動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課詳解演示文稿

1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課詳解演示文稿第一頁(yè)，共四十二頁(yè)。優(yōu)選動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課第二頁(yè)，共四十二頁(yè)。最基礎(chǔ)的是 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體 等第三頁(yè)，共四十二頁(yè)。生活聯(lián)系： 燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對(duì)于大面積燒傷病人來(lái)講，健康皮膚很有限，請(qǐng)同學(xué)們想一想如何來(lái)治療該病人？第四頁(yè)，共四十二頁(yè)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1、概念：從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它們分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。原理：細(xì)胞增殖如何進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)?第五頁(yè)，共四十二頁(yè)。 結(jié)合問(wèn)題，閱讀書(shū)本，以小組

2、為單位進(jìn)行討論，寫(xiě)出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程圖。每組推選一位“小老師”，準(zhǔn)備上臺(tái)講解學(xué)習(xí)活動(dòng)一：第六頁(yè)，共四十二頁(yè)。合作學(xué)習(xí)（結(jié)合問(wèn)題思考流程）1、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞呢？ 2、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞？3、胰蛋白酶的作用是什么？由此可說(shuō)明細(xì)胞間的物 質(zhì)主要是什么成分？4、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面為何要光滑、無(wú)毒？5、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖？第七頁(yè)，共四十二頁(yè)。動(dòng)物機(jī)體組織單個(gè)細(xì)胞原代培養(yǎng)胰蛋白酶膠原蛋白酶稀釋分裝傳代培養(yǎng)培養(yǎng)過(guò)程：原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)可能會(huì)出現(xiàn)了哪些現(xiàn)象？貼壁生長(zhǎng)接觸抑制 什么措施有利于貼壁生長(zhǎng)？培養(yǎng)器具表面光滑、無(wú)毒什么措施有利

3、于改善接觸抑制？用酶稀釋?zhuān)盅b培養(yǎng)第八頁(yè)，共四十二頁(yè)。培養(yǎng)過(guò)程：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶或膠原蛋白貼滿(mǎn)瓶壁的細(xì)胞10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞株無(wú)限傳代細(xì)胞系單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來(lái)形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。（分解彈性纖維）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體用胰蛋白酶處理接觸抑制第九頁(yè)，共四十二頁(yè)。細(xì)胞接觸抑制 細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。細(xì)胞貼壁：指培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞貼附在瓶壁上

4、的現(xiàn)象。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒。一動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)第十頁(yè)，共四十二頁(yè)。原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。一般培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與第10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞（10代以后）從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱(chēng)為傳代培養(yǎng)。有關(guān)概念：第十一頁(yè)，共四十二頁(yè)。細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到4050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。遺

5、傳物質(zhì)改變具癌細(xì)胞特點(diǎn)遺傳物質(zhì)未改變第十二頁(yè)，共四十二頁(yè)。1、選用組織時(shí)，一般用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做培養(yǎng)材料，而不用老齡動(dòng)物的，這是為什么？ 因?yàn)橛g組織或器官上的細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，有絲分裂旺盛，容易培養(yǎng)。 老齡動(dòng)物的細(xì)胞則相反。學(xué)習(xí)活動(dòng)二：尋根問(wèn)底，加深鞏固第十三頁(yè)，共四十二頁(yè)。2、胰蛋白酶處理組織時(shí)要注意什么問(wèn)題？ 能夠用胃蛋白酶代替嗎？ 控制好消化時(shí)間，太長(zhǎng)會(huì)消化細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì) 不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近.學(xué)習(xí)活動(dòng)二：尋根問(wèn)底，加深鞏固第十四頁(yè)，共四十二頁(yè)。3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否最終培養(yǎng)成新個(gè)體？ 不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)

6、胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體學(xué)習(xí)活動(dòng)二：尋根問(wèn)底，加深鞏固第十五頁(yè)，共四十二頁(yè)。4、人類(lèi)一般保存的是哪類(lèi)細(xì)胞呢？為什么？用于植皮的細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)該不多于多少代？保存10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞；因?yàn)?050部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細(xì)胞方向發(fā)展；10代學(xué)習(xí)活動(dòng)二：尋根問(wèn)底，加深鞏固第十六頁(yè)，共四十二頁(yè)。多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的知識(shí)，認(rèn)為體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞應(yīng)該模擬內(nèi)環(huán)境的哪些條件呢？問(wèn)題探討：第十七頁(yè)，共四十二頁(yè)。3、條件：1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境 2、營(yíng)養(yǎng)3、溫度和PH 4、氣體環(huán)境：補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)一動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（添加一定量的抗生素，定期更換

7、培養(yǎng)液）36.5 +0.5度 ；PH為7.2-7.4。 O2作用：進(jìn)行 呼吸，提供能量 CO2作用：維持培養(yǎng)液的PH值（95%空氣和5% CO2 ）（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清、血漿等。）有氧第十八頁(yè)，共四十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等。）3、溫度和PH4、氣體環(huán)境： O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）O2作用：進(jìn)行 有氧 呼吸，提供能量 CO2作用：維持培養(yǎng)液的PH值保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖防止污染第十九頁(yè)，共四十二頁(yè)。獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)物

8、快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目學(xué)習(xí)活動(dòng)三比較植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞群體第二十頁(yè)，共四十二頁(yè)。 生物制品的生產(chǎn) 用于基因工程 用于檢測(cè)有毒物質(zhì) 細(xì)胞的生理、病理、藥理研究 4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用第二十一頁(yè)，共四十二頁(yè)。1動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是 A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) B.動(dòng)物細(xì)胞融合 C.單克隆抗體 D.胚胎核移植 練一練Lets try!2貼壁細(xì)胞的分裂方式具體是 A.無(wú)絲分裂 B.有絲分裂 C.減數(shù)分裂 D.增殖第二十二頁(yè)，共四十二頁(yè)。3關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培

9、養(yǎng)的敘述，不正確的是 A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái) B.通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng) C.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培育的細(xì)胞全部衰老死亡 D.用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織 練一練Lets try!第二十三頁(yè)，共四十二頁(yè)。2.自然界中有一種含有葉綠體的原生動(dòng)物眼蟲(chóng)，說(shuō)明植物的細(xì)胞器同樣可以在某些動(dòng)物細(xì)胞中存活，請(qǐng)?zhí)接懀簞?dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞之間可以實(shí)現(xiàn)雜交嗎？如果理論上可行，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)出具體實(shí)驗(yàn)方案。第二十四頁(yè)，共四十二頁(yè)。動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液原代培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞增殖部分細(xì)胞無(wú)限

10、傳代去掉組織間蛋白動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)第二十五頁(yè)，共四十二頁(yè)。 根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞核仍具有全能性的特點(diǎn),怎樣將動(dòng)物細(xì)胞的全能性表達(dá)? 再想一想利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)第二十六頁(yè)，共四十二頁(yè)。理論基礎(chǔ)：動(dòng)物的細(xì)胞核具有全能性二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)第二十七頁(yè)，共四十二頁(yè)。 1、概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。 用核移植的方法得到的動(dòng)物稱(chēng)克隆動(dòng)物二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)第二十八頁(yè)，共四十二頁(yè)。2、核移植的種類(lèi)胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（易）（難）第二十九頁(yè)，共四十二頁(yè)。學(xué)習(xí)活動(dòng)四：思考探

11、究 1997年，美國(guó)威斯康星州的一個(gè)奶牛場(chǎng)有一頭名叫盧辛達(dá)的奶牛，年產(chǎn)奶量為30.8t，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量的最高記錄。目前世界各國(guó)高產(chǎn)牛奶場(chǎng)的奶牛，平均每年產(chǎn)量為十幾噸，而我國(guó)平均水平僅有34噸。 你能想辦法繁殖盧辛達(dá)的后代，使年產(chǎn)奶量為30.8t嗎？第三十頁(yè)，共四十二頁(yè)。供體細(xì)胞培養(yǎng)（M卵母細(xì)胞）減數(shù)第二次分裂中期去核的卵母細(xì)胞供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞激活受體細(xì)胞，完成分裂、發(fā)育胚胎移植代孕牛子宮克隆牛3、過(guò)程：第三十一頁(yè)，共四十二頁(yè)。供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（M中期：供質(zhì)）去核無(wú)核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同的犢牛歸

12、納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵細(xì)胞作受體細(xì)胞的原因是:它是最大的細(xì)胞,易操作,它發(fā)育可直接表達(dá)性狀3.嚴(yán)格來(lái)說(shuō)新個(gè)體有卵巢母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)所以有兩個(gè)親本的性狀核移植過(guò)程第三十二頁(yè)，共四十二頁(yè)。 受體細(xì)胞為減數(shù)分裂第二次分裂中期（M）的卵母細(xì)胞。 重組細(xì)胞需通過(guò)物理或化學(xué)方法激活，從而完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。 體細(xì)胞核移植的技術(shù)操作過(guò)程主要包括核供體細(xì)胞和核受體細(xì)胞的處理和制備、核移植、構(gòu)建重組胚胎、胚胎移植等步驟。第三十三頁(yè)，共四十二頁(yè)。卵細(xì)胞母綿羊母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過(guò)程融合后的卵細(xì)胞第三十四頁(yè)，共四十

13、二頁(yè)。 加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育 保護(hù)瀕危物種，增加存活數(shù)量 克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白 可以作為異種移植的供體4、應(yīng)用前景： 可以用于組織器官的移植第三十五頁(yè)，共四十二頁(yè)。5、存在問(wèn)題： 成功率低 克隆動(dòng)物存在健康問(wèn)題 克隆動(dòng)物食品的安全性問(wèn)題存有爭(zhēng)議第三十六頁(yè)，共四十二頁(yè)。從母羊甲的體細(xì)胞中取出細(xì)胞核，注入到母羊乙的去核卵母細(xì)胞中，融合后的細(xì)胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎，再將胚胎移到另一只母羊丙的子宮內(nèi)，出生的小羊大多數(shù)性狀 A. 難以預(yù)測(cè) B. 像甲 C. 像乙 D. 像丙 練一練Lets try!第三十七頁(yè)，共四十二頁(yè)。2 .下列有關(guān)克隆的敘述，不正確的是A.生物體通過(guò)

14、體細(xì)胞進(jìn)行的無(wú)性繁殖 B.將某種瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)繁殖成大量細(xì)胞C.扦插和嫁接實(shí)質(zhì)上也是克隆 D.將雞的某個(gè)DNA片段整合到小鼠的DNA中練一練Lets try!第三十八頁(yè)，共四十二頁(yè)。第三十九頁(yè)，共四十二頁(yè)。問(wèn)題1、植物組織培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的嗎？、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的呢？、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？沒(méi)有是成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)細(xì)胞間的成份是蛋白質(zhì)(膠原蛋白等)第四十頁(yè)，共四十二頁(yè)。思考題、細(xì)胞膜的主要成份是什么？、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問(wèn)題呢？、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？10、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)取材時(shí)，一般是取胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官，請(qǐng)解釋原因？蛋白質(zhì)和磷脂能注意時(shí)間的控制 不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近胚胎組織或幼