免疫磁珠技術(shù)在食品有害微生物檢測(cè)中的應(yīng)用課件

1、免疫磁珠技術(shù)在食品有害微生物檢測(cè)中的應(yīng)用小組成員：田理剛、張帥、田勇、朱林韜、趙建秋、董唯目 錄1免疫磁珠技術(shù)的介紹2免疫磁珠技術(shù)在食品有害微生物檢測(cè)中的應(yīng)用3小結(jié)1、免疫磁珠技術(shù)的介紹 1.1免疫磁珠技術(shù)簡(jiǎn)介 免疫磁珠( Immunomagnetic bead, IMB,簡(jiǎn)稱磁珠)技術(shù),是近年發(fā)展起來(lái)的將固化試劑特有優(yōu)點(diǎn)與免疫學(xué)反應(yīng)高度特異性結(jié)合于一體的一項(xiàng)新技術(shù)。 以免疫學(xué)為基礎(chǔ),滲透到病理、生理、藥理、微生物、生化及分子遺傳學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域,其在免疫檢測(cè)、細(xì)胞分離、生物大分子純化和分子生物學(xué)等方面得到越來(lái)越廣泛應(yīng)用。全自動(dòng)免疫磁珠技術(shù)細(xì)胞分選系統(tǒng)AutoMACS Pro1.2 免疫磁珠的結(jié)構(gòu)

2、磁性微球高分子材料免疫配基1.3 IMB技術(shù)的基本原理特異性抗體加入待測(cè)液中撤去磁場(chǎng)磁性外力1.4 IMB技術(shù)作用方式免疫磁珠分離技術(shù)直接法間接法第一抗體第二抗體 直接法是先用抗體包被磁珠,使抗體與磁珠給合(物理吸附或化學(xué)結(jié)合),再加入抗原物質(zhì),二者結(jié)合形成磁珠-第一抗體-抗復(fù)原合物,在磁力作用下, 與其它物質(zhì)分離。 間接法是先用羊抗鼠IgG(第二抗體)包被磁珠,使磁珠作為第二抗體載體,當(dāng)抗原與第一抗體結(jié)合后,加入帶有第二抗體磁珠,磁珠上第二抗體便與第一抗體結(jié)合,形成磁珠-第二抗體-第一抗體-抗原復(fù)合物,在磁力作用下,與其它物質(zhì)分離。1.5 IMB技術(shù)的優(yōu)點(diǎn) 特異性強(qiáng)、分離速度快、效率高可重復(fù)

3、性好、操作簡(jiǎn)單不需要昂貴的儀器設(shè)備,不影響被分離細(xì)胞或其它生物材料的生物學(xué)性狀和功能等2.1 IMB技術(shù)對(duì)大腸桿菌O157H7的檢測(cè)(GB/T 4789.36-2008) 2.2 IMB技術(shù)對(duì)單增李斯特菌檢測(cè) (SN/T 0184.3-2008)2.3 IMB技術(shù)對(duì)布魯氏桿菌檢驗(yàn) (DB32/T-2016)2.5 IMB技術(shù)對(duì)其余食源性致病微生物的檢測(cè)應(yīng)用 劉琳琳等人利用“自制的金屬螯合免疫磁珠”來(lái)檢測(cè)食品中金黃色葡萄球菌。該法能夠在30min內(nèi)富集檢測(cè)金黃色葡萄球菌且檢測(cè)低限可達(dá)100 cfu。同時(shí)磁珠可保持活性達(dá)3周以上。此檢測(cè)方法同傳統(tǒng)鑒定和分離金黃色葡萄球菌的方法相比具有速度快、靈敏性

4、高、成本低的優(yōu)點(diǎn)。 杜強(qiáng)等人利用“全自動(dòng)免疫磁珠分選系統(tǒng)”檢測(cè)食品中沙門(mén)氏菌，與國(guó)標(biāo)法相比，全自動(dòng)免疫珠分選系統(tǒng)取消了SC和TTB增菌，經(jīng)BPW增菌后直接使用系統(tǒng)富集目標(biāo)菌并接種顯色平板。結(jié)果免疫磁珠法陽(yáng)性檢出率為32，國(guó)標(biāo)法陽(yáng)性檢出率為31，二者無(wú)顯著性差異(P0.05)。但磁珠法取消了二次增菌的步驟，檢測(cè)時(shí)間比國(guó)標(biāo)法節(jié)省24 h，且平板上的單個(gè)菌落生長(zhǎng)率和菌株特異性也更好。 支援等人基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)特異性,以及量子點(diǎn)熒光標(biāo)記的高靈敏度,免疫磁珠磁性分離,免疫量子點(diǎn)熒光標(biāo)記聯(lián)合應(yīng)用的檢測(cè)方法,對(duì)阪崎腸桿菌試驗(yàn)結(jié)果表明，能在2h內(nèi)對(duì)乳制品樣品中的食源性致病菌（阪崎腸桿菌）進(jìn)行檢測(cè)，且方

5、法特異性好，靈敏度高（達(dá)10cfu/mL），其在食品檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用成為可能。 蘇惠玉等人應(yīng)用“山羊抗黃曲霉菌血清的免疫磁珠”捕獲食品中的黃曲霉菌，不需要進(jìn)行增菌培養(yǎng)，應(yīng)用磁捕獲-熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(LMC-FPCR)技術(shù)快速檢測(cè)鑒定食品中的黃曲霉菌。結(jié)果：IMC-FPCR方法檢測(cè)黃曲霉菌的最低檢測(cè)值為2cfumL。結(jié)論：建立了黃曲霉菌的磁捕獲-熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法 (IMC-FPCR) ，該方法可用于食品中黃曲霉菌的快速檢測(cè)及鑒定。2.7 IMB技術(shù)在微生物檢測(cè)應(yīng)用時(shí)的主要影響因素1免疫磁珠的質(zhì)量2目標(biāo)菌、 雜菌及磁珠的比例3待測(cè)標(biāo)本的性狀4磁珠與待測(cè)標(biāo)本的反應(yīng)條件2.8 IMB技術(shù)在食源性致

6、病菌檢測(cè)中應(yīng)用進(jìn)展1IMB技術(shù)結(jié)合顯色培養(yǎng)基 對(duì)食源性致病菌進(jìn)行檢測(cè)2IMB技術(shù)結(jié)合PCR技術(shù) 對(duì)食源性致病菌進(jìn)行檢測(cè)3IMB技術(shù)結(jié)合免疫學(xué)技術(shù) 對(duì)食源性致病菌進(jìn)行檢測(cè)4IMB 技術(shù)結(jié)合電化學(xué)技術(shù) 對(duì)食源性致病菌進(jìn)行檢測(cè)5IMB技術(shù)結(jié)合流式細(xì)胞儀 對(duì)食源性致病菌進(jìn)行檢測(cè)3、小結(jié) IMB技術(shù)在微生物學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，其方便有效性主要在于代替了常規(guī)的選擇性增菌培養(yǎng)過(guò)程，可特異地將目的微生物從樣品中快速分離出來(lái)。與其他先進(jìn)檢測(cè)技術(shù)結(jié)合使用，充分發(fā)揮二者優(yōu)勢(shì)，還能節(jié)約更多時(shí)間、發(fā)揮更大的作用。 但目前在免疫磁珠的生產(chǎn)上還存在一些問(wèn)題，其制備難度大，要獲得均勻性好、超順磁性、粒度適中、易于結(jié)

7、合蛋白質(zhì)的磁珠很難?，F(xiàn)今大部分的磁珠市場(chǎng)被瑞士Dynal和德國(guó)的Miltenyi兩大公司所占有，其產(chǎn)品價(jià)格昂貴，這極大地限制了免疫磁珠技術(shù)在我國(guó)的普及及應(yīng)用。因此，商業(yè)化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的國(guó)產(chǎn)免疫磁珠是今后研究的主要方向。相信隨著研究的不斷深入，免疫磁珠技術(shù)的應(yīng)用前景定會(huì)更加廣闊。References:1.蘇惠玉, 謝榮珍與牛建軍, 免疫磁珠捕獲結(jié)合熒光PCR技術(shù)檢測(cè)食品中黃曲霉菌的研究. 食品科學(xué), 2010(10): 第287-291頁(yè).2.費(fèi)楓與黃迅辰, 免疫磁珠的原理與特性及其在動(dòng)物源性食品檢測(cè)中的應(yīng)用研究. 浙江畜牧獸醫(yī), 2014(05): 第43-47頁(yè).3.劉細(xì)霞與涂俊銘, 免疫磁珠分

8、離技術(shù)及其在食源性致病菌檢測(cè)中應(yīng)用的進(jìn)展. 中國(guó)抗生素雜志, 2014(12): 第956-960頁(yè).4.盛躍穎與陳敏, 免疫磁珠分離技術(shù)在病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用. 中國(guó)食品衛(wèi)生雜志, 2011(05): 第478-481頁(yè).5.杜強(qiáng)與屠博文, 全自動(dòng)免疫磁珠分選系統(tǒng)檢測(cè)沙門(mén)氏菌. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào), 2016(05): 第1836-1839頁(yè).6.支援等, 一種快速檢測(cè)阪崎腸桿菌的新方法免疫磁性分離熒光標(biāo)記. 乳業(yè)科學(xué)與技術(shù), 2010(05): 第231-233+245頁(yè).7馬燕萍.免疫磁珠技術(shù)簡(jiǎn)介J.山西職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).2000.l0: l0.8范蓉,錢和年.免疫磁珠技術(shù)一一種新的免疫學(xué)技術(shù)J.國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè)). 1998,21(1):3.9陸東東.免疫磁珠技術(shù)的應(yīng)用研究J.陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn). l999.14(2): 10.10 Petzinger E, Weidenbach A. Mycotoxins in the food chain:erole of ochratoxinsJ. Livestock Production Science,2002.76(3): 245-250.11 Petzinger E, Ziegler K. Ochratoxin A from a toxicologica1 perspectiveJ. Vet Phamacol,2000