醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋培訓(xùn)課件

1、醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋細(xì)菌菌落的色素觀察金黃色葡萄球菌：產(chǎn)生只局限于菌落的脂溶性金黃色色素。銅綠假單胞菌：產(chǎn)生帶熒光的水溶性色素，該色素可擴(kuò)散至菌落周?chē)?，使培養(yǎng)基呈亮綠色。金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌2醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋細(xì)菌菌落的色素觀察金黃色葡萄球菌：產(chǎn)生只局限于菌落的脂溶性金細(xì)菌菌落的溶血現(xiàn)象觀察乙型溶血性鏈球菌:透明的無(wú)色溶血環(huán)。SLO or SLS？3醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋細(xì)菌菌落的溶血現(xiàn)象觀察乙型溶血性鏈球菌:透明的無(wú)色溶血環(huán)。S一、糖發(fā)酵試驗(yàn)原理：不同細(xì)菌分解糖類(lèi)的能力和分解代謝產(chǎn)物不同應(yīng)用：常用于腸道細(xì)菌的鑒定4醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋一、糖發(fā)酵試

2、驗(yàn)4醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋結(jié)果判定 培養(yǎng)基變紅色 陽(yáng)性，記為 + 培養(yǎng)基變紅色，試管內(nèi)有氣泡 陽(yáng)性，記為 + 指示劑不變色 陰性，記為 - 葡萄糖乳糖傷寒沙門(mén)菌糖發(fā)酵試驗(yàn)大腸埃希菌糖發(fā)酵試驗(yàn)痢疾志賀菌糖發(fā)酵試驗(yàn)副傷寒沙門(mén)菌糖發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)5醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋葡萄糖乳糖傷寒沙門(mén)菌糖發(fā)酵試驗(yàn)大腸埃希菌糖發(fā)酵試驗(yàn)痢疾志賀菌IMViC是吲哚（indole）、甲基紅（methyl red test）、V-P（Voges-Prokauer test）和枸櫞酸鹽利用（citrate test）四個(gè)試驗(yàn)的縮寫(xiě)，用于快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌（衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢查）細(xì)菌代謝產(chǎn)物檢查，數(shù)碼鑒定6醫(yī)學(xué)微生物實(shí)

3、驗(yàn)th鄧秋嬋IMViC是吲哚（indole）、甲基紅細(xì)菌代謝產(chǎn)物檢查，數(shù)二、靛基質(zhì)（吲哚）產(chǎn)生試驗(yàn)(I)原理： 分解蛋白胨內(nèi)的色氨酸形成靛基質(zhì)（無(wú)色） 靛基質(zhì)與靛基質(zhì)試劑中的對(duì)二甲基氨基苯甲 醛結(jié)合而顯紅色(玫瑰吲哚)材料：蛋白胨水培養(yǎng)基（氯化鈉、蛋白胨、 蒸餾水）7醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋二、靛基質(zhì)（吲哚）產(chǎn)生試驗(yàn)(I)7醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋方法： 約0.3ml的靛基質(zhì)試劑徐徐加入細(xì)菌蛋白胨水培養(yǎng)物 注：加入吲哚試劑后切勿搖晃結(jié)果：大腸埃希菌()紅色 產(chǎn)氣桿菌 ()黃色紅色吲哚大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌8醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋方法：紅色吲哚大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌8醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋葡萄糖丙酮酸甲

4、酸、乙酸、乳酸pH 5.4培養(yǎng)基呈橘黃色（-）脫羧大腸埃希菌和產(chǎn)氣桿菌都能發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)氣桿菌能使丙酮酸脫羧大腸桿菌三、甲基紅試驗(yàn)（M）9醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋葡萄糖丙酮酸甲酸、乙酸、乳酸pH 4.5甲基紅指示劑培養(yǎng)材料：葡萄糖蛋白胨水（葡萄糖、蛋白胨、K2HPO4、蒸餾水）方法：結(jié)果：大腸埃希菌，紅色 產(chǎn)氣桿菌，黃色 10醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋材料：葡萄糖蛋白胨水（葡萄糖、蛋白胨、K2HPO4、蒸餾水）葡萄糖丙酮酸甲酸、乙酸、乳酸乙酰甲基甲醇紅色化合物（+）脫羧四、VP試驗(yàn)（Vi）大腸埃希菌和產(chǎn)氣桿菌都能發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)氣桿菌能使丙酮酸脫羧大腸桿菌在堿性溶液中被氧化VP試劑

5、（李氏試劑）不能反應(yīng)（-）反應(yīng)30min二乙酰+精氨酸胍基11醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋葡萄糖丙酮酸甲酸、乙酸、乳酸乙酰甲基甲醇紅色化合物脫羧四、V材料： 葡萄糖蛋白胨水 李氏試劑（硫酸銅、 濃氨水、NaOH、蒸餾水）方法：暴露于空氣中結(jié)果:大腸埃希菌，不出現(xiàn)紅色（） 產(chǎn)氣桿菌， 紅色 （）大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌12醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌12醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋五、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)（C）枸櫞酸鹽銨鹽碳酸鹽氨培養(yǎng)基pH下降溴麝香草酚藍(lán) 呈堿性變色培養(yǎng)基變藍(lán)培養(yǎng)基產(chǎn)氣桿菌能利用銨鹽作為唯一氮源，利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源13醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋五、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)（C）枸櫞酸鹽銨鹽

6、碳酸鹽氨培養(yǎng)基pH下降 材料： 枸櫞酸鹽培養(yǎng)基（枸櫞酸鈉、NH4H2PO4、MgSO4、K2HPO4、NaCl、瓊脂、蒸餾水、0.5%溴麝香草酚蘭酒精溶液） 方法： 結(jié)果： 大腸埃希菌，綠色（） 產(chǎn)氣桿菌，深藍(lán)色（）產(chǎn)氣桿菌大腸桿菌有無(wú)菌落？14醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋 材料：產(chǎn)氣桿菌大腸桿菌有無(wú)菌落？14醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋用于腸桿菌科屬間鑒別大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌 IMViC試驗(yàn)總結(jié)15醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋用于腸桿菌科屬間鑒別大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌 IMViC試驗(yàn)總結(jié)1 分 解六、硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn) 原理： 材料： 醋酸鉛培養(yǎng)基（普通瓊脂培養(yǎng)基、硫代硫酸鈉溶液、醋酸鉛溶液）含硫氨基酸硫化氫遇鉛鹽或亞

7、鐵鹽黑褐色沉淀16醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋 分 解六、硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)含硫氨基酸硫化氫遇鉛鹽或亞方法：結(jié)果： 變形桿菌，黑褐色 大腸埃希菌，不變色 變形桿菌大腸桿菌17醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋方法：變形桿菌大腸桿菌17醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋對(duì)蛋白質(zhì)的發(fā)酵吲哚試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)對(duì)糖的發(fā)酵糖發(fā)酵試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)VP試驗(yàn)其他枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)18醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋對(duì)蛋白質(zhì)的發(fā)酵吲哚試驗(yàn)對(duì)糖的發(fā)酵糖發(fā)酵試驗(yàn)其他枸櫞酸鹽利用試實(shí)驗(yàn)原理 該試劑條是由20個(gè)含干燥底物的小管所組成，用細(xì)菌懸浮液接種。培養(yǎng)一定時(shí)間后，通過(guò)代謝作用產(chǎn)生顏色的變化，或在培養(yǎng)后加入試劑后變色而觀察結(jié)果。腸道桿菌數(shù)碼鑒定（API 20E

8、）19醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋實(shí)驗(yàn)原理腸道桿菌數(shù)碼鑒定（API 20E）19醫(yī)學(xué)微生物實(shí)判讀結(jié)果：每三項(xiàng)為一組，每組分值為1 2 4 分）將陽(yáng)性反應(yīng)的分值相加，得出數(shù)據(jù)編碼，從API20E編碼手冊(cè)中查細(xì)菌名稱。數(shù)碼鑒定（API 20E）20醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋判讀結(jié)果：每三項(xiàng)為一組，每組分值為1 2 4 分）將陽(yáng)性（21）半固體培養(yǎng)基(動(dòng)力試驗(yàn)) 大腸埃希菌 志賀菌 傷寒沙門(mén)菌 21醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋（21）半固體培養(yǎng)基(動(dòng)力試驗(yàn)) 大腸埃希菌 材料：1、 EMB培養(yǎng)基、SS瓊脂平板、雙糖鐵培養(yǎng)基2、大腸埃希菌、傷寒沙門(mén)菌、志賀菌選擇培養(yǎng)基腸道桿菌在選擇鑒別培養(yǎng)基的生長(zhǎng)情況鑒別培養(yǎng)基

9、22醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋材料：選擇培養(yǎng)基腸道桿菌在選擇鑒別培養(yǎng)基的生長(zhǎng)情況鑒別培養(yǎng)基 伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB）EMB平板基質(zhì) 肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基抑制物 伊紅、美藍(lán)底物 乳糖 指示劑 伊紅、美藍(lán) 堿性 無(wú)色半透明菌落 酸性紫黑色或紫紅色，且有金屬光澤菌落持點(diǎn)為紫黑色或紫紅色菌落為無(wú)色半透明菌落抑制作用抑制G菌用途分離沙門(mén)菌和志賀菌屬的弱選擇培養(yǎng)基23醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋 伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB）EMB平板基質(zhì) 肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基原理：（EMB平板)非致病菌：致病菌：美藍(lán) 分 解乳糖伊紅結(jié)合紫黑色或紫紅色化合物不分解乳糖，菌落呈無(wú)色、半透明。其它類(lèi)似培養(yǎng)基？24醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋原理：（EM

10、B平板)致病菌：美藍(lán) 分 解乳糖伊紅結(jié)合紫SS培養(yǎng)基（Salmonella Shigella Agar Medium）SS平板基質(zhì)肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基抑制物膽鹽、煌綠、枸櫞酸鈉、硫代硫酸鈉底物乳糖指示劑中性紅 pH（6.88.0） 堿性黃色 酸性紅色菌落持點(diǎn)為粉紅色菌落為無(wú)色半透明菌落 抑制作用抑制大腸桿菌及G菌用途分離沙門(mén)菌和志賀菌屬的強(qiáng)選擇培養(yǎng)基25醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋SS培養(yǎng)基SS平板基質(zhì)肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基抑制物膽鹽、煌綠、枸櫞酸原理：（ SS平板）非致病菌：致病菌：膽鹽 分 解乳糖乳酸膽酸中心渾濁的粉紅色菌落不分解乳糖，菌落呈透明無(wú)色；枸櫞酸鐵能指示硫化氫的產(chǎn)生，使菌落中心呈黑色注意： 非致

11、病菌并非被殺滅，故挑病原菌菌落時(shí)，盡量挑取菌落中心部分26醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋原理：（ SS平板）致病菌：膽鹽 分 解乳糖乳酸膽酸中大腸埃希菌痢疾志賀菌大腸埃希菌與傷寒沙門(mén)菌27醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋大腸埃希菌痢疾志賀菌大腸埃希菌與傷寒沙門(mén)菌27醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)雙糖鐵培養(yǎng)基（Double sugar Iron Medium）成分 含酚紅指示劑的pH7.6的蛋白胨水 500mL 瓊脂(1.3%) 6.5g 乳糖(1%) 5g 葡萄糖(0.1%) 0.5g 硫酸亞鐵銨(0.02%) 0.1g 硫代硫酸鈉(0.02%) 0.1g用途 初步鑒別腸道桿菌28醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋雙糖鐵培養(yǎng)基28醫(yī)

12、學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋原理：只分解葡萄糖 ： 產(chǎn)少量酸 上層培養(yǎng)基的酸+O2CO2 +H2O 蛋白胨代謝產(chǎn)物 下層培養(yǎng)基不接觸空氣培養(yǎng)基呈酸性顯黃色葡萄糖、乳糖都分解硫酸亞鐵銨：用以檢查細(xì)菌分解蛋白質(zhì)后是否產(chǎn)生硫化氫。只產(chǎn)酸產(chǎn)酸&產(chǎn)氣培養(yǎng)基略變堿指示劑變紅29醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋原理：只產(chǎn)酸培養(yǎng)基略變堿指示劑變紅29醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋培訓(xùn)課件特異性抗體（血清中）診斷菌液肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象檢測(cè)試劑的成分病人體內(nèi)的反應(yīng)傷寒或副傷寒病人O抗原H抗原含有傷寒沙門(mén)菌O抗原傷寒沙門(mén)菌H抗原甲型副傷寒沙門(mén)菌H抗原肖氏沙門(mén)菌H抗原肥達(dá)試驗(yàn)（Widal test）31醫(yī)學(xué)微生物實(shí)

13、驗(yàn)th鄧秋嬋特異性抗體（血清中）診斷菌液肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象檢測(cè)試劑的成分方法：1、每孔加0.5ml N.S2、倍比稀釋病人血清，第7孔不加做對(duì)照3、每孔加0.5ml抗原4、輕輕振蕩混勻后，37孵育過(guò)夜32醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋方法：32醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋結(jié)果觀察+ 清澈透明，菌體形成凝塊于管底 + 較透明，大部分菌體形成凝塊于管底 + 稍渾濁，較多細(xì)小凝集 + 較渾濁，有細(xì)小凝集 渾濁，無(wú)凝集血清凝集效價(jià)： (抗體滴度) 與定量Ag產(chǎn)生明顯凝集（+）的血清最高稀釋倍數(shù)33醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋結(jié)果觀察+ 清澈透明，菌體形成凝塊于管底33醫(yī)學(xué)結(jié)果分析（1） 傷寒沙門(mén)菌“O” 效價(jià)1：8

14、0 “H” 效價(jià)1：160 副傷寒沙門(mén)菌“H”效價(jià)1：80O、H效價(jià)正常值，腸熱癥可能性大正常值，可能性小O高H不高：感染早期or交叉反應(yīng)O不高H高：預(yù)防接種、非特異性回憶反應(yīng)有診斷價(jià)值34醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋結(jié)果分析（1） 傷寒沙門(mén)菌“O” 效價(jià)1：80有診斷價(jià)O抗原 沙門(mén)菌屬間有交叉反應(yīng) IgMH抗原 種特異性 - 傷寒沙門(mén)菌 IgG 甲型副傷寒沙門(mén)菌 肖氏沙門(mén)菌 希氏沙門(mén)菌結(jié)果分析（2）35醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋O抗原 沙門(mén)菌屬間有交叉反應(yīng) IgM結(jié)肉湯增菌結(jié)果血平板接種1、觀察肉湯增菌的結(jié)果2、接種 視細(xì)菌的培養(yǎng)條件而用不同的平板血標(biāo)本肉湯增菌血平板分離培養(yǎng)革蘭染色血漿凝固酶+觸

15、酶試驗(yàn)病例136醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋肉湯增菌結(jié)果血平板接種1、觀察肉湯增菌的結(jié)果血標(biāo)本肉湯增菌病病例二 患者：男性，19歲。惡心、腹痛4h，伴水樣腹瀉3次入院就診。無(wú)嘔吐、寒顫。腹痛呈陣發(fā)性。既往體檢無(wú)過(guò)敏史。 體檢：T38.5，BP134/75 mmHg，P100次/分，R16次/分。心肺正常。上腹壓痛，而無(wú)反跳痛。肝脾未觸及。 實(shí)驗(yàn)室檢查：糞便鏡檢可見(jiàn)中性粒細(xì)胞，偶見(jiàn)紅細(xì)胞。血象正常。尿正常。問(wèn)題：1該患者可能患了什么疾?。啃枧c哪些疾病作鑒別診斷？2如何進(jìn)行微生物學(xué)檢查？ 37醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋病例二37醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋1、病例分析：感染中毒引起腹痛和腹瀉的可能原因有哪些

16、？腫瘤食物過(guò)敏炎癥性腸病潰瘍腹外疾病腸易激綜合征38醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋1、病例分析：感染中毒引起腹痛和腹瀉的腫瘤食物炎癥性腸病潰瘍主訴：陣發(fā)性腹痛、腹瀉腸道感染細(xì)菌病毒寄生蟲(chóng)真菌?腸桿菌科：大腸埃希菌、志賀菌屬、沙門(mén)菌屬弧菌科：霍亂菌、副溶血性弧菌彎曲菌屬：空腸彎曲菌球菌科：金黃色葡萄球菌等輪狀病毒、Norwork病毒和腸腺病毒等溶組織阿米巴、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)、隱孢子蟲(chóng)等念珠菌、曲菌、毛霉菌等39醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋主訴：陣發(fā)性腹痛、腹瀉腸道感染細(xì)菌病毒寄生蟲(chóng)真菌?腸桿菌科：初診：細(xì)菌感染引起的急性胃腸炎何種細(xì)菌？主要的腸道細(xì)菌： 大腸桿菌 志賀菌 沙門(mén)菌 霍亂弧菌 副溶血性弧菌 幽門(mén)

17、螺桿菌 空腸彎曲菌40醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋初診：細(xì)菌感染引起的急性胃腸炎何種細(xì)菌？主要的腸道細(xì)菌：4區(qū)別要點(diǎn)侵襲性（炎癥性）毒素性潛伏期長(zhǎng)，110天不等短，幾小時(shí)3天不等發(fā)熱多而時(shí)間長(zhǎng)少見(jiàn)嘔吐少見(jiàn)多見(jiàn)腹痛明顯，有壓痛多數(shù)輕，個(gè)別有絞痛里急后重可有無(wú)脫水較少見(jiàn)較多見(jiàn)大便性狀膿血便和粘液稀便，便中有大量白細(xì)胞稀水樣便，無(wú)膿血和粘液病理改變腸道粘膜受損腸道粘膜完整毒素性：霍亂弧菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸埃希菌某些菌株、臘樣芽胞桿菌、變形桿菌、氣單胞菌等炎癥性：志賀菌、沙門(mén)菌、空腸彎曲菌、大腸埃希菌某些菌株、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌等其他：副溶血性弧菌41醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)th鄧秋嬋區(qū)別要點(diǎn)侵襲性（炎癥性）毒素性潛伏期長(zhǎng)，110天不等短，幾2、一般檢查