實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)課件

1、課題1 微生物的利用實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)1課題1 微生物的利用實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)1 了解有關(guān)微生物及培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標(biāo)： 掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。 無菌技術(shù)的操作。二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：三、技能目標(biāo)：實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)2 了解有關(guān)微生物及培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無菌技術(shù)的操微生物包括哪五類：病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動(dòng)物特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡單,形體微小.通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu).且體內(nèi)一般不含有葉綠素.不能進(jìn)行光合作用. 原

2、核生物界 原生生物界真菌界病毒界一、基礎(chǔ)知識(shí)： (一)微生物實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)3微生物包括哪五類：病毒特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡單,形體微小.通常要用光學(xué)細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌：單細(xì)胞不分枝的原核微生物。細(xì)菌細(xì)胞微小而透明，通常用適當(dāng)染料染色后顯微鏡觀察圖1-1 常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)A.球菌 B.桿菌 C.弧菌實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)4細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌：單細(xì)胞不分枝的原核微生物。圖1-1 細(xì)菌細(xì)胞由外向里依次有鞭毛、菌（纖）毛、莢膜、細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)中又有液泡、儲(chǔ)存性顆粒、核質(zhì)等。細(xì)菌的構(gòu)造圖1-3 細(xì)菌的結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)5細(xì)菌細(xì)胞由外向里依次有鞭毛、菌（纖）毛、莢

3、膜、細(xì)胞壁、細(xì)胞膜*細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：堅(jiān)韌且有彈性細(xì)胞壁有哪些功能？ 固定細(xì)胞外形； 保護(hù)細(xì)胞免受外力的損傷； 阻攔大分子物質(zhì)進(jìn)人細(xì)胞； 使細(xì)胞具有致病性及對噬菌體的敏感性。傷寒桿菌細(xì)胞壁中含毒素實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)6*細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：堅(jiān)韌且有彈性 保護(hù)細(xì)胞免受外力的損芽孢 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌.實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)7芽孢 有些細(xì)菌在一定的條件

4、下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓菌落：單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)8菌落：單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)9菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)9細(xì)菌的營養(yǎng)類型 根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。自養(yǎng)菌:分類,舉例?異養(yǎng)菌:腐生菌寄生菌 大部分病原菌光合自養(yǎng)型:光合細(xì)菌化能自養(yǎng)型:硝化細(xì)菌,鐵細(xì)菌,硫細(xì)菌實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)10細(xì)菌的營養(yǎng)類型 根據(jù)細(xì)菌所

5、利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為放線菌1、結(jié)構(gòu)：單細(xì)胞原核分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)11放線菌1、結(jié)構(gòu)：實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)11鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素 微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/3是由放線菌產(chǎn)生的 應(yīng)用:實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)12鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/病毒的結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)13病毒的結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)132、病毒的增殖：實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)142、病毒的增殖：實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)14真菌實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)15真菌實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分

6、離和培養(yǎng)15實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)16實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)16一、基礎(chǔ)知識(shí)：（二）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌種保存及分離、鑒定菌落、活菌計(jì)數(shù)等，半固體培養(yǎng)基可觀察微生物的運(yùn)動(dòng)，液體培養(yǎng)基常用于發(fā)酵工業(yè)。（2）按功能分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。（3）按成分分：天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。1.培養(yǎng)基的類型和用途實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)17一、基礎(chǔ)知識(shí)：（二）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: 分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

7、 分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基: 分離固氮菌 不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基: 分離自養(yǎng)型微生物 加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞 加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基: 分離雜交瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)18選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)18天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。優(yōu)點(diǎn)：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)：來源受限;成分復(fù)雜，影響對某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析;易發(fā)生支原體污染; 根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無

8、機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。 優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對固定;成本低 缺點(diǎn)： 缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長需要。 合成培養(yǎng)基:天然培養(yǎng)基：實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)19天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。 血清中含有：多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）多種金屬離子； 激素；促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。各種生長因子轉(zhuǎn)移蛋白不明成分 人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)20血清中含有： 人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長實(shí)驗(yàn)

9、1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)21液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)22固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)22半固體培養(yǎng)基：無動(dòng)力 有動(dòng)力(彌散)(是否運(yùn)動(dòng)) 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)23半固體培養(yǎng)基：無動(dòng)力 有動(dòng)力(彌散)(是否運(yùn)動(dòng)2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方 (參考教材附錄內(nèi)容) 3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、 無機(jī)鹽、等營養(yǎng)物質(zhì)， 另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣

10、、二氧化碳、滲透壓等的要求。 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)242.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方 (參考教材附錄4.培養(yǎng)基的用途液體培養(yǎng)基：增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌半固體培養(yǎng)基：動(dòng)力檢測，保種實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)254.培養(yǎng)基的用途液體培養(yǎng)基：增菌實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)2二、無菌技術(shù)1.無菌技術(shù)的概念 無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。無論是隨后將要學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還是平板稀釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到“無菌”，即防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)26二、無菌技術(shù)1.無

11、菌技術(shù)的概念 無菌操作泛指在培（）消毒定義：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程。區(qū)分為高程度消毒（High-level Disinfection）、中程度消毒（Intermediate-level Disinfection）、低程度消毒（Low-level Disinfection）三種方式。2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)27（）消毒定義：2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 實(shí)驗(yàn)1大（2）滅菌的定義：以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無菌之過程。 滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。實(shí)驗(yàn)

12、1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)28（2）滅菌的定義：以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物，1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒(1)消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)291、煮沸消毒法:100煮沸5-6min(1)消毒的方法：31、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170 下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121 下維持15-30min.(2)滅菌的方法：實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)301、灼燒滅菌(2)滅菌的方法：實(shí)

13、驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)30 最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時(shí)可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。 有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。 而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計(jì)的。 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)31 最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所分類定義方法滅菌法殺滅一切微生物物理法：熱力、輻射、微波、等離子體化學(xué)法：

14、醛類、烷化劑高效消毒法殺滅一切致病微生物紫外線、含氯劑、臭氧、復(fù)配劑等中效消毒法殺滅除芽孢外的致病微生物超聲波、碘類、醇類、酚類低效消毒法殺滅細(xì)菌繁殖體、親脂病毒單鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子無菌技術(shù)實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)32分類定義方法滅菌法殺滅一切微生物物理法：熱力、輻射、微波、等3.微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)333.微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌實(shí)驗(yàn)1大腸桿1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.

15、請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)341.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外三、實(shí)驗(yàn)操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)35三、實(shí)驗(yàn)操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）1計(jì)算、稱量2溶化3調(diào)pH：pH764過濾：這一步可以省去。5分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾

16、污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。6加塞7包扎操作步驟實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)361計(jì)算、稱量操作步驟實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)36 8滅菌: 將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121，滅菌1530min。將培養(yǎng)基用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160170 下滅菌2h。 9倒平板: 待培養(yǎng)基冷卻到50 左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種. 10無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入37的溫室中培養(yǎng)2448小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。實(shí)驗(yàn)

17、1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)37 8滅菌:實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)37倒平板技術(shù)實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)38倒平板技術(shù)實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)38 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？問題討論 答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)39 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，才能3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的

18、部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)403.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如2、純化大腸桿菌接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. 在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)

19、胞群體,這就是菌落.微生物的接種技術(shù)實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)412、純化大腸桿菌接種方法有： 平板劃線法:通過接 平板劃線的操作方法交叉劃線法連續(xù)劃線法 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)42 平板劃線的操作方法實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)42平板劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基的原因一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)43平板劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基的原因?qū)嶒?yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)43實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)44實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)44問題討論 1.為什么在操作的第一步以及每

20、次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)45問題討論 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

21、3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)46 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)47實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)47實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)48實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)48問題討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？ 應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與

22、培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)49問題討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)50微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)5菌種的保存 1、臨時(shí)保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4冰箱保存。 2、長期保存：甘油冷凍管藏法實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)51菌種的保存 1、臨時(shí)保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長四、課題成果評價(jià) （一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重

23、新制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。 （三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)52四、課題成果評價(jià) （一）培養(yǎng)基的制作是否合格實(shí)驗(yàn)1本課題知識(shí)小結(jié):實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)53本課題知識(shí)小結(jié):實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)53【典例解析】 例1關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽 D.無機(jī)氮源也能提供能量 解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于A、B選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時(shí)是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C選項(xiàng)，除水以外的無機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機(jī)