植物科學(xué)最前沿-實(shí)驗(yàn)方法步驟pod活性測(cè)定

1、350-770A 400-315nm，B 315-280nm，C 280-酶活單位=ODmg1FWmin在冰浴中研磨成勻漿。將勻漿全部轉(zhuǎn)入離心管中，在 3000rpm，4條件下離心 10min，上2.9ml0.05mol/L的磷酸緩沖液1mL0.05mol/L愈創(chuàng)木酚溶液0.05mol/L愈創(chuàng)木酚溶液,0.06207g愈創(chuàng)木酚定容1.0ml 30H2O2670L30 0.01 為一個(gè)酶活單位。酶活計(jì)算OD290。g1.FW.h1=OD 0.2ml1.5ml pH7.01ml25300L0.1mol/LH2O230H2O256.8L240 nm1 min3 min1 min 0.1SOD 3 3

2、mLSOD 反應(yīng)液（B A）0.lmol/L pH7.8 磷酸緩沖液 20mL1.7mL20mL（B）104mmol/L的甲硫氨稱取0.39g甲硫氨酸溶解并定容至25mL（C）0.3mmol/L的 （NBT， （E）50mol/L 的核黃素稱取0.0012g核黃素，定容于10mL容量瓶中。取A 液8mL、B 液2mL、C 液 4mL、D 液2mL，共16mL 混勻?yàn)镾OD 反應(yīng)液。再加入150L 50mol/L 的核黃150L 粗酶液25，4000Lx 光照20min 后于 560nm 下測(cè)定吸光度。計(jì)算公式：SODOD560值/g鮮重=（OD560-樣品NBT 光還原的相對(duì)百分比,作出二者相

3、關(guān)曲線,找出抑制NBT50%光化學(xué)還原的酶液量(l),定為一個(gè)酶活單位U,計(jì)算總酶活單位和酶的比活MDA 含量測(cè)定：取中粗酶液 1.5mL，加入 2.5mL0.5%的硫代巴比妥酸（TBA，取 0.5gTBA 溶解于 100mL20%三氯乙酸在沸水浴中保溫 30min 后，立即冷卻，10000rpm（A（mol/L）=6.45（A532-A600）-0.56A450PPO 活性的測(cè)定：植物組織 1g，用預(yù)冷的 PH7.8(0.05M)磷酸緩沖液 1ml，研磨，再加1ml沖液，傾入5ml離心管410000rpm20min，收集上清。反應(yīng)體系，1mlPALpH8.8硼酸緩沖液(15mmol/L巰基乙

4、醇)50mg1.6mL0.1mol/L-1硼酸緩沖液(pH8.810mmolL-1苯丙氨酸0.2mL酶液371h后,0.2mL6molL-1HCl終止反應(yīng),290nm處的吸光值,以反應(yīng)時(shí)間零作參比。A290 0.01 為一個(gè)酶活單位(Uh-1g-1m-1)。活性=（OD 值/0.01t）乘稀釋倍數(shù). B超氧化物歧化酶（SOD）反應(yīng)液（A）0.lmol/LpH7.87.gNa2HO412H2O 183mL3.12NaH2P422O200mL17mL200mL4mmol/L0.78g50mL（C）0.3mmol/L （NBT （D）0.8mmol/L的乙二胺四乙酸 （E）0.32mmol/L0.0

5、12g100mLA40mL、B10mL、C20mL、D10mL80mLSOD PALPOD 酶活結(jié)果都跟書(shū)上的不同，吸光值該增大的絲處理 5 重復(fù) 3 照在傷口處貼無(wú)菌的培養(yǎng)塊參照 Viaud 等1的離體葉片接種法:在培養(yǎng)皿內(nèi)鋪雙層濾紙,加少量水,1 平展真葉,沖洗后用75%的酒精表面消毒30s,用滅菌水沖洗3遍,待吸干葉表水后,展平鋪到滅3mm的打孔器在培養(yǎng)好的各地灰霉菌菌落邊緣打取菌餅,反接于葉片4塊菌餅,5片葉,PDA培方法,其分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為:0級(jí),無(wú)癥狀或癥狀不明顯;1級(jí),25mm(2mm)水漬狀黃褐色病斑;2級(jí),510mm(5mm)水漬狀黃褐色病斑;3級(jí),1015mm(包含 10mm)水

6、漬狀黃褐色病斑;4級(jí),形成直徑1520mm(包含15mm)水漬狀黃褐色病斑;5級(jí),形成直徑20 mm 水漬狀黃褐色病斑。DPS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)供試灰霉菌株引起的病斑直徑數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,Duncans新復(fù)極差檢驗(yàn)(LSR test)進(jìn)行多重比較。根據(jù)灰霉菌株在不同寄主葉片上形成病斑的大小,將供試 12 3 種,3 級(jí)以上的菌株為強(qiáng)致病力,1 弱致病力,2采用幼苗浸漬法，取 5 一 6 葉期的大蒜幼苗，洗凈根部，放入盛有 300mL 粗毒素的燒杯中，置于 20培養(yǎng)箱培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)蒸餾水為對(duì)照，并分別在處理后的第 12、24、36、48、 60、72、84h 3 9 株，液氮速凍。待馬鈴薯植株生長(zhǎng)到 6 葉時(shí),進(jìn)行葉面噴霧接種,以清水處理作為對(duì)照,接種后保濕 36 h。于接種后1、2、3、4、5 6 d 取樣,用于酶活性測(cè)定,