網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件

1、 實驗三網(wǎng)織紅細胞計數(shù)一、實驗原理 網(wǎng)織紅細胞胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的RNA物質(zhì)，經(jīng)煌焦油藍或新亞甲藍活體染色后RNA中負電荷基團與帶正電荷的有色基團結(jié)合，凝聚成顆粒呈淺藍或藍黑色的點狀、絲狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可在顯微鏡下識別。計數(shù)1000個紅細胞中所有的網(wǎng)織紅細胞數(shù)直接報告其百分比，或紅細胞計數(shù)結(jié)果報告其絕對值。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件 實驗三網(wǎng)織紅細胞計數(shù)一、實驗原理網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件 網(wǎng)織紅細胞（Ret） 是晚幼紅細胞脫核后到成熟紅細胞間的過渡細胞，是尚未完全成熟的紅細胞，其胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的RNA物質(zhì)。嗜堿性物質(zhì)與染料凝聚成藍色顆粒，顆粒與顆粒連綴成線，線連接成網(wǎng)，故而得名。分型：絲球型、網(wǎng)型、破網(wǎng)

2、型、點粒型。（、型）網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件 網(wǎng)織紅細胞（Ret） 是晚幼紅細胞脫核后到成熟網(wǎng)織紅細胞網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件網(wǎng)織紅細胞網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件計數(shù)方法1、普通光學(xué)顯微鏡法：活體染色后推片鏡檢2、網(wǎng)織細胞計數(shù)儀法：熒光染色后用流式細胞術(shù)計數(shù)網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件計數(shù)方法1、普通光學(xué)顯微鏡法：活體染色后推片鏡檢網(wǎng)織紅細胞計二、試劑器材1、試劑 10g/L煌焦油藍酒精（水）溶液 2、器材 毛細血管采血用具、小試管、載玻片、推片、顯微鏡、香柏油、二甲苯及擦鏡紙、Miller窺盤或直徑約20 mm（較目鏡內(nèi)徑稍?。┑膱A形硬紙片（正中央開一邊長為3mm的菱形或正方形小孔，置目鏡光闌處，用于縮視野法計數(shù)）網(wǎng)織紅

3、細胞計數(shù)課件二、試劑器材1、試劑 10g/L煌焦油藍酒精（水）溶液三、操作步驟1. 染色：于載玻片的一端加煌焦油藍酒精溶液1滴，任其自然涼干后備用，取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的染料上，用推片角混勻后，將兩玻片蓋合（玻片法）；試管法取染液2滴入試管，加血2滴混勻，封閉好，待15分鐘以上時間，2. 推片：取混合液1小滴于載玻片的一端，推制成薄而均勻的血膜，3. 低倍鏡瀏覽，選取紅細胞分布均勻網(wǎng)織紅細胞染色較好的部分（體尾交界處），滴香柏油轉(zhuǎn)換至油鏡，在Miller窺盤下計數(shù)小方格中的RBC數(shù)和大方格中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)（或數(shù)出整個視野中的RBC總數(shù)和其中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)，換一視野同法計數(shù)至幾個視野R

4、BC總數(shù)1000為止）。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件三、操作步驟1. 染色：于載玻片的一端加煌焦油藍酒精溶液1滴Miller窺盤 A31B將Miller窺盤放在顯微鏡目鏡中,通過窺盤中大小方格間的9比1比例關(guān)系計算RBC數(shù)和Ret數(shù)。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件Miller窺盤A31B將Miller窺盤放在顯微網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件四、計算 1.Miller窺盤法：網(wǎng)織紅細胞（Retic）百分率(%)= （大方格內(nèi)Retic總數(shù)）/（小方格內(nèi)RBC總數(shù)9）100% 2.直接計數(shù)法：網(wǎng)織紅細胞（Retic）百分率(%)= 多個視野內(nèi)Retic總數(shù)/多個視野內(nèi)RBC總數(shù)100%網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件四、計算

5、 1.Miller窺盤法：網(wǎng)織紅細胞（Retic）百五、注意事項1.用酒精染液時，應(yīng)待玻璃片上的酒精揮發(fā)干燥后，才能加血液，染色時應(yīng)用推片角不停攪動，使染料和血液混合，防止凝固。2.染色時間一定要充足，混合后不能立即推片，室溫低時染色時間應(yīng)適當(dāng)延長，應(yīng)覆以另一玻片防止蒸發(fā)。3.染液與血液比例以1：1為宜，貧血適當(dāng)加血量。4.涂片厚薄均勻適宜，弓形移動，多個區(qū)域計數(shù)5.試劑應(yīng)定期重配，以免變質(zhì)沉淀。6.與變性珠蛋白小體鑒別網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件五、注意事項1.用酒精染液時，應(yīng)待玻璃片上的酒精揮發(fā)干燥后，六、參考值成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%）新生兒：0.02-0.06（2%-6%

6、）兒童：0.005-0.075（0.5%-7.5%）成人絕對值（24-84） 109/L 網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件六、參考值成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%）七、臨床意義（1）評價骨髓增生能力，判斷貧血類型 再障時，明顯降低。絕對值低于5109/L可做為急性再障的輔助診斷指標(biāo)。失血、多數(shù)溶血性貧血患者網(wǎng)織紅細胞可明顯高于正常。營養(yǎng)不良性貧血在治療前網(wǎng)織紅細胞可保持正常、輕度升高或降低。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件七、臨床意義（1）評價骨髓增生能力，判斷貧血類型 網(wǎng)織紅（2）評價療效網(wǎng)織紅細胞反應(yīng)：IDA或巨幼細胞貧血分別給予鐵劑、維生素B12或葉酸治療23d后，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)值開始上升，710

7、d達到最高(10%左右)；兩周以后逐漸降至正常水平，紅細胞、血紅蛋白開始升高。骨髓移植、EPO治療后：若骨髓開始恢復(fù)造血功能，RMI升高，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)值上升。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件（2）評價療效網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件（3）放、化療監(jiān)測 機體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才檢測到網(wǎng)織紅細胞的降低。而停止放、化療，骨髓功能恢復(fù)后，又見上述指標(biāo)依次上升?？芍笇?dǎo)臨床醫(yī)師適時調(diào)整治療方案，避免造成嚴重的骨髓抑制。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件（3）放、化療監(jiān)測 網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件RPI=病人網(wǎng)織紅細胞（%）/2 * 病人HCT/正常人HCT（男0.45，女0.40）臨床應(yīng)用：3提示溶血性貧血

8、或急性失血性貧血；網(wǎng)織紅生成指數(shù)（Reticulocyte production index,RPI）網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件RPI=病人網(wǎng)織紅細胞（%）/2 * 病人HCT/正常人HC八、思考題 一溶血性貧血患者，紅細胞計數(shù)2.6x1012/L，血細胞比容0.29，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)相對值為35%，如何報告網(wǎng)織紅細胞檢測結(jié)果？網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件八、思考題 一溶血性貧血患者，紅細胞計數(shù)2.6x1012外周血網(wǎng)織紅細胞計數(shù)（百分數(shù)和絕對值）是一反映骨髓紅系增生活性的常用指標(biāo)。許多學(xué)者先后提出應(yīng)用FCM和不同的RNA特異性熒光染料自動計數(shù)網(wǎng)織紅細胞的方法，如派若寧Y、AO、溴化乙啶、thiazole orange等。 目前最普遍應(yīng)用的是 thiazoieorange 染色法，這種特異性RNA 的激發(fā)波（488nm）測量的特點，與人工計數(shù)法相比，它不但能得到網(wǎng)織紅細胞的百分數(shù)和絕對值，而且還能獲得網(wǎng)織紅細胞成熟指數(shù)（RMI）。RMI是一個檢測骨髓功能的獨立實驗室指標(biāo)，它與網(wǎng)織紅細胞內(nèi)RNA含量成正比，RMI可成功地用于評價骨髓移植的效果。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)課件外周