人血漿中穿心蓮內(nèi)酯的HPLCMS測定及生物等效性研究

1、張志華，何周康，周彥彬，厲宇紅，田娟，左英，丁勁松1實行部門1.1儀器與試劑穿心蓮內(nèi)酯比擬品天津市漢康醫(yī)藥生物技能提供，含量99.6%；奈韋拉平內(nèi)標(biāo)，南京第一病院提供；穿心蓮內(nèi)酯疏散片R50g/片，江西青峰藥業(yè)，批號20220711。穿心蓮內(nèi)酯疏散片T50g/片，天津市漢康醫(yī)藥生物技能試制，批號050324。甲醇色譜純，TEDIApany；水為純化水；別的試劑均為國產(chǎn)闡發(fā)純AR級。1.2色譜條件及血樣處置懲罰毛細(xì)管電壓：3.50KV；錐孔電壓：35V；枯燥氣流速：500L/h；離子源溫度：120；幫助氣溫度：380；離子檢測方法：選擇性離子檢測SI；離子極性：正離子psitive；離子化方法：

2、氣動幫助電噴霧離子化ESI；檢測工具：穿心蓮內(nèi)酯，+Na+，/z373.6；內(nèi)標(biāo)：奈韋拉平，+H+，/z267.7。正確汲取血漿0.5L，置10L具塞尖底離心管中，參加內(nèi)標(biāo)1.068g/L100L，漩渦振蕩1in，參加乙酸乙酯2.5L，漩渦振蕩3in，4000r/in離心10in，汲取有機(jī)相于另一離心管中，50水浴氮氣吹干。殘渣用150L活動相溶解，進(jìn)樣20L。1.3試驗方案試驗經(jīng)中南大學(xué)倫理委員會容許，20名康健男性志愿者，年事22.21.4歲，體重58.55.7kg，經(jīng)簽訂知情同意書和體檢及格后納入試驗。志愿者隨機(jī)平分為兩組，禁食12h后，于清早別離單次口服穿心蓮內(nèi)酯片T或R0.15g，于

3、服藥前及服藥后0.25h、0.5h、0.75h、1.0h、1.5h、2.0h、3.0h、4.0h、6.0h，8.0h、12.0h、24.0h、36.0h各抽取肘靜脈血4L。一周后交織服藥，取血要領(lǐng)和時間雷同。網(wǎng)羅的血樣標(biāo)本置于肝素化試管中，在-20保存待測。1.4數(shù)據(jù)處置懲罰2效果2.1色譜舉動在選定的條件下，穿心蓮內(nèi)酯和內(nèi)標(biāo)峰形精良，穿心蓮內(nèi)酯和內(nèi)標(biāo)的保存時間均為2.1in擺布，內(nèi)源性雜質(zhì)不滋擾測定?？杖毖獦印⒋┬纳弮?nèi)酯比擬品及內(nèi)標(biāo)、空缺血樣中參加比擬品和受試者服藥后血樣色譜圖見圖1。2.2線性范疇取空缺血漿別離配制成含穿心蓮內(nèi)酯別離為1.343g/L、4.029g/L、13.43g/L、2

4、6.86g/L、67.15g/L、134.3g/L、268.6g/L的系列尺度血漿樣品，余照“血樣處置懲罰項下要領(lǐng)操縱并測定。記載色譜圖，以穿心蓮內(nèi)酯面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值Y與血藥濃度X舉行線性回歸，得回歸方程：Y=0.022253X+0.017778，r=0.9992。穿心蓮內(nèi)酯濃度在1.343268.6g/L范疇內(nèi)與峰面積比線性精良，最低定量濃度為1.343g/L。2.3接納率與細(xì)密度試驗用空缺血漿配制穿心蓮內(nèi)酯濃度為4.029g/L、26.86g/L、134.3g/L的血樣各5份，按“血樣處置懲罰項下平行操縱，進(jìn)樣20L，記載穿心蓮內(nèi)酯和內(nèi)標(biāo)峰面積；另配制穿心蓮內(nèi)酯濃度為4.029g/L、

5、26.86g/L、134.3g/L的甲醇溶液，每份0.5L，參加內(nèi)標(biāo)溶液1.068g/L100L，40水浴氮氣吹干，殘渣用150L活動相溶解，進(jìn)樣20L，記載穿心蓮內(nèi)酯和內(nèi)標(biāo)色譜峰面積。以血漿樣品測定的峰面積除以同濃度的甲醇溶液峰面積所得百分率盤算絕對接納率，效果穿心蓮內(nèi)酯低、中、高濃度絕對接納率別離為78.0%4.0%、78.0%3.0%、88.1%4.2%n=5。用空缺血漿配制穿心蓮內(nèi)酯濃度為4.029g/L、26.86g/L、134.3g/L的血樣各5份，按“血樣處置懲罰項下平行處置懲罰后進(jìn)樣，在一天內(nèi)測定5次，由尺度曲線盤算百般品的濃度，以測得值與參加值之比盤算接納率，并盤算日內(nèi)細(xì)密度

6、，效果各濃度的接納率為95.7%104.7%n=15，日內(nèi)RSD為2.4%6.4%。上述樣品一連測定3天，盤算白天細(xì)密度，效果白天RSD為6.3%12.4%。2.4不變性試驗用空缺血漿配制穿心蓮內(nèi)酯濃度為4.029g/L、26.86g/L、134.3g/L的血樣，在室溫條件下安排4h；在-20冰箱中冷凍后取出，室溫融化，重復(fù)操縱3次；-20冰箱中安排30d，血樣提取后于4主動進(jìn)樣器中安排12h，別離在差異時間點取樣測定，效果樣品在室溫4h內(nèi)，在3次凍融歷程中，在冷凍條件下安排30d以及血樣提取后于4主動進(jìn)樣器中安排12h不變RSD7.2%。2.5兩種穿心蓮內(nèi)酯片的相對生物使用度20名康健志愿受試者單劑量口服穿心蓮內(nèi)酯疏散片T和R各0.15g后的均勻藥動學(xué)參數(shù)見表1。表1單劑量口服穿心蓮內(nèi)酯疏散片T和R后均勻藥物動力學(xué)參數(shù)略3討論20名康健受試者單次口服穿心蓮內(nèi)酯疏散片T和R0.15g后，汲取較快，約1.0h血藥濃度到達(dá)峰值。藥物峰濃度、汲取總量與同劑量以穿心蓮內(nèi)酯計的穿心蓮提取物給藥比擬顯著低落，表現(xiàn)中藥提取物較優(yōu)的促汲取作用7，但與同制劑的藥動學(xué)參數(shù)相近8。兩制劑在人體內(nèi)汲取歷程相稱，生物使用度無顯著差異，兩種穿心蓮內(nèi)酯