乙型肝炎病毒標志物的檢測培訓課件

1、乙型肝炎病毒標志物的檢測乙型肝炎病毒標志物的檢測 使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進行定性或定量分析。（一）基本原理2乙型肝炎病毒標志物的檢測 使抗原或

2、抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。（一）基本原理用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進行定性或定量分析。3乙型肝炎病毒標志物的檢測（一）基本原理用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物（二）實驗試劑ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：固相的抗原或抗體，酶標記的抗原或抗體，酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設(shè)計出各種不同類型

3、的檢測方法。 4乙型肝炎病毒標志物的檢測（二）實驗試劑ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在1、雙抗體夾心法雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。（2）加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。（三）實驗方法5乙型肝炎病毒標志物的檢測1、雙抗體夾心法雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟（3）加酶標抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)

4、的量正相關(guān)。（4）加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進行該抗原的定性或定量。6乙型肝炎病毒標志物的檢測（3）加酶標抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。徹1、把抗體固定在固相支持物上（96孔板）；2、加入蛋白質(zhì)樣品保溫，再洗去未結(jié)合的雜蛋白；3、加入第二抗體，第二抗體結(jié)合一個供檢測用的酶（辣根過氧化物酶）4、洗去未結(jié)合第二抗原，酶活測定。雙抗體夾心法測抗原7乙型肝炎病毒標志物的檢測1、把抗體固定在固相支持物上（96孔板）；雙抗體夾心法測2、間接法測抗體間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作

5、步驟如下：（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過程中被洗去。8乙型肝炎病毒標志物的檢測2、間接法測抗體間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶（3）加酶標抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。（4）加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。本法只要更換不同的固

6、相抗原，可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。 9乙型肝炎病毒標志物的檢測（3）加酶標抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間乙型肝炎病毒標志物的檢測培訓課件步驟一將抗原HBsAg吸附于載體表面（廠家已經(jīng)完成）11乙型肝炎病毒標志物的檢測步驟一將抗原HBsAg吸附于載體表面（廠家已經(jīng)完成）11乙步驟二原理：將待測血清加入，溫育，血清中如有HBsAb，則抗原抗體結(jié)合操作：陽性血清，陰性血清，待檢血清各加1孔，每孔50ul(1滴)12乙型肝炎病毒標志物的檢測步驟二原理：將待測血清加入，溫育，血清中如有HBsAb，則抗步驟三原理：加入酶復(fù)合物， (HBsAg-HRP),酶復(fù)合物與表面

7、抗體結(jié)合操作：加酶復(fù)合物1滴,混勻, 置37溫育30分鐘倒出液體,洗滌5次，拍干。 13乙型肝炎病毒標志物的檢測步驟三原理：加入酶復(fù)合物， (HBsAg-HRP),酶復(fù)合物步驟四加入酶的底物，酶與底物反應(yīng)，顯色操作：每孔加顯色液A液,B液，各1滴，37溫育15分鐘，使充分顯色。 14乙型肝炎病毒標志物的檢測步驟四加入酶的底物，酶與底物反應(yīng)，顯色14乙型肝炎病毒標志物終止反應(yīng)：每孔加終止液50l（一滴）肉眼觀察或上機比色步驟五15乙型肝炎病毒標志物的檢測終止反應(yīng)：每孔加終止液50l（一滴）步驟五15乙型肝炎病毒1、乙肝病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)（四）應(yīng)用乙肝病毒標志物的檢測16乙型肝炎病毒標志物的檢測1、乙

8、肝病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)（四）應(yīng)用乙肝病毒標志物的檢測1大球形顆粒（ Dane顆粒，有感染性的完整顆粒）HBsAg （外衣殼蛋白）HBcAg （內(nèi)衣殼蛋白）HBV DNADNAP17乙型肝炎病毒標志物的檢測大球形顆粒HBsAg HBcAg HBV DNADNAP17小球形顆粒過剩的衣殼（ HBsAg）管形顆粒18乙型肝炎病毒標志物的檢測小球形顆粒過剩的衣殼管形顆粒18乙型肝炎病毒標志物的檢測2、HBV的抗原組成表面抗原HBsAg：外衣殼核心抗原HBcAg：內(nèi)衣殼，僅感染的肝細胞核內(nèi) e抗原HBeAg：自肝細胞分泌而存在于血清中19乙型肝炎病毒標志物的檢測2、HBV的抗原組成19乙型肝炎病毒標志物的檢測

9、（1）表面抗原（HBsAg）與表面抗體（抗-HBs）存在于三型顆粒中是HBV感染的主要標志，見于急性、慢性、攜帶者抗-HBs，保護性抗體（中和抗體），標志著機體對HBV有免疫力，見于恢復(fù)期、既往感染者或接種疫苗后3、HBV的抗原抗體系統(tǒng)20乙型肝炎病毒標志物的檢測（1）表面抗原（HBsAg）與表面抗體（抗-HBs）存在于三（2）核心抗原（HBcAg）與核心抗體（抗HBc）內(nèi)衣殼，僅存在于感染的肝細胞核內(nèi)，不易在血液中檢出抗原性強，刺激機體先產(chǎn)生IgM，后產(chǎn)生IgG，后者可在血清中存在多年抗HBc無中和作用，高效價抗HBc IgM提示病毒在體內(nèi)復(fù)制增殖。21乙型肝炎病毒標志物的檢測（2）核心抗原

10、（HBcAg）與核心抗體（抗HBc）內(nèi)衣殼，僅（3）e抗原（HBeAg）與e抗體（抗-HBe）可溶性蛋白，游離存在于血液中它的消長與DNA聚合酶及Dane顆粒出現(xiàn)的時間一致，為病毒復(fù)制和血清有強傳染性的標志?？?HBe有一定保護作用，是傳染性低、預(yù)后好的征象。22乙型肝炎病毒標志物的檢測（3）e抗原（HBeAg）與e抗體（抗-HBe）可溶性蛋白，HBsAg: 感染的主要標志抗-HBs：對HBV有免疫力HBcAg： 一般血清學方法檢測不到抗HBc： 提示病毒在體內(nèi)復(fù)制增殖。HBeAg： 病毒復(fù)制和血清有傳染性的標志抗-HBe：傳染性低、預(yù)后好的征象。HBV DNA：病毒復(fù)制和有傳染性最直接的證據(jù)乙肝五項的臨床意義 23乙型肝炎病毒標志物的檢測HBsAg: 感染的主要標志乙肝五項的臨床意義 23乙型肝結(jié)果分析HBsAgHBeAg抗-HBs抗-HBe抗-H