低劑量輻射后小鼠血清的蛋白質(zhì)組學(xué)研究

1、低劑量輻射后小鼠血清的蛋白質(zhì)組學(xué)研究【關(guān)鍵詞】低劑量輻射二維凝膠電泳質(zhì)譜seruprteeinieafterldseradiatindeptartentfheatlgyandnlgy,thefirstlinialhspitalfjilinuniversity,hanghun130021hina;1natinalenterfbiedialanalysis,beijing100850,hinajexpheatl2022;15(1):191-194近十幾年來(lái)，低劑量輻射的生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)現(xiàn)具有重要的實(shí)際意義，人們將其生物學(xué)效應(yīng)分為兩大類(lèi)，一是興奮效應(yīng)，二是適應(yīng)效應(yīng)。然而，目前對(duì)其作用機(jī)制尚不非常清楚。

2、已有人證明，低劑量輻射后，松果體及免疫細(xì)胞的某些膜抗原、信號(hào)蛋白、周期蛋白等發(fā)生變化，繼而間接或直接地產(chǎn)生免疫刺激作用1-3，但是，國(guó)內(nèi)外有關(guān)低劑量輻射對(duì)造血系統(tǒng)作用機(jī)制的研究報(bào)道還很少。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)研究的興起及其研究技術(shù)的開(kāi)發(fā)和完善，從細(xì)胞蛋白質(zhì)總體程度研究生命的活動(dòng)規(guī)律已成為可能，蛋白質(zhì)是生命功能的直接載體，蛋白質(zhì)翻譯后加工對(duì)功能的影響意義重大，而該領(lǐng)域的研究為基因組所不及。因此，用蛋白質(zhì)組學(xué)方法對(duì)低劑量照射組及假照組的血清蛋白質(zhì)表達(dá)差異進(jìn)展分析，有利于發(fā)現(xiàn)與低劑量輻射作用機(jī)制有關(guān)的蛋白，從細(xì)胞整體程度上動(dòng)態(tài)地研究低劑量輻射對(duì)造血系統(tǒng)的作用機(jī)制，為低劑量輻射的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)和理論基

3、矗材料和方法昆明雄性小鼠體重202g，均購(gòu)自本校動(dòng)物部。共120只，隨機(jī)分為兩組：每組60只，一組為假照射組，另一組給予75gy的x線(xiàn)照射，分別于照射后24、48、72小時(shí)處死。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別處死照射組小鼠20只，對(duì)照組小鼠20只。照射條件深部x線(xiàn)發(fā)活力,電壓200kv,電流10a,濾板0.5u+1.0al,全身照射,靶源與皮膚間隔 212,劑量率12.5gy/in。樣品的制備在處死小鼠前，每只小鼠給予腹腔注射2.5l肝素，2分鐘后進(jìn)展眼球后動(dòng)脈取血。將血漿436g離心，取上清，去掉紅細(xì)胞，再經(jīng)2280g轉(zhuǎn)高速離心取上清，根本去掉血小板。每組將20只小鼠的血清混合，用bradfrd法定量后按一

4、次銀染或考馬斯亮藍(lán)染色的量分裝，-70保存?zhèn)溆?。雙向凝膠電泳凝膠圖像采集與分析染色后的雙向電泳凝膠用凝膠圖象掃描儀aershapharaiabiteh掃描。數(shù)字化圖像文件采用nnlineardynais公司的二維電泳處理軟件iageastert2delite5.0分析，獲得每個(gè)蛋白點(diǎn)的分子量r、等電點(diǎn)pi及相對(duì)含量。差異表達(dá)點(diǎn)的質(zhì)譜鑒定統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果差異表達(dá)點(diǎn)的質(zhì)譜鑒定討論目前人們對(duì)低劑量輻射的作用機(jī)制的研究多集中在對(duì)個(gè)別或少數(shù)蛋白質(zhì)的作用進(jìn)展討論，而低劑量輻射對(duì)機(jī)體的生物效應(yīng)表如今多個(gè)系統(tǒng)和多個(gè)層面，有必要用更高通量的方法全面地分析其發(fā)活力制。因此用蛋白質(zhì)組學(xué)方法對(duì)低劑量照射組及假照射組的血

5、清蛋白質(zhì)表達(dá)差異進(jìn)展分析，從細(xì)胞整體程度上動(dòng)態(tài)地討論低劑量輻射對(duì)造血系統(tǒng)的作用機(jī)制，有利于發(fā)現(xiàn)與低劑量輻射的作用機(jī)制有關(guān)的關(guān)鍵蛋白質(zhì)，為低劑量輻射作用機(jī)制的研究開(kāi)拓的一個(gè)新的研究方法。通過(guò)對(duì)照射組與假照射組血清雙向電泳圖譜比擬發(fā)現(xiàn)，在照射組新出現(xiàn)的蛋白點(diǎn)有4個(gè)，表達(dá)上調(diào)的蛋白點(diǎn)有13個(gè)，表達(dá)下調(diào)的蛋白點(diǎn)有6個(gè)，消失的蛋白點(diǎn)有3個(gè)。某些蛋白質(zhì)點(diǎn)的表達(dá)在不同時(shí)間呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)的變化如11、12、5號(hào)點(diǎn)，這與我們課題組前期工作的結(jié)果6相一致，低劑量輻射對(duì)造血系統(tǒng)的影響在照射后24小時(shí)開(kāi)場(chǎng)出現(xiàn)，在48小時(shí)作用最強(qiáng)，在72小時(shí)后作用逐漸消失。本課題組以往對(duì)低劑量輻射引起生物學(xué)效應(yīng)的研究11,12也反映了細(xì)胞對(duì)

6、低劑量輻射反響過(guò)程的多樣性，它覆蓋了細(xì)胞周期、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞骨架、代謝、應(yīng)激反響等重要的細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程中的多種蛋白質(zhì)表達(dá)的變化。本研究通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)方法對(duì)低劑量輻射后血清蛋白質(zhì)表達(dá)差異進(jìn)展分析，說(shuō)明低劑量輻射使細(xì)胞某些蛋白表達(dá)上調(diào)或下調(diào)分泌入血清或者直接使血液有形成分的蛋白發(fā)生變化，通過(guò)這些蛋白質(zhì)的變化影響各系統(tǒng)功能的改變，產(chǎn)生興奮效應(yīng)和適應(yīng)效應(yīng)。這為低劑量輻射作用機(jī)制的研究提供了一種新的有效的研究手段，從整體程度動(dòng)態(tài)地討論低劑量輻射的作用機(jī)制，進(jìn)而為低劑量輻射的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)和理論基?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1傅海清，鞠桂芝等.電離輻射對(duì)小鼠胸腺細(xì)胞和脾細(xì)胞p53基因rna和蛋白表達(dá)的影響.輻射防

7、護(hù)，2001，vl21，n.2，89-923孟慶勇，陳沙力，劉樹(shù)錚等.低劑量輻射誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞蛋白表達(dá)及生物活性.中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，2000；4：228-2314張群業(yè)，黃秋花，沈樹(shù)紅等.人apl細(xì)胞株nb4不同二維電泳條件對(duì)電泳結(jié)果的影響.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2022;12:401-4056王冠軍，譚業(yè)輝，張福明等，低劑量輻射對(duì)造血系統(tǒng)興奮效應(yīng)的研究.中華血液學(xué)雜志，2001;21，232-2347汪保和.核受體超家族介導(dǎo)基因調(diào)控的分子機(jī)制.生理科學(xué)進(jìn)展,2022;34:369-3729高坤,孫偉.雌激素與腎臟疾病的研究進(jìn)展.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2022;5:738-74110劉鵬，僑新民，張嘉慶等.男性乳腺發(fā)育與相關(guān)激素及雌孕激素受體之間關(guān)系的臨床研究.中華普通外科雜志,2000;15:951-96111anggj,ail.indu