動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體課件用課件

1、關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體課件用第1頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四生物種間雜交想像圖 已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例有很多，如人小鼠、人兔、人雞、鼠兔、雞鼠等上百種融合細(xì)胞。甚至已成功完成了酵母菌雞 、人胡蘿卜 等細(xì)胞的融合。想了解更多信息，可通過(guò)網(wǎng)絡(luò)、電視、雜志等途徑關(guān)注細(xì)胞融合和單克隆抗體的最新信息。有夢(mèng)想，才會(huì)有創(chuàng)造！第2頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四一、動(dòng)物細(xì)胞融合請(qǐng)同學(xué)們閱讀課本P52動(dòng)物融合第3頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四1.概念： 動(dòng)物細(xì)胞融合（cell fusion）也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)

2、物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。 融合和形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。2、原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性一、動(dòng)物細(xì)胞融合第4頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四3、動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程 為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑？滅活喪失感染性保留融合活性第5頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四 二.動(dòng)物細(xì)胞融合第6頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四誘導(dǎo)融合的方法物理法：化學(xué)法：生物法：電激、離心、振動(dòng)聚乙二醇（PEG)滅活的病毒4.意義： 突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。5.應(yīng)用

3、：最重要的用途是制備單克隆抗體第7頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四總結(jié)：比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原 理融合前處理誘 導(dǎo) 方 法用 途細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細(xì)胞分散物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)、生物方法獲得部分或完整植株主要用于制備單克隆抗體第8頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四二、單克隆抗體 什么是單克隆抗體單：克?。嚎贵w：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞？無(wú)性繁殖抗原 抗體特異性結(jié)合第9頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四 抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？2

4、 . 抗體是如何產(chǎn)生的？單克隆抗體第10頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四抗原 動(dòng)物體內(nèi)刺激漿細(xì)胞 抗體抗體不純篩選單一漿細(xì)胞不能增殖產(chǎn)生大量抗體產(chǎn)量少、純度低、特異性差單克隆抗體4、傳統(tǒng)制備抗體的缺點(diǎn)是？3、傳統(tǒng)制備抗體的方法是？第11頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？單克隆抗體問(wèn)題討論提示：1 . 什么樣的細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體？2 . 什么樣的細(xì)胞可以無(wú)限增殖？第12頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四 設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞:只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞:能無(wú)限增殖雜交瘤細(xì)胞單

5、克隆抗體既能無(wú)限增值又能產(chǎn)生特異性抗體特點(diǎn)第13頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四雜交 細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細(xì)胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體第14頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四B BB B瘤 瘤瘤 瘤細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞？篩選雜種細(xì)胞 已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩條DNA合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒(méi)有S途徑，但能不斷分裂增

6、殖，將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加PEG促融，獲得雜種細(xì)胞。單克隆抗體思考：第15頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四單克隆抗體思考：1. 小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？2. 制備過(guò)程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技術(shù)手段？細(xì)胞的同源性越近，融合形成的雜種細(xì)胞越易成活細(xì)胞融合技術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)第16頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四單克隆抗體 在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義 在疾病診斷、治療和預(yù)防方面，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)越性。 生物導(dǎo)彈（作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤） 單克隆抗體的應(yīng)用第17頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)

7、38分，星期四動(dòng)物特異性免疫分離B淋巴細(xì)胞（B）；找到骨髓瘤細(xì)胞（G）。注意B淋巴細(xì)胞是一個(gè)系列。（B1,B2,B3,-Bn）細(xì)胞融合三種融合方式:（BB;BG;GG）第一次篩選：在“選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)”上培養(yǎng)篩選雜交瘤細(xì)胞（只有BG雜交瘤細(xì)胞存活。但BG雜交瘤細(xì)胞也是一個(gè)系列：如B1G,B2G-BnG。而B(niǎo)B,GG在此培養(yǎng)基上不能存活。）第二次篩選：在“多孔培養(yǎng)板上”培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞系列 ，每孔只放一個(gè)雜交瘤細(xì)胞?！翱寺』囵B(yǎng)”每個(gè)雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行“單一抗體檢測(cè)”，“檢測(cè)陽(yáng)性”的孔內(nèi)即是所需要的雜交瘤細(xì)胞。選擇所需要的雜交瘤克隆細(xì)胞群，體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。提取單克隆抗體。單抗的制備過(guò)程要點(diǎn)：第18頁(yè)，共20頁(yè)，2022年，5月20日，12點(diǎn)38分，星期四 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案3、圖中B為_(kāi)過(guò)程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能_,又能_。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_2、A是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_ 4、C過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括_培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段。制備單克隆抗體B細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗