（IRS-1），c-JunN-terminalkinase（JNK）andproteinkinaseC（PKC）wereinvestigated.MoleculardockingtechnologywasusedtoexploretheinteractionbetweeneightmainactivecomponentsofTFBsuchasquercetin，quercitrinandIRS-1，JNKandPKCproteins.RESULTSTheglucoseconsumptionofTFBlow-concentration，

8、medium-concentrationandhigh-concentrationgroupswereincreasedsignificantly（P0.05orP0.01）.Comparedwithnormalgroup，theexpressionofIRS-1andJNKproteininthemodelgroupdecreasedsignificantly，andtheexpressionofPKCproteinincreasedsignificantly（P0.01）.Comparedwithmodelgroup，theproteinexpressionofIRS-1andJNKcou

9、ldup-regulatedwhiletheproteinexpressionofPKCdown-regulatedinTFBlow-concentration，medium-concentrationandhigh-concentrationgroupsandmetforminpositivecontrolgroup（P0.05orP0.01）.ThescoreofmoleculardockingenergybetweenmaritimetininTFBandIRS-1proteinwas-7.9kcal/mol（1kcal=4.816kJ）.Thescoresofmoleculardock

10、ingenergyofmaritimetin，rutinandJNKproteinwere-9.3kcal/mol.ThescoreofmoleculardockingenergybetweenquercitrinandPKCproteinwas-4.9kcal/mol.Interactionsbetweencomponentsandproteinsincludedforminghydrogenbonds，hydrophobicbondsandsoon.CONCLUSIONSTFBcansignificantlyimproveIRofHepG2cells，themechanismofwhich

11、mayberelatedtotheregulationofproteinexpressionofIRS，JNKandPKC.Maritimetin，rutinandquercitrinmaybepotentialactiveingredientsforimprovingIR.KEYWORDStotalflavonesofBidenspolisaL.;humanhepatomaHepG2cells;insulinresistance;insulinreceptorsubstrate-1;c-JunN-terminalkinase;proteinkinaseC;moleculardocking胰島

12、素抵抗（insulinresistance，IR）是指機體對胰島素生物反應性降低的一種現(xiàn)象，表現(xiàn)為胰島素促進葡萄糖攝取和利用的效率下降，機體代償性分泌過多胰島素而產(chǎn)生高胰島素血癥1。IR是代謝綜合征、2型糖尿病、高血壓、心腦血管疾病等多種疾病的發(fā)病基礎，嚴重威脅人類的健康2。IR的患病率正在增加，尤其是在發(fā)展中國家的年輕人口中，患病率達20%40%3。中醫(yī)藥在改善IR方面具有效果顯著、成本低、不良反應少等優(yōu)勢，探究中藥對IR的作用是當前研究的熱點之一4。據(jù)最新報道顯示，近5年來發(fā)現(xiàn)的具有IR改善作用的中藥活性成分有35種，其中黃酮類成分有11種，約占三分之一。鬼針草總黃酮（totalflavo

13、noidsofBidenspolisaL.，以下簡稱“TFB”）是其中的主要代表成分4。TFB具有抗炎、抗氧化、抗肝纖維化等多種藥理作用5。有研究指出，c-Jun氨基端激酶（c-JunN-terminalkinase，JNK）信號通路在IR的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用6。黃酮類化合物在改善IR方面具有明顯的作用，且這種作用可能與調(diào)控JNK信號通路有關7。雖然已有報道指出，TFB可以通過調(diào)控磷脂酰肌醇3激酶/絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶1/葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4（phosphoinositide3-kinase/serine-threonineproteinkinase1/glucosetransporterp

14、rotein4，PI3K/AKT1/GLUT4）信號通路中轉(zhuǎn)錄因子編碼基因及蛋白的表達來改善HepG2細胞的IR狀態(tài)8，但有關TFB對IR及JNK相關信號通路的作用尚待進一步的探究。為此，本研究擬復制HepG2細胞IR模型并結(jié)合分子對接實驗，探討TFB改善IR的可能作用機制，為研發(fā)改善IR作用的潛在活性藥物提供依據(jù)。1材料1.1主要儀器本研究所用主要儀器有SpectraMaxPlus384型酶標儀（香港分子儀器公司），ZF-2型三用紫外分析儀（上海市安亭電子儀器廠），Odyssey型紅外熒光掃描成像系統(tǒng)（美國LI-COR公司），PowerPacBasic電泳系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司），31

15、11型二氧化碳（CO2）細胞培養(yǎng)箱（美國ThermoFisherScientific公司），SHA-CA型恒溫水浴鍋（常州易晨儀器制造有限公司），1334型無菌操作臺（長沙米淇儀器設備有限公司）等。1.2主要藥品與試劑鬼針草藥材（批號20220604）購自欽州醫(yī)藥有限責任公司，經(jīng)欽州市第二人民醫(yī)院趙一宇副主任中醫(yī)師鑒定為菊科鬼針草屬植物鬼針草B.polisaL.的地上部分。蘆丁對照品（批號100080-202211，純度98%）購自中國食品藥品檢定研究院;HPD-100大孔吸附樹脂（粒度1660目，批號20220424）購自天津市海光化工有限公司;棕櫚酸（palmicacid，PA）對照品（批

16、號P104234，純度99%）購自阿拉丁試劑（上海）有限公司;DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清（批號分別為20221112、20221121）均購自美國Gibco公司;鹽酸二甲雙胍腸溶片（批號20221114，規(guī)格0.5g）購自貴州圣濟堂制藥有限公司;磷酸鹽緩沖液（phosphatebufferedsaline，PBS）、0.25%胰蛋白酶-乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraaceticacid，EDTA）消化液、青鏈霉素混合液、四甲基偶氮唑鹽（methylthiazolyltetrazolium，MTT）、二甲基亞砜（dimethylsulfoxide，DMSO）、10TBS

17、T緩沖液（批號分別為20221129、20221212、20221030、20221025、20221220、20221201）均購自北京索萊寶科技有限公司;BCA蛋白濃度測定試劑盒、SDS凝膠配制試劑盒、Western一抗稀釋液、Western二抗稀釋液（批號分別為20221127、20221124、P0256、P0258）均購自上海碧云天生物技術有限公司;葡萄糖測定試劑盒（批號20220225）購自上海榮盛生物藥業(yè)股份有限公司;兔源JNK單克隆抗體、兔源胰島素受體底物1（insulinreceptorsubstrate-1，IRS-1）單克隆抗體（批號分別為9252、2382）均購自美國C

18、ellSignalingTchnology公司;兔源蛋白激酶C（proteinkinaseC，PKC）多克隆抗體（批號ab182126）購自英國Abcam公司;小鼠源-肌動蛋白（-actin）單克隆抗體（批號10021293）購自武漢三鷹生物技術有限公司;辣根過氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）標記的山羊抗兔免疫球蛋白G（immunoglo-bulinG，IgG）二抗（批號BST16K26C16L54）購自武漢博士德生物工程有限公司;其余試劑均為分析純，水為去離子水。1.3細胞株人肝癌HepG2細胞購自中國科學院上海細胞生物研究所。2方法2.1TFB的制備及純度測定

19、參考杜利月等9、瞿慧等10的研究方法并進行改良：取鬼針草藥材適量，用10倍量的80%乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并提取液;將提取液過濾、合并、濃縮至無醇味，加適量熱水，超聲促溶，冷卻后抽濾，得濾液。濾液經(jīng)預處理好的HPD-100大孔吸附樹脂吸附24h后，先以2倍柱體積的水洗去雜質(zhì)，再用3倍柱體積的70%乙醇進行洗脫并收集洗脫液，濃縮至無乙醇味，冷凍干燥后即得TFB樣品（每1kg鬼針草藥材得TFB樣品54g），采用紫外分析儀于510nm波長處測得其純度為52.72%（以蘆丁計）。2.2TFB和PA對HepG2細胞增殖影響的檢測將對數(shù)生長期的HepG2細胞，按5104個/mL接種于96孔培養(yǎng)

20、板中，每孔100L，設置實驗組、對照組、空白組。實驗組加入不同質(zhì)量濃度的TFB5、10、20、40、80、160mg/L，以含10%胎牛血清和1%青鏈霉素混合液的完全培養(yǎng)基（后同）配制，濃度參考預實驗結(jié)果設置，對照組加入含0.5%DMSO的完全培養(yǎng)基，空白組加入不含細胞、不含藥物的完全培養(yǎng)基，每孔加入量均為100L，每組設置6個復孔。于37、5%CO2條件（后同）下培養(yǎng)24h后，每孔加入5mg/L的MTT溶液10L，繼續(xù)培養(yǎng)24h后，吸棄上層液，每孔加入DMSO150L，振蕩脫色10min，用酶標儀在570nm波長處測定各孔的光密度（opticaldensity，OD）并計算各組細胞存活率：細

21、胞存活率（%）=（OD實驗組-OD空白組）/（OD對照組-OD空白組）100%。上述步驟均需避光操作。取對數(shù)生長期的HepG2細胞，檢測PA對HepG2細胞增殖的影響，PA濃度分別為50、75、100、125、150、175、200mol/L（以完全培養(yǎng)基為溶劑，濃度參考預實驗結(jié)果設置），每組設置3個復孔，作用時間設為24h和48h，其余設置與操作同前。2.3HepG2細胞IR模型的建立取對數(shù)生長期的HepG2細胞，按1105個/mL接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100L，分為對照組和模型組，每組設置3個復孔。待細胞貼壁后，對照組加入完全培養(yǎng)基，模型組加入新配制的含PA50、75、100、125、

22、150、175、200mol/L的完全培養(yǎng)基（濃度參考預實驗結(jié)果設置），培養(yǎng)24h或48h后，吸棄原有培養(yǎng)基，PBS清洗2次后，換上無酚紅的DMEM高糖培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h后，以酶標儀檢測培養(yǎng)基上清液中的葡萄糖含量并計算葡萄糖消耗量，選擇最優(yōu)的PA濃度和作用時間，以復制PA誘導的HepG2細胞IR模型。嚴格按照試劑盒說明書操作。2.4TFB對HepG2細胞IR模型葡萄糖消耗量影響的檢測實驗設正常組，模型組，TFB低、中、高質(zhì)量濃度組（20、40、80mg/L，濃度參考“2.2”項下結(jié)果設置），每組設置3個復孔。培養(yǎng)24h，除正常組外，其余各組參照“2.3”項下最優(yōu)實驗方法，使用PA誘導HepG2

23、細胞復制IR模型。繼續(xù)培養(yǎng)24h后，以酶標儀檢測葡萄糖含量并計算葡萄糖消耗量。嚴格按照試劑盒說明書操作。2.5TFB對HepG2細胞IR模型中IRS-1、PKC、JNK蛋白表達影響的檢測采用Westernblot法檢測。實驗設正常組，模型組，TFB低、中、高質(zhì)量濃度組（20、40、80mg/L，濃度參考“2.2”項下結(jié)果設置）以及二甲雙胍陽性對照組（1mmol/L，濃度參考文獻8設置），每組設置3個復孔。培養(yǎng)24h后，除正常組外，其余各組參照“2.3”項下最優(yōu)實驗方法，使用PA誘導HepG2細胞復制IR模型。繼續(xù)培養(yǎng)24h，吸棄各組培養(yǎng)液，細胞用PBS清洗1次，加入RIPA裂解液150250L

24、，于冰上裂解2030min，于4下以12000r/min離心20min，吸取上清液，用BCA蛋白濃度測定試劑盒進行蛋白含量測定。將各組樣本的蛋白與上樣緩沖液按體積比13混合后，放入沸水中煮5min使變性。取變性蛋白100g，上樣到10%SDS凝膠上進行電泳，電泳后轉(zhuǎn)移至PVDF膜，用TBST緩沖液封閉，在4下與IRS-1、PKC、JNK、-actin一抗（稀釋比例均為11000）孵育過夜，用TBST緩沖液洗滌3次，滴加HRP標記的IgG二抗（稀釋比例為11000）避光孵育1h，再次用TBST緩沖液洗滌后，使用紅外熒光掃描成像系統(tǒng)顯影，通過ImageJv1.8.0軟件分析，以目標蛋白與內(nèi)參蛋白（

25、-actin）灰度值的比值來表示其表達量。2.6分子對接實驗根據(jù)朱冬春等11的研究以及TCMSP數(shù)據(jù)庫（https：/），檢索到槲皮素（quercetin）、槲皮苷（quercitrin）、異槲皮苷（isoquercitrin）、金絲桃苷（hyperoside）、蘆?。╮utin）、木犀草素（luteolin）、奧卡寧（okanin）、海生菊苷（maritimetin）共8個TFB的主要活性成分，利用PubChem數(shù)據(jù)庫（https：/）下載上述成分的三維結(jié)構(gòu)，基于OpenBabel2.4.1軟件，在MMFF94力場下對成分結(jié)構(gòu)進行優(yōu)化。從RCSBProteinDataBank數(shù)據(jù)庫（http

26、：/./）下載IRS-1（PDBID：1K3A）、JNK（PDBID：3V6R）、PKC（PDBID：2UZP）蛋白晶體的三維結(jié)構(gòu)，使用AutoDockTools1.5.6軟件進行可旋轉(zhuǎn)鍵的搜尋與定義，并對蛋白結(jié)構(gòu)進行除去水分子、添加氫原子、添加電荷等處理，以PDBQT格式保存。利用AutoDockVina1.1.2分子對接軟件，根據(jù)蛋白配體的位置，確定蛋白活性位點的坐標，其余參數(shù)均采用默認值，選取對接結(jié)合能量最低的構(gòu)象用于分子對接結(jié)合模式分析，獲取每個成分的分子對接能量打分值（其絕對值越高，表明對接結(jié)構(gòu)越緊密且穩(wěn)定）12，并使用DiscoveryStudio2022分子模擬軟件的“可視化功能

27、”對分子對接結(jié)構(gòu)進行可視化展示。2.7統(tǒng)計學分析采用SPSS22.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以xs表示，多組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。檢驗水準=0.05。3結(jié)果3.1TFB對HepG2細胞增殖的影響與對照組比較，580mg/L的TFB對HepG2細胞的存活率沒有顯著影響（P0.05），但160mg/L的TFB可顯著降低細胞的存活率（P0.05），如圖1所示。因此，以20、40、80mg/L作為TFB的低、中、高質(zhì)量濃度進行后續(xù)研究。3.2PA對HepG2細胞增殖的影響與對照組比較，經(jīng)50、75、100mol/L的PA作用24h后，細胞的存活率均無明顯變化（P

28、0.05）;經(jīng)125、150、175、200mol/L的PA作用24h后，細胞的存活率均顯著降低（P0.01）。經(jīng)50200mol/L的PA作用48h后，細胞的存活率均顯著降低（P0.01）。結(jié)果見圖2。3.3PA對HepG2細胞葡萄糖消耗量的影響與對照組比較，經(jīng)75200mol/L的PA作用24h后，細胞的葡萄糖消耗量均顯著降低（P0.05或P0.01）;經(jīng)50200mol/L的PA作用48h后，細胞的葡萄糖消耗量均顯著降低（P0.01），結(jié)果見表1。結(jié)合“3.2”項下結(jié)果，以75mol/L的PA作用24h誘導HepG2細胞建立IR模型。3.4TFB對HepG2細胞IR模型葡萄糖消耗量的影響

29、與正常組比較，經(jīng)PA刺激后，模型組細胞的葡萄糖消耗量顯著下降（P0.05），提示造模成功;與模型組比較，經(jīng)不同質(zhì)量濃度的TFB處理后，各組細胞的葡萄糖消耗量均顯著增加（P0.05或P0.01），說明TFB改善了IR。結(jié)果見圖3。3.5TFB對HepG2細胞IR模型中IRS-1、JNK、PKC蛋白表達的影響與正常組比較，模型組細胞中IRS-1、JNK蛋白的表達量均顯著降低，PKC蛋白的表達量顯著升高（P0.01）;與模型組比較，TFB低、中、高質(zhì)量濃度組和二甲雙胍陽性對照組細胞中IRS-1、JNK蛋白的表達量均顯著升高，PKC蛋白的表達量均顯著降低（P0.05或P0.01），結(jié)果見圖4圖5。3.

30、68個TFB主要活性成分與IRS-1、JNK、PKC蛋白的分子對接結(jié)果槲皮素、槲皮苷等8個TFB主要活性成分均作用于IRS-1、JNK、PKC蛋白的活性口袋位置，且對接良好，其分子對接能量打分值如表2所示。其中，與IRS-1蛋白分子對接能量打分值絕對值最高的成分為海生菊苷（分子對接能量打分值為-7.9kcal/mol，1kcal=4.186kJ），該成分能夠與IRS-1蛋白的SER979、ASN1110、MET1052、GLU1050氨基酸殘基形成氫鍵，與MET1112、ALA1001、VAL983形成疏水鍵，與TYR8、ARG1109、ASP1056等具有范德華力，其苯環(huán)與MET1112間存

31、在硫-鍵作用（圖6A）。與JNK蛋白分子對接能量打分值絕對值最高的成分為海生菊苷和蘆丁（分子對接能量打分值均為-9.3kcal/mol），海生菊苷能夠與JNK蛋白的ASP207、LYS93氨基酸殘基形成氫鍵，與ILE70、VAL196、LEU206、VAL78形成疏水鍵，與ASN152、ALA151、ASP150等具有范德華力，其苯環(huán)與MET146間存在硫-鍵作用（圖6B）;蘆丁能夠與JNK蛋白的ASN194、MET149、ASN152氨基酸殘基形成氫鍵，與ILE70、CYS154形成疏水鍵，與LYS93、LEU206、VAL78等具有范德華力（圖6C）。與PKC蛋白分子對接能量打分值絕對值最

32、高的成分為槲皮苷（分子對接能量打分值為-4.9kcal/mol），該成分能夠與PKC蛋白的ALA291、ASP292、THR155氨基酸殘基形成氫鍵，與HIS154形成疏水鍵，與DSN-1、ALA293、GLU156等具有范德華力（圖6D）。4討論IR是很多疾病的發(fā)病基礎，并與肥胖癥、高血壓、心血管及動脈粥樣硬化等代謝性疾病的發(fā)生和發(fā)展有關3。肝臟作為胰島素作用的主要靶器官，是IR發(fā)生的主要部位13。在相關研究中，因表面具有高親和力的胰島素受體，HepG2細胞常被用以誘導建立IR模型14。在模型誘導方面，高糖、高胰島素、高脂（軟脂酸）單獨使用或聯(lián)合使用是常用的誘導方法14-15。本研究采用PA

33、誘導HepG2細胞復制IR模型，在實驗過程中發(fā)現(xiàn)，50、75、100mol/L的PA對細胞增殖雖有一定的抑制作用，但這種作用在24h內(nèi)并不明顯;同時，PA可顯著降低細胞的葡萄糖消耗量，表明使用PA誘導HepG2細胞可成功復制IR模型。JNK是絲裂原激活蛋白激酶家族成員，其編碼基因有3種形式，即JNK1、JNK2和JNK316。JNK蛋白是重要的信號分子，在IRS和PI3K信號通路中具有重要的作用，且上述通路及其相關蛋白在葡萄糖轉(zhuǎn)運中有關鍵作用17。研究表明，很多激酶可使IRS的絲氨酸磷酸化，其中就包括JNK和PKC18。JNK的作用機制是通過提高IRS-1和IRS-2的水平來抑制JNK活性，從

34、而改善胰島素信號轉(zhuǎn)導和胰島素敏感性，進而發(fā)揮IR抑制作用19。本研究結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組細胞中IRS-1、JNK蛋白的表達量均顯著降低;與模型組比較，TFB低、中、高質(zhì)量濃度組以及二甲雙胍陽性對照組細胞中IRS-1、JNK蛋白的表達量均顯著升高。與正常組比較，模型組細胞中PKC蛋白的表達量顯著升高;與模型組比較，TFB低、中、高質(zhì)量濃度組以及二甲雙胍陽性對照組細胞中PKC蛋白的表達量均顯著降低。本研究發(fā)現(xiàn)，PA誘導HepG2細胞IR模型經(jīng)不同濃度的TFB干預后，隨TFB濃度的升高，其對細胞中IRS-1、JNK、PKC蛋白表達的調(diào)控作用并無明顯的量效關系，筆者推測這可能與TFB對模型細

35、胞作用的敏感性以及細胞的反饋調(diào)節(jié)有關。分子對接是研究小分子配體與靶蛋白大分子之間相互結(jié)合作用及性能的手段之一，在藥物研發(fā)中具有重要的價值20。為了進一步探究TFB的主要活性成分與IRS-1、JNK、PKC蛋白之間的相互作用，本研究利用了分子對接技術進行分析。結(jié)果顯示，海生菊苷、蘆丁和槲皮苷與上述蛋白的對接結(jié)合性能較好。組織氧化應激損傷和炎癥反應是機體IR發(fā)生的重要機制之一，可通過調(diào)控氧化應激和炎癥反應來改善IR21。有研究指出，海生菊苷作為黃酮類化合物，具有抗氧化活性和抗炎作用22-23。因此，海生菊苷在改善IR方面具有潛在價值。有研究表明，蘆丁同樣可增強肝臟組織中過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物

36、酶和超氧化物歧化酶的活性，降低丙二醛的含量，降低糖尿病模型小鼠血清中白細胞介素6、白細胞介素1和腫瘤壞死因子的水平，減輕其抗氧化應激損傷和炎癥反應，進而發(fā)揮降血糖和改善IR的作用24。槲皮苷具有一定的降血糖作用，據(jù)湯小平等25的報道，槲皮苷可促進糖尿病模型大鼠的胰島素分泌，并改善其IR。綜上所述，TFB對HepG2細胞IR有顯著的改善作用，其機制可能與調(diào)節(jié)IRS、JNK、PKC蛋白的表達有關;海生菊苷、蘆丁和槲皮苷可能是改善IR的潛在活性成分。參考文獻1MATULEWICZN，KARCZEWSKA-KUPCZEWSKAM.Insulinresistanceandchronicinflammat

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