熒光光度法測定硫酸奎寧含量

1、XX醫(yī)科大學(xué)實驗報告專業(yè)：XX醫(yī)學(xué) 年級：xxxx級 姓名：XXX 學(xué)號：xxxxxxxxxx實驗三熒光光度法測定硫酸奎尼丁含量I實驗三熒光光度法測定硫酸奎尼丁含量I三一、實驗?zāi)康暮鸵螅簾晒夥止夤舛扔嫷幕窘Y(jié)構(gòu)及操作方法；熒光產(chǎn)生及測量的過程；熒光分析法的定量分析方法（標準曲線法）；影響熒光強度的因素。二、實驗原理：奎尼丁是抗瘧疾奎寧的右旋體，屬于生物堿類抗心律失常藥。主要用于陣發(fā)性心動過速、 心房顫動、早搏；預(yù)防室房性心動過速及對房室結(jié)折返性心動過速；還何以預(yù)防有癥狀的室 上性和室性早搏。奎寧丁的有效血藥濃度是36mg/L，8mg/L以上可發(fā)生嚴重不良反應(yīng)。硫酸奎寧丁的分子式為C20H24

2、O2N2 . H2SO4 . 2H2O,分子量為728.96,分子結(jié)構(gòu)式如 圖所示：一g H 一2其結(jié)構(gòu)分為喹琳環(huán)和喹琳堿兩個部分根據(jù)其喹琳環(huán)結(jié)構(gòu)部分具有產(chǎn)生熒光的特性，采用 熒光光度計測量其熒光強度，可以實現(xiàn)硫酸奎寧丁含量的測定。三、實驗儀器與試劑：F93型熒光光度計硫酸奎寧丁標準儲備液（100ug/ml）硫酸溶液（0.050mol/L）硫酸奎寧丁樣品溶液5.50ml容量瓶6個6.5ml移液管2個7.1cm石英熒光比色皿1個四、實驗步驟：標準系列溶液及樣品溶液配制按照下表配制硫酸奎尼丁標準系列溶液及樣品溶液編號123456 （硫酸奎尼丁樣品溶液）100口 g/ml硫酸奎尼丁標 準溶液1.00

3、ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml2.50ml說明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中 用0.050ml/L硫酸溶液稀釋至刻度并搖勻系列標準溶液濃度U g/ml2.004.006.008.0010.00專業(yè)：XX醫(yī)學(xué) 年級：xxxx級 姓名：XXX 學(xué)號：xxxxxxxxxx測定靈敏度的選擇和熒光光譜的繪制(1)用1cm石英熒光比色皿，以5號溶液作為測定溶液，置于熒光光度計樣品室中，蓋上樣品室艙蓋，調(diào)節(jié)熒光光度計靈敏度，使其熒光強度讀數(shù)在100左右，測定測定的靈敏 度。(2)熒光波長調(diào)節(jié)為380nm，用1cm石英熒光比色皿，以5號溶液作為測定溶液，置 于熒光光度計樣品室中

4、，蓋上樣品室艙蓋，調(diào)節(jié)熒光光度計靈敏度，使其熒光強度讀數(shù)在 5以內(nèi)，然后按照下表依次調(diào)節(jié)熒光波長，測定不同熒光波長下5號溶液的熒光強度；在坐 標紙上以測定的熒光強度為縱坐標，熒光波長為橫坐標制圖，繪制熒光光譜，并從熒光光譜曲線上找出做最大熒光波長。激發(fā)波長365nm熒光波長380nm390nm400nm410nm420nm430nm440nm450nm460nm熒光強度佰2.36.918.537.555.367.973.571.863.5激發(fā)波長365nm熒光波長470nm480nm500nm510nm520nm530nm540nm550nm560nm熒光強度佰55.749.428.819.7

5、13.08.35.03.02.0選擇的最大熒光長為：打440 (nm)熒光強度值(激發(fā)波長365nm)值度強光熒值度強光熒熒光波長(n m )專業(yè)：XX醫(yī)學(xué) 年級：xxxx級 姓名：XXX 學(xué)號：xxxxxxxxxx標準曲線制作將激發(fā)波長，熒光波長分別調(diào)節(jié)為上面實驗選擇的365nm，440nm，熒光光度計靈敏度 調(diào)節(jié)為上面實驗選擇的靈敏度檔次，用1cm石英熒光比色皿，按照下表依次測定標準系列溶 液、樣品溶液、0.050mol/L硫酸溶液熒光強度，平行測定兩次，計算熒光強度的平均值； 在坐標紙上以熒光強度的平均值為縱坐標，系列標準溶液的濃度為橫坐標制圖，繪制標準曲 線。o o O o o O 0

6、0 7 6 o o O o o O 00 7 6 度強光熒g 4 a / 3 n 4 a a njn c c 4 nJD Q n i| n nJ a a a d|c ugugu 口卜 口口 d|c / dd a a ra aja a ra dd a編號123456 （樣品）7硫酸溶液熒光強度F117.132.47.360.673.618.10.3熒光強度標準曲線40.040.030.020.010.00.002.0 4.006.008.0010.0012.00系列標準溶液濃度/ g/ml樣品6五、實驗數(shù)據(jù)處理：2皿 如1 .樣品溶液中的硫酸奎寧丁的含量根據(jù)6號樣品溶液熒光強度測定的平均值，在標

7、準曲線上采用作圖法求出其對應(yīng)的濃度值，采用下式計算樣品溶液中鐵的含量:_ C X 50.00讀取值 2.50Cx=2.15X50.00/2.50=43.00m g/ml六、注意事項：測定系列標準溶液和樣品溶液時，必須使用同一只比色皿。比色皿放入熒光光度計樣品室前，必須用吸水紙將表面擦拭干凈。比色皿在換裝不同濃度溶液時，必須用待測溶液潤洗至少三次。在比色皿未放入熒光光度計測定光路時，必須將樣品室艙蓋打開。專業(yè)：XX醫(yī)學(xué) 年級：xxxx級 姓名：XXX 學(xué)號：xxxxxxxxxx七、討論與思考實驗過程中，有一調(diào)零步驟，其作用是什么？答：調(diào)零是為了消除溶劑中離子發(fā)熒光而干擾實驗結(jié)果。如果不進行調(diào)零操作，對實驗結(jié)果有無影響？為什么？答：無影響。標準曲線不調(diào)零也可以讀出樣品溶液的濃度。什么情況下，