食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇的測定

1、 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇的測定 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了口香糖、餅干、糕點、飲料中木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇的高效液相色譜示差折光檢測和蒸發(fā)光散射檢測測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于口香糖、餅干、糕點、飲料中木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇含量的測定。第一法 高效液相色譜示差折光檢測法原理試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)后過濾，上清液進高效液相色譜儀，經(jīng)氨基色譜柱或陽離子交換色譜柱分離，示差折光檢測器檢測，外標(biāo)法定量。試劑和材料注x：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 乙腈：色譜純。3.2 試劑配制3.2.1 三氯乙酸溶

2、液：稱取10g三氯乙酸，加水溶解并定容至100 mL。3.2.2 碳酸鈉溶液：稱取2.12g碳酸鈉，加水溶解并定容至100mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 木糖醇純度99。3.3.2 山梨醇純度99。3.3.3 麥芽糖醇純度99。3.3.4 赤蘚糖醇純度99。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別稱取1g（精確至0.1mg）木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇標(biāo)準(zhǔn)品，加入約25g水溶解，稱量（精確至0.1mg），溶液每克相當(dāng)于40mg赤蘚糖醇、木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇，放置4密封可貯藏一個月。3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液：用移液器分別準(zhǔn)確移取各種糖醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液（3.4.1）40、60

3、、80、100、120、150L于液相色譜樣品瓶中，并加水至1mL。儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜儀：具有示差折光檢測器。4.2 色譜柱：氨基色譜柱（4.6 mm250 mm，5 m）或陽離子交換色譜柱（6.5mm300mm）。4.3 食品粉碎機。4.4 離心機：10000g。4.5 超聲波清洗機：工作頻率40KHz，功率500W。5 分析步驟5.1 試樣制備 5.1.1 口香糖取有代表性的口香糖樣品至少200g，用刀片切成小碎塊，置于密閉的容器內(nèi)混勻。準(zhǔn)確稱取2g左右切碎的樣品，置于50mL離心管中，加入40mL水，混勻后置于80水浴鍋中加熱20min，每隔5min振蕩混勻，取出后8000g

4、離心10min。取8mL上清液置于10mL容量瓶中，加水定容、搖勻，0.22m濾膜過濾后，上機測試。5.1.2 飲料對非蛋白飲料類，取有代表性的飲料樣品至少200mL，充分混勻，置于密閉的容器內(nèi)。稱取10g飲料于50mL容量瓶中，加水定容至50mL，搖勻，0.22m濾膜過濾后，上機測試。對蛋白飲料類，取有代表性的樣品至少200g，置于密閉的容器內(nèi)混勻。稱取樣品5g，置于50mL容量瓶中，加入35mL水，搖勻后超聲30min，每隔5min振蕩混勻，取出后8000g離心10min。沉淀蛋白質(zhì)：上清液中加入3.2.1的三氯乙酸溶液5mL，搖勻后室溫放置30min，9000g離心10min。取8mL上

5、清液于10mL容量瓶中并加水定容，搖勻后取濾液850L，加入3.2.2碳酸鈉溶液150L，搖勻中和；或取10mL上清液加入20mL的乙腈，搖勻后室溫放置30min，9000g離心10min，上清定容至50mL，搖勻。注：對糖醇含量較低，經(jīng)乙腈沉淀稀釋后低于檢出限的樣品，建議采用三氯乙酸沉淀。對赤蘚糖醇含量較低（1%）的樣品，建議采用乙腈沉淀。其它情況兩種方法均可。0.22m濾膜過濾，上機測試。5.1.3 餅干、糕點取有代表性的樣品至少200g，用粉碎機粉碎，置于密閉的容器內(nèi)混勻。稱取粉碎的樣品1g5g，置于50mL離心管中，加入40mL水，搖勻后超聲30min，每隔5min振蕩混勻，取出后80

6、00g離心10min。沉淀蛋白質(zhì)：上清液中加入3.2.1的三氯乙酸溶液5mL，搖勻后室溫放置30min，9000g離心10min。取8mL上清液于10mL容量瓶中并加水定容，搖勻后取濾液850L，加入3.2.2碳酸鈉溶液150L，搖勻中和；或取10mL上清液加入20mL的乙腈，搖勻后室溫放置30min，9000g離心10min，上清定容至50mL，搖勻。注：對糖醇含量較低，經(jīng)乙腈沉淀稀釋后低于檢出限的樣品，建議采用三氯乙酸沉淀。對赤蘚糖醇含量較低（1%）的樣品，建議采用乙腈沉淀。其它情況兩種方法均可。0.22m濾膜過濾后，上機測試。5.2 儀器參考條件5.2.1 氨基色譜柱儀器條件氨基色譜柱（

7、4.6 mm250 mm，5 m）；柱溫：40；流動相：乙腈:水（85:15，V/V）；流速：1.0mL/min；進樣量：20L。5.2.2 陽離子交換色譜柱儀器條件陽離子交換色譜柱（6.5mm300mm）柱溫：80；流動相：水 ；流速：0.5mL/min；進樣量：20L。5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將20L標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.4.2）分別注入高效液相色譜儀中，在5.2 所述色譜條件下測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的響應(yīng)值（峰面積），以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以響應(yīng)值（峰面積）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.4 試樣溶液的測定將20L試樣溶液（5.1）注入高效液相色譜儀中，在5.2 所述色譜條件下測定試樣的響應(yīng)值（峰面

8、積），通過各個糖醇的色譜峰在色譜圖中的保留時間，確認樣品中的糖醇，根據(jù)峰面積由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到樣液中木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次。6 分析結(jié)果的表述試樣中糖醇含量按公式（1）計算： （1）式中：樣品中木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇的含量，單位為質(zhì)量百分數(shù)（）；c： 由標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的樣品中木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；M1：樣品的質(zhì)量，單位為克（g）；M2：水溶液總體積，單位為毫升（mL）。平行測XX果用算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測XX果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留小數(shù)

9、點后兩位。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測XX果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8 其他本方法對木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇的檢出限均為0.4g/100g。第二法 高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法原理試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)后過濾，上清液進高效液相色譜儀，經(jīng)氨基色譜柱分離，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，外標(biāo)法定量。試劑和材料注x：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。10.1 試劑10.1.1 乙腈：色譜純。10.2 試劑配制10.2.1 三氯乙酸溶液：稱取10g三氯乙酸，加水溶解并定容至100 mL。10.2.2 碳酸鈉溶液：稱取2.12g碳酸鈉，加水溶

10、解并定容至100mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。10.3 標(biāo)準(zhǔn)品10.3.1 木糖醇純度99。10.3.2 山梨醇純度99。10.3.3 麥芽糖醇純度99。10.3.4 赤蘚糖醇純度99。10.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制10.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別準(zhǔn)確稱取木糖醇、山梨糖醇、麥芽糖醇25mg，赤蘚糖醇35mg，精確至0.1mg，置于10mL容量瓶中加水溶解并定容，作為儲備液，放置4密封可貯藏一個月。10.4.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液：用移液器分別準(zhǔn)確移取各種糖醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液（10.4.1）40、60、80、100、120、150 L于液相色譜樣品瓶中，并加水至1mL。儀器和設(shè)備11.1 高效液相色譜儀：具有蒸發(fā)光散射檢測器。11.

11、2 色譜柱：氨基色譜柱（4.6 mm250 mm，5 m）。11.3 食品粉碎機。11.4 離心機：10000g。11.5 超聲波清洗機：工作頻率40KHz，功率500W。12 分析步驟12.1 試樣制備 12.1.1 口香糖取有代表性的口香糖樣品至少200g，用刀片切成小碎塊，置于密閉的容器內(nèi)混勻。準(zhǔn)確稱取2g左右切碎的樣品，置于50mL離心管中，加入40mL水，混勻后置于80水浴鍋中加熱20min，每隔5min振蕩混勻，取出后8000g離心10min。取8mL上清液置于10mL容量瓶中，加水定容、搖勻，0.22m濾膜過濾后，稀釋至合適的濃度上機測試。12.1.2 飲料對非蛋白飲料類，取有代

12、表性的飲料樣品至少200mL，充分混勻，置于密閉的容器內(nèi)。稱取10g飲料于50mL容量瓶中，加水定容至50mL，搖勻，0.22m濾膜過濾后，稀釋至合適的濃度上機測試。對蛋白飲料類，取有代表性的樣品至少200g，置于密閉的容器內(nèi)混勻。稱取樣品5g，置于50mL容量瓶中，加入35mL水，搖勻后超聲30min，每隔5min振蕩混勻，取出后8000g離心10min。沉淀蛋白質(zhì)：上清液中加入10.2.1的三氯乙酸溶液5mL，搖勻后室溫放置30min，9000g離心10min。取8mL上清液于10mL容量瓶中并加水定容，搖勻后取濾液850L，加入10.2.2碳酸鈉溶液150L，搖勻中和；或取10mL上清液

13、加入20mL的乙腈，搖勻后室溫放置30min，9000g離心10min，上清定容至50mL，搖勻。注：對糖醇含量較低，經(jīng)乙腈沉淀稀釋后低于檢出限的樣品，建議采用三氯乙酸沉淀。對赤蘚糖醇含量較低（1%）的樣品，建議采用乙腈沉淀。其它情況兩種方法均可。0.22m濾膜過濾，稀釋至合適的濃度上機測試。12.1.3 餅干、糕點取有代表性的樣品至少200g，用粉碎機粉碎，置于密閉的容器內(nèi)混勻。稱取粉碎的樣品1g5g，置于50mL離心管中，加入40mL水，搖勻后超聲30min，每隔5min振蕩混勻，取出后8000g離心10min。沉淀蛋白質(zhì)：上清液中加入10.2.1的三氯乙酸溶液5mL，搖勻后室溫放置30m

14、in，9000g離心10min。取8mL上清液于10mL容量瓶中并加水定容，搖勻后取濾液850L，加入10.2.2碳酸鈉溶液150L，搖勻中和；或取10mL上清液加入20mL的乙腈，搖勻后室溫放置30min，9000g離心10min，上清定容至50mL，搖勻。注：對糖醇含量較低，經(jīng)乙腈沉淀稀釋后低于檢出限的樣品，建議采用三氯乙酸沉淀。對赤蘚糖醇含量較低（1%）的樣品，建議采用乙腈沉淀。其它情況兩種方法均可。0.22m濾膜過濾后，稀釋至合適的濃度上機測試。12.2 儀器參考條件氨基色譜柱（4.6 mm250 mm，5 m）；柱溫：30；流動相：乙腈:水（80:20，V/V）；流速：1.0mL/m

15、in；進樣量：10L；漂移管溫度：83.5，供參考；霧化氣流速：2.1L/min，供參考。12.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將10L標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（10.4.2）分別注入高效液相色譜儀中，在12.2 所述色譜條件下測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的響應(yīng)值（峰面積），以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度的lg值為橫坐標(biāo)，以響應(yīng)值（峰面積）的lg值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。12.4 試樣溶液的測定將10L試樣溶液（12.1）注入高效液相色譜儀中，在12.2 所述色譜條件下測定試樣的響應(yīng)值（峰面積），通過各個糖醇的色譜峰在色譜圖中的保留時間，確認樣品中的糖醇，根據(jù)峰面積的lg值由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到樣液中木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇的濃度的lg值

16、，將其作為10的冪，得到濃度。平行測定次數(shù)不少于兩次。13 分析結(jié)果的表述試樣中糖醇含量按公式（2）計算： （2）式中：樣品中木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇的含量，單位為質(zhì)量百分數(shù)（）；c： 由標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的樣品中木糖醇、山梨醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；M1：樣品的質(zhì)量，單位為克（g）；M2：水溶液總體積，單位為毫升（mL）。平行測XX果用算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測XX果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留小數(shù)點后兩位。14 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測XX果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。15 其他本方法對木糖醇、山梨糖醇