結(jié)核性腦膜炎實驗室診斷及治療進展-課件

1、結(jié)核性腦膜炎實驗室診斷及治療進展結(jié)核性腦膜炎實驗室診斷及治療進展細菌學方法 CSF涂片抗酸染色鏡檢、細菌培養(yǎng)是最經(jīng)典的實驗室方法。(陽性率10%) 改良抗酸染色法 檢出率提高至88、57%,多次腰椎穿刺行改良抗酸染色法,可提高至94、29%,同時能檢出胞內(nèi)抗酸桿菌。運用改良方法的患者在接受抗結(jié)核治療后27d左右,最長的在患者接受治療6、5個月后仍能檢出,明顯延長了抗酸桿菌的檢出時間。細菌學方法結(jié)核性腦膜炎實驗室診斷及治療進展-課件結(jié)核性腦膜炎實驗室診斷及治療進展-課件免疫學檢查 (一)結(jié)核分枝桿菌( MTB) 抗體指標(1)脂肪阿拉伯酸甘露聚糖( LAM) 抗體( LAM-IgG) 鄭智遠等采

2、納ELISA方法定性檢測血清和CSF中的LAM-IgG,結(jié)果顯示單獨檢測血清和CSF的LAM-IgG,敏感性分別為45、45%、48、05%,特異性分別為96、67%、100%,二者之間差異無統(tǒng)計學意義,均可單獨用于診斷TBM;同時檢測血清和CSF中的LAM-IgG,敏感性和特異性分別為55、84%、96、67%。同時檢測血清和CSF能夠提高TBM的診斷率。 鄭智遠,陳瓊,賀鐵生,等、 中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志,2001,11: 26、免疫學檢查 (一)結(jié)核分枝桿菌( MTB) 抗體指標鄭智遠(2)MTB 特異性蛋白( TBSA) 抗體 TBSA是一種特異性較高的MTB分泌性酸性磷酸酯酶。王曉艷等檢測

3、了血清和胸水中的TBSA抗體水平,結(jié)果顯示診斷肺結(jié)核的敏感性及特異性分別為70、5%、73、5%,但診斷TBM的敏感性僅為41、9%。王曉艷,朱俊,劉慧,等、 中國實用醫(yī)藥,2013,18: 52、(2)MTB 特異性蛋白( TBSA) 抗體 TBSA是 TBSA抗體的檢測關于活動性肺結(jié)核是一種快速簡便有較高敏感性和特異性的輔助診斷方法,對TBM的診斷價值不高,但在排除TBM的診斷中具有一定的價值。 TBSA抗體的檢測關于活動性肺結(jié)核是一種快速簡便有較高敏(二)MTB抗原指標(1)早期分泌的特異性靶抗原6 ( ESAT-6) 僅存在于致病性分枝桿菌中MTB特異性抗原成分排除卡介苗接種的干擾幸免

4、了無胞壁的L型菌不易被檢出的不足(二)MTB抗原指標(1)早期分泌的特異性靶抗原6 ( ES觀察病程中ESAT-6 的動態(tài)變化關于未能及時就醫(yī)或是經(jīng)過治療干預的患者,ESAT-6仍有一定的補充診斷意義觀察病程中ESAT-6 的動態(tài)變化關于未能及時就醫(yī)或是經(jīng)過治(2)培養(yǎng)濾液蛋白10( CFP-10)早中期分泌,釋放于菌體外的低分子量蛋白僅存在于致病性分枝桿菌在卡介苗及其他分枝桿菌中缺失具有診斷性抗原優(yōu)勢(2)培養(yǎng)濾液蛋白10( CFP-10)早中期分泌,釋放于菌張昆南等采納CSF 抗原負壓濃縮及酶聯(lián)免疫斑點法( ELISPOT) 檢測CFP-10,敏感性為93、1%,特異性為92、5%,該法顯

5、著提高了TBM 的檢出率。張昆南,許志強,吳曉牧,等、 中華神經(jīng)科雜志,2011,44: 86、張昆南等采納CSF 抗原負壓濃縮及酶聯(lián)免疫斑點法( ELISCFP-10+ESAT-6綜合了單一抗原的優(yōu)勢增強活化能力增加敏感性、特異性CFP-10+ESAT-6綜合了單一抗原的優(yōu)勢增強活化能增加 馬春靜等采納時間分辨熒光免疫法定量測定CSF 中ESAT6-CFP10抗原的含量,結(jié)果顯示該法靈敏度特別高,且特異性較好,為92、6%,而且該法對檢測條件的要求不高,因此該法可作為一項新的檢查手段用于臨床MTB感染的早期診斷。馬春靜,鄒薇,王麗、 中外醫(yī)療,2015,21: 74、 馬春靜等采納時間分辨熒

6、光免疫法定量測定CSF 中ESAT(三)細胞因子指標 機體感染MTB后以細胞免疫為主,細胞因子在TBM的免疫反應中起到了重要的作用。CSF中的大量細胞因子直截了當反映了TBM的病理變化,是直截了當?shù)脑\斷指標。(三)細胞因子指標 機體感染MTB后以細胞免疫為主,細胞因 (1)INF-水平MTB INF- 體外釋放試驗(TB-IGRA) 錢福初等用MTB特有抗原(ESAT-6、CEP-10)在體外作用于外周血,然后用ELISA檢測INF- 水平,對TBM的診斷的敏感性達87、5%,準確率89、7%。錢福初,何建方,戴利成,等、 中國衛(wèi)生檢驗雜志,2012,22: (1)INF-水平錢福初,何建方,

7、戴利成,等、 中國衛(wèi)生直截了當檢測CSF中INF- 水平。 黃錫坤等用ELISA法分別檢測各組的CSF及血清中的INF- 水平,CSF中INF- 水平診斷TBM的靈敏度、特異度分別達92、0%、95、3%,且CSF與血清INF- 水平無相關性。 綜上,外周血和CSF中INF-水平均可作為診斷TBM的輔助方法,且CSF更具優(yōu)勢。 黃錫坤,歐結(jié)艷、 中國感染與化療雜志,2014,14: 429、 返回直截了當檢測CSF中INF- 水平。(2)IL-8 IL-8是單核細胞在MTB刺激下產(chǎn)生的一種細胞炎性因子,促進炎癥細胞的趨化及誘導細胞增值,參與細胞免疫及遲發(fā)型超敏型炎癥的發(fā)生,致局部的炎癥反應,能

8、殺滅MTB,也能造成血-腦屏障的破壞和腦組織局部免疫損傷。(2)IL-8 IL-8是單核細胞在MTB刺激下產(chǎn)生的一 王麗豪等研究結(jié)果表明,TBM組IL-8較病毒性腦膜炎組、非感染組顯著升高,IL-8與TBM緊密相關。馬江濤等研究結(jié)果表明TBM急性期IL-8水平顯著高于其恢復期和對比組水平(均P0、01),病情控制好轉(zhuǎn)后其表達顯著下降,與對比組差異無統(tǒng)計學意義。王麗豪,劉忠華,陳桂生,等、 中華神經(jīng)科雜志,2014,47: 168、 馬江濤,吳文苑,張立軍,等、 中國衛(wèi)生檢驗雜志,2014,24:2027、 王麗豪等研究結(jié)果表明,TBM組IL-8較病毒性腦膜炎組、 因此,IL-8水平的測定對TB

9、M具有一定的診斷價值,且其表達水平動態(tài)變化有助于療效觀察和判斷預后。 因此,IL-8水平的測定對TBM具有一定的診斷價值,且其生化指標(1)腺苷脫氨酶(ADA) ADA是一種核酸代謝酶,與機體細胞免疫活性緊密相關,ADA表達上升是T淋巴細胞分化、增值的病理改變。機體感染MTB后以細胞免疫為主,故檢測ADA 水平可在一定程度上反映MTB感染情況。 ADA定量診斷TBM的最佳界值是9、5 U/L,且ADA水平隨著有效的抗結(jié)核治療而逐漸下降。生化指標(2)CSF與血漿生化指標比值 CSF/血漿ADA 比值和氯化物比值對診斷TBM有較大的意義,尤其當ADA比值1、19且氯化物比值0、93時診斷TBM的

10、敏感度和特異度均較高。這種方法簡單、易行,費用低,耗時短,關于TBM的早期診斷具有較高價值。(2)CSF與血漿生化指標比值(3)宿主熱休克蛋白 熱休克蛋白是普遍存在的分子伴侶,結(jié)合和幫助折疊新生或者變性的多肽,也被認為是對抗病原體的免疫反應的主要免疫原。宿主熱休克蛋白被認為參與抗原遞呈內(nèi)源性通路,導致CD8+T細胞的激活,這估計是其在結(jié)核病中增加的原因。Osterloh A,Breloer M、 Med Microbiol Immunol,2008,197: 1、 Suzue K,Zhou X,Eisen HN,et al、 Proc Natl Acad Sci USA,1997,94: 13

11、146、 Li A,Menoret Z,Shrivastava P、 Curr Opin Immunol,2002,14:45、(3)宿主熱休克蛋白 熱休克蛋白是普遍存在的分子伴侶,結(jié)合 Shekhawat等采納間接性ELISA法檢測CSF中的熱休克蛋白,其中熱休克蛋白70、熱休克蛋白90的敏感性分別為89% 、88%,特異性分別為82%、89%。 綜上,宿主熱休克蛋白關于TBM的診斷有較好的應用前景,但仍需要擴大樣本進一步研究。Shekhawat SD,Purohitb HJ,Taoria GM,et al、 Clin Neurol Neurosurg,2016,140: 47、 Shekh

12、awat等采納間接性ELISA法檢測CSF中的分子生物學方法(一)PCR 采納采納蛋白b、MBP64、IS6110設計的多重PCR 擴增的靈敏度、特異度在確診的TBM患者中分別顯示為94、4%、100%。因為這些方法實際操作中步驟繁瑣、耗時、耗力且對實驗設施要求較高,故關于臨床常規(guī)實驗實用性較低。分子生物學方法(一)PCR(2)GeneXpertMTB/RIF系統(tǒng) GeneXpertMTB/RIF系統(tǒng)為全自動核酸擴增技術,以半巢式熒光定量PCR為基礎,以MTB對利福平耐藥相關基因ropB為靶基因。馬占云,陳鵬,范學文、 中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志,2014,14: 664、(2)GeneXpertM

13、TB/RIF系統(tǒng)馬占云,陳鵬,范學兩個主要的優(yōu)點: 以一個封閉的檢驗系統(tǒng)為基礎;操作簡便,對工作人員的技術要求較低,可應用于實驗室外的環(huán)境,生物危害及交叉污染風險小; 同時檢測出MTB以及利福平耐藥性,快速得出結(jié)果。關于結(jié)核病流行地區(qū)具有一定的可行性。Lawn SD,Nicol MP、 Future Microbiol,2011,6: 1067、兩個主要的優(yōu)點: Lawn SD,Nicol MP、 Fut總結(jié)細菌學方法:較常用的便捷方法仍屬CSF涂片法,采納改良抗酸染色法能夠明顯提高陽性率及延長抗酸桿菌的檢出時間。免疫學檢查:靈敏度,以及較好的特異性,且該法對檢測條件的要求不高。生化指標:方法

14、簡單、易行,費用低,耗時短。分子生物學方法:PCR關于臨床常規(guī)實驗實用性較低。GeneXpertMTB/RIF 敏感度不高,但其操作簡便,關于結(jié)核病流行地區(qū)有一定的可行性?？偨Y(jié)細菌學方法:較常用的便捷方法仍屬CSF涂片法,采納改良抗結(jié)核性腦膜炎的治療結(jié)核性腦膜炎實驗室診斷及治療進展-課件治療原則(1)早期用藥、聯(lián)合用藥、規(guī)律用藥、適當劑量、全程用藥的結(jié)核病化療原則;(2)選用有殺菌、滅菌作用, 且可通過血腦屏障良好的藥物。治療原則推薦方案目前,對TBM的抗結(jié)核治療仍沒有一個統(tǒng)一的標準。世界衛(wèi)生組織推薦以抗結(jié)核為基礎的治療。當臨床懷疑TBM時應馬上給予抗結(jié)核治療。強化時期:4種藥物(異煙肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇或鏈霉素)治療至少3個月。鞏固時期:若反應良好,隨后給予2種藥物維持至少6個月,通常7-10個月。推薦方案目前,對TBM的抗結(jié)核治療仍沒有一個統(tǒng)一的標準。世抗結(jié)核療程當前, 結(jié)腦最適合的療程仍未取得一致意見。美國胸科(ATS)和疾